大肠癌患者β－内啡肽、P物质、血管活性肠肽含量测定

1、    大肠癌患者内啡肽、P物质、 血管活性肠肽含量测定        胃肠肽类的研究已有不少进展，脑肠肽是具有特殊生物作用的活性物质，目前已知的脑肠肽已有数十种，其生理作用相当复杂，为研究大肠癌患者粘膜、血清中某些肽类的变化，我们应用放射免疫法联合测定大肠癌患者粘膜及血清中内啡肽(EP)、P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)含量，以探讨它们之间的变化关系及临床意义。 一、材料与方法1.对象：门诊及住院的中、晚期大肠癌患者46例，男27例，女19例，平均年龄49.

2、5岁，全部患者均经病理确诊；健康人39例，男28例，女11例，平均年龄51.2岁，肠镜下未见异常，无消化道或其它器质性病变。2.试剂：EP试剂盒购于北京华英放射免疫所，为美国INCSAR公司产品，批号为46065，SP、VIP为北京华英放射免疫研究所产品。3.方法：(1)肠镜检查按常规进行，大肠癌患者取距癌周围1cm以内粘膜4块，正常对照组取距肛门30cm粘膜4块，立即放入液氮中贮存、待测。同时抽取静脉血3ml，分离血清，20保存。(2)将组织从液氮中取出，立即解冻，称重后于煮沸的生理盐水(1ml)中继续煮沸3min，再加1N冰醋酸0.5ml于匀浆器中匀浆提取，再用1NNaOH0.5ml中和，

3、低温离心3000rmin，30min后，取上清待测。(3)每1ml血清加2ml冷丙酮(4±)，混匀，4离心，2000rmin，20min后取上清加4ml冷石油醚，混匀后再次离心，吸弃上相，下相用电扇将残余丙酮吹掉后，所余液体用冷冻抽干机抽干，20保存待测。(4)EP、SP、VIP均用放射免疫法测定，由专人同时用同一仪器盲法测定，具体操作按说明书进行。表1大肠癌患者血清中EP、SP、VIP测定结果(ngL)分组例数EPSPVIP大肠癌组46对照组39P值注：内啡肽；SP：P物质；VIP：血管活性肠肽 表2大肠癌患者粘膜中EP、SP、VIP测定结果(ngL)分组例数EPSPVIP大肠癌组

4、46对照组39P值注：内啡肽；SP：P物质；VIP：血管活性肠肽 4.统计学分析：测定值用均数±标准差，两组均数比较采用t检验，粘膜与血清间EP、SP、VIP及EP、SP、VIP间相关，采用直线相关分析。二、结果1.大肠癌患者血清中EP、SP、VIP结果，见表1。46例大肠癌患者血清中EP与正常对照组比较明显降低，P<0.01；SP、VIP与正常对照组比较明显升高，P<0.01。2.大肠癌患者粘膜中EP、SP、VIP结果，见表2。46例大肠癌患者粘膜中EP与正常对照组比较明显降低，P<0.01；SP、VIP与正常对照组比较明显升高，P<0.01。3.大肠癌患者

5、粘膜与血清中EP、SP、VIP相关性，粘膜与血清中三种物质的变化呈正相关，相关系数分别为0.4673，0.7211，0.6034，P<0.01。4.大肠癌患者粘膜与血清中EP与SP含量呈负相关，相关系数分别为r=0.4437，r=0.4921，P<0.01。5.大肠癌患者粘膜与血清中EP与VIP无明显相关性，相关系数为r=0.2115，r=0.3007，P>0.05。6.大肠癌患者粘膜与血清中SP与VIP含量呈正相关，r=0.4721，r=0.5034，P<0.01。讨论近年来，发现内源性阿片肽与机体肿瘤的发生、生长、分化等过程密切相关。EP为重要的内源性阿片肽，在机体

