第十三章化妆品微生物

1、第十三章第十三章 化妆品微生物化妆品微生物 化妆品微生物污染的来源、种类及意义化妆品微生物污染的来源、种类及意义 化妆品生境特性化妆品生境特性 化妆品微生物检测与卫生标准化妆品微生物检测与卫生标准 化妆品微生物研究前景化妆品微生物研究前景 化妆品微生物污染及预防化妆品微生物污染及预防 化妆品生境特征化妆品生境特征 2. 蛋白质、淀粉等蛋白质、淀粉等6. 防腐剂防腐剂1. 水水 3. pH值值 (47)4. 油、石蜡等无水的脂类不支持微生物生长。油、石蜡等无水的脂类不支持微生物生长。5. 脂肪酸、醇、酯等可以抑制微生物生长。脂肪酸、醇、酯等可以抑制微生物生长。 1. 化妆品微生物污染途径化妆品微

2、生物污染途径 化妆品微生物来源、种类及卫生学意义化妆品微生物来源、种类及卫生学意义 2.2.化妆品污染常见微生物及其危害化妆品污染常见微生物及其危害1. 化妆品微生物污染途径化妆品微生物污染途径 化妆品原料和添加剂中的微生物在适宜温度、化妆品原料和添加剂中的微生物在适宜温度、湿度和酸碱度等条件下大量繁殖，造成的污湿度和酸碱度等条件下大量繁殖，造成的污染。染。 一次污染：化妆品在制造过程中产生的污染。一次污染：化妆品在制造过程中产生的污染。 二次污染：化妆品在运输、贮藏、销售和使二次污染：化妆品在运输、贮藏、销售和使用过程中造成的污染用过程中造成的污染一次污染一次污染依据依据化妆品生产企业卫生规

3、范化妆品生产企业卫生规范：化妆品生产车间洁净度为化妆品生产车间洁净度为级；级；生产水质要求达到生活饮用水卫生标准；生产水质要求达到生活饮用水卫生标准；还规定了生产过程中空气和工作台面的微生还规定了生产过程中空气和工作台面的微生物数量限值。物数量限值。违反此规范，易造成产品一次污染。违反此规范，易造成产品一次污染。一次污染一次污染1. 生产设备生产设备2. 原料原料3. 生产环境及包装生产环境及包装4. 人员人员原原 料料 原料是重要污染源，常被微生物污染。原料是重要污染源，常被微生物污染。 尤其是天然动植物成分和提取物，营养成分尤其是天然动植物成分和提取物，营养成分丰富，使微生物易于繁殖。丰富

4、，使微生物易于繁殖。 一些原料本身也有微生物分布。一些原料本身也有微生物分布。 增稠剂、成膜剂增稠剂、成膜剂( (胶乳等胶乳等) )、粉体、粉体( (滑石粉和高滑石粉和高岭土等岭土等) )、色素、离子交换水和表面活性剂等、色素、离子交换水和表面活性剂等较易受微生物污染。较易受微生物污染。 微生素的添加有利于微生物生长。微生素的添加有利于微生物生长。 油脂、脂肪酸、香料和酸碱污染较少。油脂、脂肪酸、香料和酸碱污染较少。生产环境生产环境 地面微生物地面微生物 尘埃尘埃 空气中微生物空气中微生物 工作人员的生产活动工作人员的生产活动 生产环境中微生物分布与产品污染相关生产环境中微生物分布与产品污染相

5、关 车间空气净化车间空气净化包包 装装 化妆品生产中产品易被污染的环节化妆品生产中产品易被污染的环节 容器容器 空气中微生物污染空气中微生物污染 储运储运 与化妆品直接接触的刷子、海绵和内塞等与化妆品直接接触的刷子、海绵和内塞等操作人员操作人员 人是化妆品生产中重要污染源之一。人是化妆品生产中重要污染源之一。 人的衣服、皮肤、肠道和呼吸道中存在微生物。人的衣服、皮肤、肠道和呼吸道中存在微生物。 皮肤病和其它传染病皮肤病和其它传染病 人头皮上为微生物数量高达人头皮上为微生物数量高达1.4108cfu/cm2. 工作服和口罩等工作服和口罩等二次污染二次污染 包装设计不合理。包装设计不合理。 运输中

