甲硝唑结肠缓释片的药代动力学研究

1、甲硝唑结肠缓释片的药代动力学研究甲硝唑结肠缓释片的药代动力学研究孙备*柏俊吕凌陆忠祥(安徽省药物研究所,合肥230022)摘要:目的:研究甲硝唑结肠缓释片的缓释特征和结肠靶向特征.方法:采用家犬考察甲硝唑结肠缓释片口服后的血药浓度变化,并与甲硝唑普通片进行比较.采用大鼠口服受试药物,考察药物在大鼠消化道各段的释放情况.结果:结肠缓释片的Cmax为4.942.79ugml-1,Tmax为12.70.5h,T1/2为5.654.5h,MRT为16.655.1h,AUC0-为36.0912.81ughml-1,AUC0-为37.6311.92ughml-1.与普通片比较,Cmax显著降低,Tmax显

2、著延长,显示出缓释效果.大鼠口服甲硝唑结肠缓释片后主要在结肠段释放药物,在胃和其他肠段基本无药物释放.结论:甲硝唑结肠缓释片具有结肠靶向和缓释的特征.关键词:甲硝唑;结肠定位;缓释;药代动力学中图分类号文献标识码文章编号PharmacokineticStudyofMetronidazoleColon-specificSustained-releaseTabletsSUNBei,BAIJun,LULin,LUZhong-xiang(AnhuiInstituteofMateriaMedica,Hefei230022,China)ABSTRACT:OBJECTIVE:Tostudythesustai

3、ned-releaseandcolon-specificcharacteristicsofMetronidazoleColon-specificSustained-releaseTablets.METHODS:Themetronidazoleconcentrationsindogbloodandthemetronidazolecontentineachgastrointestinalsegmentsweredeterminedafteri.g.thedrug,thenormalmetronidazoletabletwastestedatsametimeasacomparison.RESULTS

4、:TheCmaxofthistabletswas4.942.79ugml-1,theTmaxandT1/2ofthistabletswere12.70.5hand5.654.5h,MRTwas16.655.1h;AUC0-andAUC0-were36.0912.81ughml-1and37.6311.92ughml-1respectively.Comparedwithnormaltablets,themetronidazolecolon-specificsustained-releasetabletshowedlowerCmaxandlongerTmaxwhicharethecharacter

5、isticsofsustained-releasetablets.Afteri.g.themetronidazolecolon-specificsustained-releasetabletstorats,metronidazolereleasedmostlyincolon.CONCLUSION:Thesustained-releaseandcolon-specificcharacteristicsofMetronidazoleColon-specificSustained-releaseTabletswereobvious.KEYWORDS:Metronidazole;Colon-speci

6、fic;Sustained-release;Pharmacokinetics作者简介(通讯作者):孙备,男,副研究员,通讯地址:安徽省合肥市黄山路202号安徽省药物研究所,邮编:230022,Tel13955147703,E-mail:sunbei888甲硝唑结肠缓释片为一种新颖的治疗结肠炎的定位缓释制剂,已获得国家发明专利授权1.本制剂采用了结肠定位和缓释两种技术,可以使甲硝唑在结肠中定位缓慢释放并均匀分布于结肠各段,从而有效地治疗结肠炎,并减少甲硝唑因全身吸收而引起的不良反应.甲硝唑结肠缓释片的特点是:一方面将时滞作用和pH依赖作用相结合,有利于药物更加准确地定

7、位到结肠,同时可以使药物在结肠中缓慢释放,以使药物分布到结肠各段.该制剂克服了普通结肠定位速释制剂药物主要释放在结肠前段、灌肠剂和直肠栓药物主要释放在结肠后段的缺点,使药物均匀分布于整段结肠,从而有效地治疗结肠炎.为了验证本制剂的缓释和结肠定位特征,进行了本研究.本研究包括二个部分,第一部分研究甲硝唑结肠缓释片口服后血药浓度变化,并与普通甲硝唑片进行比较,以验证本制剂的缓释特征.第二部分为研究药物口服给予大鼠后在各时间点药物的胃肠道分布情况,以验证药物是否定位到结肠释放.目前本项目已经通过国家药品审评中心的审评,获得了临床研究批件,即将开展临床研究.1试验材料1.1药物甲硝唑结肠缓释片,由安徽

8、省药物研究所提供,质量符合所拟定的有关该品种的质量标准,规格1:每片含缓释甲硝唑200mg(家犬用,与拟上市规格一致),批号为20030112;规格2:每片含缓释甲硝唑10mg(为大鼠给药而特制),批号为20030315.普通甲硝唑片,由安徽省药物研究所提供,质量符合中国药典2000版二部甲硝唑片项下的有关规定,规格1:每片含甲硝唑200mg(家犬用),批号为20030412;规格2:每片含甲硝唑10mg(为大鼠给药而特制),批号为20030316.1.2试剂甲醇,色谱级,江苏百林科技有限公司生产,批号20021217;硫酸锌,分析纯,广东西陇化工厂生产,批号20000602;重蒸馏水,自制.