6、肿瘤的发生机制与发展过程中有着重要作用。关于大肠癌患者机体内EP变化，特别是粘膜中的变化研究尚少，我们采用放射免疫分析方法研究了大肠癌患者粘膜及血清中EP含量，结果显示，粘膜及血清中EP明显低于正常对照组。研究表明，许多肿瘤细胞存在着EP及其受体。认为EP与肿瘤的病理机制有关。国内学者应用二甲肼诱发大鼠大肠癌模型，观察了诱癌过程中iEP含量变化，结果显示，肿瘤组动物血浆iEP含量明显升高，说明EP与大肠癌的病理过程密切相关，并观察到肿瘤组动物血浆iEP含量升高以早、中期为明显，而晚期组血浆iEP升高不明显1。本组所研究的均为中、晚期大肠癌患者，提示肿瘤的发生过程可能与机体EP合成及分泌不足有关

7、。EP对肿瘤细胞的影响，主要通过调节机体的免疫系统功能直接作用于肿瘤细胞的相应受体而发挥作用。关于EP对机体肿瘤细胞的作用，目前有两种不同观点。一种认为EP可抑制肿瘤细胞的生长，另一种则认为EP具有促进肿瘤细胞生长的作用2。EP对机体免疫功能亦有双向调节作用，可影响抗体的合成、淋巴细胞增殖及NK细胞的杀伤作用。本研究表明，大肠癌患者粘膜、血清中EP含量明显降低，说明机体在肿瘤生长时，神经肽分泌减少或不足，抗肿瘤作用减弱，实验研究发现粘膜及血清中EP含量个体差异较大，有必要进一步探讨EP在整个大肠癌发生发展过程中的变化情况及所起作用。脑肠肽具有调节胃肠道功能的作用，包括免疫调节和对发生肿瘤的影响

8、。脑肠肽对胃癌细胞和肠上皮化生的影响是重要的，体内生物活性肽具有多种生理功能，是机体调节代谢和协调器官功能的主要化学信息，脑肠肽既存在于胃肠道粘膜，也存在于神经系统，这些肽类包括SP、VIP、PP(胰多肽)、NT(神经降压类)、PYY(肽YY)等，它们对神经系统和胃肠功能调节起重要作用，免疫组织化学和放免技术已证实胃肠道细胞具有分泌SP、VIP的细胞。本研究结果显示大肠癌患者粘膜、血清中SP、VIP明显升高，且粘膜和血清中含量呈正相关，说明大肠癌组织直接或间接影响血清使SP、VIP升高，其机制可能由于大肠癌使胃肠分泌和蠕动功能异常，并通过神经体液从而使胃肠道分泌SP、VIP亢进，导致粘膜、血清

9、中这类物质含量增高3。也可能类似于肿瘤标记的变化。本组均为中、晚期大肠癌，早期大肠癌变化尚需研究。通过46例大肠癌患者血清及粘膜中EP与SP、EP与VIP，SP与VIP相关性研究，表明EP与SP呈负相关，EP与VIP无相关，SP与VIP呈正相关，说明EP与SP在体内分泌具有相互抑制及拮抗作用，SP与VIP具有相互促进作用，其具体机制有待我们进一步研究。三种物质的分泌机制，以及三者与肿瘤细胞生长、增殖、分化、调控和肿瘤生物学行为之间关系的认识，目前已深入到细胞分子生物学水平，VIP受体已应用于临床，有可能成为判断或诊断大肠癌的一个指标。作者单位：王秀敏（132021吉林市吉化集团总医院消化内科）

10、付春彬（132021吉林市吉化集团总医院消化内科）李凤霞（132021吉林市吉化集团总医院消化内科）董洪林（132021吉林市吉化集团总医院放射科）参考文献1，王元和，陈腾，王育红.二甲肼诱发大鼠大肠癌时血浆内啡肽样免疫活性物质含量的变化.第二军医大学学报，1994，15：8890.2，Tejwani GA,Gudehithlu KP,Hanissian SH.Facilliation of dimethylbenz anthracene induce rat mammary tumor genesis by restraint stress:a role of endorphin, proluctiandnaltrexone.Carcinogenesis,1991,12:637641.3，She