6、包装损坏。运输中包装损坏。 使用方法不当。使用方法不当。 国外报道眼影粉、眼线液等细菌污染国外报道眼影粉、眼线液等细菌污染102103cfu/g; 睫毛油使用中污染率可达睫毛油使用中污染率可达60%。 与化妆品直接接触的刷子、海绵和内塞等反复使用，与化妆品直接接触的刷子、海绵和内塞等反复使用，可将皮肤微生物带入化妆品中。可将皮肤微生物带入化妆品中。2. 化妆品污染的常见微生物及其危害化妆品污染的常见微生物及其危害 P1 化妆品污染最多是腐败菌。化妆品污染最多是腐败菌。 细菌以革兰阴性杆菌为主，如大肠埃希菌、细菌以革兰阴性杆菌为主，如大肠埃希菌、假单胞菌、变形杆菌、克雷伯菌和肠杆菌等，假单胞菌、

7、变形杆菌、克雷伯菌和肠杆菌等，也有葡萄球菌、链球菌和芽孢杆菌。也有葡萄球菌、链球菌和芽孢杆菌。 常见霉菌有青霉、曲霉、芽枝霉等。常见霉菌有青霉、曲霉、芽枝霉等。 污染使产品变质，并可致病。污染使产品变质，并可致病。 霜膏剂：污染率最高，微生物种类最多。霜膏剂：污染率最高，微生物种类最多。 洗护类：假单胞菌、金葡菌等。洗护类：假单胞菌、金葡菌等。 粉类：蜡样芽孢杆菌较多。粉类：蜡样芽孢杆菌较多。 美容类：口红、胭脂、眉笔等。经过高温熔美容类：口红、胭脂、眉笔等。经过高温熔化，未用前很少含菌。但污染后，危害较大化，未用前很少含菌。但污染后，危害较大。2. 化妆品污染的常见微生物及危害化妆品污染的常

8、见微生物及危害 P22. 化妆品污染的常见微生物及危害化妆品污染的常见微生物及危害 P3 污染后使商品失去使用价值。污染后使商品失去使用价值。 污染后危害健康污染后危害健康污染致变色、产气、腐败，刺激皮肤引起炎污染致变色、产气、腐败，刺激皮肤引起炎症症葡萄球菌和溶血性链球菌引起毛囊炎、疖、葡萄球菌和溶血性链球菌引起毛囊炎、疖、痈、脓肿甚至败血症。痈、脓肿甚至败血症。铜绿假单胞菌感染可致全身播散，危及生命。铜绿假单胞菌感染可致全身播散，危及生命。2. 化妆品污染的常见微生物及危害化妆品污染的常见微生物及危害 P4 化妆品污染国内外均有很多报道。化妆品污染国内外均有很多报道。 60年代法国卤化双酚

9、类毒素污染致儿童死亡年代法国卤化双酚类毒素污染致儿童死亡 70年代假单胞菌污染睫毛膏致失明。年代假单胞菌污染睫毛膏致失明。 我国我国1985年开始对化妆品进行检查，细菌染菌率达年开始对化妆品进行检查，细菌染菌率达47.2%，霉菌，霉菌60%。 1990年后，微生物污染有所下降。年后，微生物污染有所下降。 与化妆品有关的皮肤病已成为常见皮肤病和消费者投与化妆品有关的皮肤病已成为常见皮肤病和消费者投诉热点。诉热点。化妆品中常见微生物化妆品中常见微生物产品产品污染菌污染菌cfu/g(ml)护手霜护手霜铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌1.2103睫毛油睫毛油嗜麦芽假单胞菌嗜麦芽假单胞菌7.0105洗面奶洗面奶

