细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法

1、细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法、常用培养基1、 LB 培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用INNaOH（? 1ml ）调整pH至7.0 ，再补足水至1L 。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L, 上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。2 、 SOB 培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L 氯化钾2.5ml用水补足体积到1ml 灭过菌的1L。分成 100ml1mol/L 氯化镁。的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加3、 SOC培 养基成分、方法同SOB 培养基的配制，只

2、是在培养基冷却到室温后，除了在每加 1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁外，再加2ml 灭菌的1mol/L 葡萄糖（用水补足到100ml ，用 0.22um 的滤膜过滤除菌）。18g100ml 的小份中葡萄糖溶于足够水中，再4、 TB培养基将下列组分溶解在0.9L 水中 :蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60 C,再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4 中，使终体积为 100ml 。高压灭菌或用的溶液（ 2.31g 的 KH2PO40.22um 的滤膜过滤除菌）。和12.54gK2HPO4溶在足量的水5、2X Y 培

3、养基将下列组分溶解在0.9L 水中 :蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用INNaOH ( ? 1ml ) 调整 pH 至 7.0 ，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L, 上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L 。6、 YPD 培 养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L 后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加 1.6g色氨酸，因为YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g 琼脂粉。二、常用抗生素 氨苄青霉素 ( ampicillin )( 100mg/ml

4、)溶解 1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml 。分装成小份于 -20 C 贮存。常以25ug/ml? 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素 ( carbenicillin )( 50mg/ml )溶解 0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至以10ml 。分装成小份于 -20C 贮存。常25ug/ml ?50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林 ( methicillin )(100mg/ml )溶解 1g 甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至 10ml 。分装成小份于 -20C 贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml 氨苄 青霉素一

5、起添加于生长培养基。卡那霉素 ( kanamycin)(10mg/ml )溶解 0.1g 卡那霉素于足量的水中，最后定容至 10ml 。分装成小份于 -20C 贮存。常以10ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。氯霉素 (chloramphenicol)(25mg/ml )溶解 0.25g 氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至 12.5ug/ml ? 25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。链霉素 (streptomycin)(50mg/ml )溶解 0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至常以 10ug/ml ? 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸

6、( nalidixicacid)(5mg/ml )溶解 0.05g 萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至15ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。10ml 。分装成小份于 -20 C 贮存。常以10ml 。分装成小份于 -20 C 贮存。10ml 。分装成小份于 -20 C 贮存。常以四环素（ tetracyyline）（ 10mg/ml ）溶解 0.1g 四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml 。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20 C 贮存。常以10ug/ml ? 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。小技巧：如配制10mg/ml卡那霉素，

7、先在盐水瓶或血清瓶加入10ml双蒸水，高压，冷却后加入0.1g卡那霉素，混匀，滤膜过滤到试管中，再以1ml/ 管分装到EP管中待用。抗生素储存液工作浓度（mg/ml ）保存条件严紧型质粒（ ug/ml ）松驰型质粒 （ ug/ml ）氨苄青霉素 50 （溶于水 ）-20 C20 60 羧苄青霉素50（溶于水 ） -20 C 2060氯霉素 34（溶于乙醇 ） -20 C 25170 卡那霉素 10（溶于水 ） -20 C1050 链霉素 10（溶于水 ）-20 C 1050四环素 5（溶于甲醇 ） -20 C 1050抗生素储存液工作浓度 （mg/ml ） 保存条件严紧型质粒松驰型质粒（ug/ml ）（ug/ml ）氨卞冃霉素50（溶于水 ）-20 C2060羧苄青霉素50（溶于水 ）-20 C2060氯霉素34（溶于乙醇 ）-20C25170卡那霉素10（溶于水 ）-20C1050链霉素10（溶于水 ）-20C1050四环素5（溶于甲醇 ）-20C1050利福平配法：浓度： 50 mg/ml配制量： 50ml配制方法：1 ?称取 2.5g利福平置于 50ml 塑料离心管中。2