实验计数法测定细胞生长曲线_第1页
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文档简介

1、实验内容：计数法测定细胞生长曲线实验目的：学习细胞计数的方法；熟悉测定生长曲线的基本原理、方法，了解其应用。实验原理：一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后度过长短不一的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期，在达到饱和密度后，细胞停止生长，进入平顶期，然后退化衰老。典型的生长曲线即可分为潜伏期、指数生长期、平顶期及退化衰老四个部分，其中的三个不同生长时相（潜伏期、指数生长期和平顶期）是每个细胞系所共有的特征。通过测定生长曲线，不仅可以了解培养细胞生物学特性的基本参数、测定细胞绝对生长数、判断细胞活力，而且也可用于测定药物等外来因素对细胞生长的影响。本实验采用计数法测定细胞生长曲线，通过连续

2、对细胞计数（通常为7d，一般应每次计数3瓶细胞取平均值），然后以存活细胞数对培养时间作图，即得该种细胞的生长曲线。仪器、材料和试剂：1、 仪器：CO2 培养箱、超净工作台、倒置显微镜、血球计数板2、 材料：培养瓶、试管、吸管、移液管、废液缸、HeLa细胞、盖玻片、酒精 灯3、 试剂：培养基（含小牛血清）、%胰蛋白酶实验步骤：1、 细胞悬液制备：取生长良好接近汇合的HeLa细胞，胰酶消化，再加新鲜培养基制成细胞悬液后计数。2、 接种：根据细胞计数结果，按每瓶5×104个接种细胞（加3mL×104个）作传代培养（理论上应该每人接种21瓶细胞，每天取3瓶计数，但实际每人只接种7瓶

3、）。3、 计数：24h后开始作细胞计数，以后每隔24h计数一次，连续计数7天。4、 绘图：根据计数结果，绘制HeLa细胞生长曲线。结果与讨论：1、 细胞计数结果如下：天数01234567细胞数（万/瓶）12246693321318210细胞数（万/mL）482231107106702、 绘制生长曲线如下： 3、分析与讨论 由上图可以看出，实际所得生长曲线与理论生长曲线有一定差距，主要表现在潜伏期和倍增时间不明显。这可能是由于计数误差造成的。 、理论上应该每人接种21瓶细胞，每天取3瓶计数，但实际每人只接种8瓶，每天仅计数一瓶细胞，无平行样品取平均值来消除误差。 、每瓶细胞也没有重复计数2-3次。 、未做染色，有时死活细胞区分不清

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