10、类产碱假单胞菌类产碱假单胞菌3.1104发乳发乳类产碱假单胞菌类产碱假单胞菌1.9104发油发油荧光假单胞菌荧光假单胞菌4.0104啫哩膏啫哩膏恶臭假单胞菌恶臭假单胞菌2.5104保湿霜保湿霜奥斯陆莫拉菌奥斯陆莫拉菌1.3103牙膏牙膏阴沟肠杆菌阴沟肠杆菌2.3105牙粉牙粉产气肠杆菌产气肠杆菌3.4106 化妆品微生物的检测与卫生标准化妆品微生物的检测与卫生标准1. 化妆品微生物的检验化妆品微生物的检验2. 化妆品微生物卫生标准化妆品微生物卫生标准1. 化妆品微生物的检测化妆品微生物的检测 菌落总数的测定菌落总数的测定 霉菌和酵母菌数的测定霉菌和酵母菌数的测定 特定菌的检验的检测特定菌的检验

11、的检测铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 化妆品检验的几个特点化妆品检验的几个特点 1.1.菌落总数的测定菌落总数的测定 菌落总数：对化妆品检样经过处理，在菌落总数：对化妆品检样经过处理，在一定条件一定条件(如培养基成分、培养温度、如培养基成分、培养温度、培养时间、培养时间、pH值、需氧性质等值、需氧性质等)下培养下培养后，在后，在1g或或1ml检样中检出菌落的总数。检样中检出菌落的总数。2.2.霉菌和酵母菌数的测定霉菌和酵母菌数的测定 是指对化妆品检样经过处理，在一定是指对化妆品检样经过处理，在一定条件（如培养基成分、培养温度、培条件（如培养基成分、培养温度、培养时间、养时

12、间、pH值、需氧性质等）下培养值、需氧性质等）下培养后，后，1g或或1ml检样所污染的活的霉菌检样所污染的活的霉菌和酵母菌数量。和酵母菌数量。3. 特定菌的检验的检测特定菌的检验的检测 绿脓杆菌绿脓杆菌 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌绿脓杆菌绿脓杆菌 绿脓杆菌（绿脓杆菌（P. aeruginosa）（铜绿假单胞菌）（铜绿假单胞菌）在自然界分布甚广，见于空气、水、土壤、在自然界分布甚广，见于空气、水、土壤、正常人皮肤、肠道和呼吸道，是常见致病菌正常人皮肤、肠道和呼吸道，是常见致病菌之一。致病力较低但抗药性强的杆菌，常引之一。致病力较低但抗药性强的杆菌，常引起伤口感染。起伤口感染。 常引起人皮肤化脓

13、感染，特别是烧伤、烫伤、常引起人皮肤化脓感染，特别是烧伤、烫伤、眼部疾病患者被感染后，常使病情恶化，并眼部疾病患者被感染后，常使病情恶化，并可引起败血症。可引起败血症。铜绿假单胞菌检测步骤铜绿假单胞菌检测步骤 (1) (1) 增菌培养增菌培养(2) (2) 分离培养分离培养(3) (3) 染色镜检染色镜检(4) (4) 氧化酶试验氧化酶试验(5) (5) 绿脓菌素试验绿脓菌素试验(6) (6) 硝酸盐还原产气试验硝酸盐还原产气试验(7) (7) 明胶液化试验和明胶液化试验和4242生长试验生长试验 铜绿假单胞菌检测铜绿假单胞菌检测 -11. 增菌培养增菌培养 取取 1 1 0 稀 释 的 样

14、品稀 释 的 样 品 1 0 m l ， 加 到， 加 到 9 0 ml SCDLP液体培养基中，置液体培养基中，置37培养培养1824h。如有绿脓杆菌生长，培养液表面多有。如有绿脓杆菌生长，培养液表面多有一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。铜绿假单胞菌检测铜绿假单胞菌检测 -2 2. 分离培养分离培养 从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种在十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上，置在十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上，置37培养培养1824h。 凡绿脓杆菌在此培养基上，其菌落扁平，向凡绿脓杆菌在此培养基上，其菌落扁平，向周边扩散

15、或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩散有水溶性色素，白色，菌落周围培养基常扩散有水溶性色素，此培养基选择性强，大肠埃希氏菌不能生长，此培养基选择性强，大肠埃希氏菌不能生长，革兰氏阳性菌生长较差。革兰氏阳性菌生长较差。3. 染色镜检：挑取可疑的菌落，涂片，革兰染色镜检：挑取可疑的菌落，涂片，革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性者应进行氧化氏染色，镜检为革兰氏阴性者应进行氧化酶试验。酶试验。 4. 氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取绿脓放在灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取绿脓杆菌可疑菌

16、落涂在滤纸片上，然后在其上杆菌可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的滴加一滴新配制的1二甲基对苯二胺试液，二甲基对苯二胺试液，在在1530s之内，出现粉红色或紫红色时，之内，出现粉红色或紫红色时，为氧化酶试验阳性，若培养物不变色，氧为氧化酶试验阳性，若培养物不变色，氧化酶试验阴性。化酶试验阴性。 铜绿假单胞菌检测铜绿假单胞菌检测 - 3,4 铜绿假单胞菌检测铜绿假单胞菌检测 -5-5 5. 绿脓菌素试验：取可疑菌落绿脓菌素试验：取可疑菌落23个，分别接种在绿个，分别接种在绿脓菌素测定用培养基上，置脓菌素测定用培养基上，置37培养培养24h，加入氯，加入氯仿仿35ml，充分振荡使培养物

17、中的绿脓菌素溶解于，充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液内，待氯仿提取液呈蓝色时，用吸管将氯仿氯仿液内，待氯仿提取液呈蓝色时，用吸管将氯仿移到另一试管中并加入盐酸移到另一试管中并加入盐酸1ml左右，振荡后，静左右，振荡后，静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性，表示被检物中有绿脓菌素存在。阳性，表示被检物中有绿脓菌素存在。6. 硝酸盐还原产气试验：挑取被检的纯培养物，硝酸盐还原产气试验：挑取被检的纯培养物，接种在硝酸盐蛋白胨水培养基中，置接种在硝酸盐蛋白胨水培养基中，置37培培养养24h，观察结果。凡在硝酸盐胨水培养基，观察结果。凡在

18、硝酸盐胨水培养基内的小倒管中有气体者，即为阳性，表明该内的小倒管中有气体者，即为阳性，表明该菌能还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氮菌能还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氮气。气。铜绿假单胞菌检测铜绿假单胞菌检测 -6,7-6,7 铜绿假单胞菌检测铜绿假单胞菌检测 -8-8 7. 明胶液化试验，取绿脓杆菌可疑菌落的纯培明胶液化试验，取绿脓杆菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置养物，穿刺接种在明胶培养基内，置37培培养养24h，取出放冰箱，取出放冰箱1030min，如仍呈溶解，如仍呈溶解状时即为明胶液化试验阳性，如凝固不溶者状时即为明胶液化试验阳性，如凝固不溶者为阴性。为阴性。8. 42

19、生长试验：挑取纯培养物，接种在普通生长试验：挑取纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，放在琼脂斜面培养基上，放在4142培养箱中，培养箱中，培养培养2448h，绿脓杆菌能生长，为阳性，而，绿脓杆菌能生长，为阳性，而近似的荧光假单胞菌则不能生长。近似的荧光假单胞菌则不能生长。检验结果报告检验结果报告 被检样品增菌分离培养后，经证实为革兰氏被检样品增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出有绿脓杆菌。者，即可报告被检样品中检出有绿脓杆菌。 如绿脓菌素试验为阴性，而液化明胶、硝酸如绿脓菌素试验为阴性，而液化明胶

20、、硝酸盐还原产气和盐还原产气和42生长试验三者皆为阳性时，生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中有绿脓杆菌。仍可报告被检样品中有绿脓杆菌。金黄色葡萄球菌的检测金黄色葡萄球菌的检测葡萄球菌主要引起两类疾病葡萄球菌主要引起两类疾病: 化脓性炎症：如疖、痈、蜂窝组织炎、伤口化脓、化脓性炎症：如疖、痈、蜂窝组织炎、伤口化脓、败血症、脓毒血症等。败血症、脓毒血症等。 毒素性疾病：如食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒毒素性疾病：如食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征。近年来，凝固酶阴性的葡萄球菌引性休克综合征。近年来，凝固酶阴性的葡萄球菌引起的创伤感染、尿路感染和体外感染也逐渐增多。起的创伤感染、尿

21、路感染和体外感染也逐渐增多。金黄色葡萄球菌的检测金黄色葡萄球菌的检测血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验 原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，附着在细菌的表面，形成凝块；或作用于血附着在细菌的表面，形成凝块；或作用于血浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使抗凝的血浆发生凝固现象抗凝的血浆发生凝固现象,呈现阳性。呈现阳性。血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验玻片法玻片法 取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加

22、一滴兔（人）血浆，挑取菌落分另一端滴加一滴兔（人）血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，别与生理盐水和血浆混合，5 min内，如血内，如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊，则为阳性；如两者呈均匀混浊，均匀混浊，则为阳性；如两者呈均匀混浊，无凝固则为阴性。无凝固则为阴性。试管法试管法 空白对照管的血浆流动自如，阳性对照管血空白对照管的血浆流动自如，阳性对照管血浆凝固，试验管血浆凝固者为阳性；均无凝浆凝固，试验管血浆凝固者为阳性；均无凝固则为阴性。固则为阴性。4. 化妆品检验的特点化妆品检验的特点 样品的前处理：对于一些油性样品，要先加入样品的

23、前处理：对于一些油性样品，要先加入液体石蜡混匀，再加入液体石蜡混匀，再加入Tween-80使之均质化，使之均质化，然后加生理盐水稀释；亲水性的样品可以直接然后加生理盐水稀释；亲水性的样品可以直接用生理盐水稀释用生理盐水稀释 中和防腐剂的抑菌作用：需要加入相应的中和中和防腐剂的抑菌作用：需要加入相应的中和剂，如使用含酚类防腐剂的化妆品，可在培养剂，如使用含酚类防腐剂的化妆品，可在培养基中加入卵磷脂和基中加入卵磷脂和Tween-80以消除抑菌作用。以消除抑菌作用。 培养基的高营养成分：目前推荐的菌落总数测培养基的高营养成分：目前推荐的菌落总数测定和增菌用培养基是卵磷脂、定和增菌用培养基是卵磷脂、T

24、ween-80、大豆、大豆、及酪蛋白消化培养基（及酪蛋白消化培养基（SCDLP）或卵磷脂、）或卵磷脂、Tween-80营养琼脂培养基。营养琼脂培养基。化妆品微生物菌落总数控制标准化妆品微生物菌落总数控制标准 我国卫生部我国卫生部2003年实施的化妆品卫生规范年实施的化妆品卫生规范:1. 眼部及口唇化妆品及婴儿和儿童化妆品细菌眼部及口唇化妆品及婴儿和儿童化妆品细菌菌落总数菌落总数500cfu/g(ml)2.其他化妆品菌落总数是其他化妆品菌落总数是1000cfu/g(ml)3.每克或每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、每克或每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。铜绿假单胞菌和金

25、黄色葡萄球菌。4.霉菌和酵母菌总数霉菌和酵母菌总数100 cfu/g(ml)化妆品微生物菌落总数控制标准化妆品微生物菌落总数控制标准 类型类型美国美国(CTFA)英国英国(TPE) 欧洲共同欧洲共同体体(EEC)中国中国儿童用儿童用化妆品化妆品500100100500眼部化眼部化妆品妆品500100100500其他化其他化妆品妆品1000100010000.5 m尘粒的平均数：尘粒的平均数：级级 350粒粒/L; 级级 3500粒粒/L 常采用紫外线和过滤方法消除空气微生物。常采用紫外线和过滤方法消除空气微生物。二次污染的预防二次污染的预防 告知消费者化妆品减少微生物污染的使用方法。告知消费者化妆品减少微生物污染的使用方法。 洗净取化妆品手指，用后盖好。洗净取化妆品手指，用后盖好。 毛刷和粉扑等经常清洗，保持