9、1.3仪器日本岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪,配SPD-10Avp紫外-可见检测器;色谱数据处理系统为N2000色谱工作站,由浙江大学智达信息工程有限公司研制.SY2-A型石英亚沸高纯水蒸馏器80-2型离心沉淀器,上海手术器械厂生产.XW-80A漩涡混合器,上海精科实业有限公司生产.BF2000型氮气吹干仪,上海爱钡尔科技发展有限公司生产.1.4动物家养杂种狗,雌雄兼用,体重1215kg,由安徽省医科大学动物中心提供,试验前进行血常规、血生化和心电等指标检测,确定为健康狗后进行试验.Wistar大鼠,雌雄兼用,体重300g左右,由安徽省医科大学动物中心提供,许可证号为皖医动准字第02号.

10、方法2.1样品制备将甲硝唑:羟丙基纤维素:微晶纤维素以5:1:2.5混合均匀,用适量黏合剂制粒,干燥后加入适量助流剂和润滑剂,混匀压片.所得片芯用聚丙烯酸树脂EUDRATERS-100的5%乙醇溶液包衣,即得.体外溶出度试验表明,所制得的样品在人工胃液和人工肠液中各2h释放度总和小于1%.在pH值7.8-8.0的人工结肠液中2、4、6、8、10、12、16h的释放度分别为4.8%、21.9%、51.3%、75.3%、85.9%、93.4%和96.4%.2.2家犬口服本品后血药浓度的变化采用单次、二周期、双交叉配对试验,每个周期的间隔为1周.动物给药前禁食12h,早晨给药,第一周其中一组3只动物

11、给予参比普通甲硝唑片(200mg)1片,给药后给予100ml水,继续禁食2h.给药前和给药后20min,40min,1,2,3,5,7,9,13,24h从后肢静脉取血3ml,置于试管中.另一组3只动物给予本缓释片1片(含甲硝唑200mg),给药后给予100ml水,继续禁食2h.给药前和给药后4,6,8,9,10,11,12,13,14,16,20,28,36h从后肢静脉取血3ml,置于试管中.所有的狗休息1周后交叉进行第二次给药.血样立即离心,吸取血清,存放于-22冰冻保存待测.测定各时间点血中甲硝唑的浓度.2.3甲硝唑结肠缓释片在大鼠胃肠道中的释药分布情况研究取体重300g以上的大鼠45只,

12、随机分成普通片组和结肠定位片组,普通片组动物为20只,结肠定位片组为25只.动物禁食12h后开始给药.普通片组动物给予甲硝唑普通片后2、4、6、8h分别处死5只动物,解剖分取胃肠道(胃、小肠、回盲部、结肠),用生理盐水冲洗出其内容物,定容后取一部分离心,上清液处理后测定含量.结肠定位片组动物禁食12h后给予结肠定位片1片,给药后4、8、12、16、20h分别处死动物5只,解剖后分取胃肠道(胃、小肠、回盲部、结肠),用生理盐水冲洗出内容物,定容后取一部分离心,上清液测定含量.2.4血样和肠道内容物样品处理方法参考文献方法2,并经过预试,确定以下血样和肠道内容物样品的处理方法:精密吸取血清或肠道内

13、容物离心上清液0.4ml,加入0.02molL-1硫酸锌的甲醇溶液1ml,涡旋混匀,4000rmin-1离心15min,吸取上清液于另一试管中,37氮气吹干后,精密加入重蒸馏水500ul使溶解,进样20ul(采用进样阀),进行HPLC测定.2.5含量测定方法的确定参考文献方法和样品提取方法、流动相、流速等条件的摸索比较,确定以下的HPLC测定条件用于甲硝唑的血药浓度测定较为合适:ODSC18柱,250*4.6mm,5um,流动相为(甲醇:水)=20:80,检测波长为320nm.2.6含量测定方法学考察分别对空白血清样品,甲硝唑对照品,空白血清加入甲硝唑对照品,动物服药后采集的血清样品进行处理和

14、进样,记录色谱图.结果表明该液相条件下甲硝唑峰分离度符合要求.制得的标准曲线为:A=3517.5C+193.8(n=6,r=0.9990),表明测定的线性范围从62.5ng/ml到18.75ugml-1.测得0.25、6.25、18.75ugml-1三种浓度下的回收率,结果回收率均在75%以上.日内和日间精密度测定结果表明,本测定方法测定结果稳定,在上述三种浓度下的相对标准偏差均在10%以内.对肠道内容物的测定方法也进行了方法学考察,制得的标准曲线为:A=1910.6C+937.22(n=6,r=0.9999),测定范围为0.25ugml-1到75ugml-1.测得1.25、18.75、75u

15、gml-1三种浓度下的回收率,结果回收率均在90%以上.日内和日间精密度测定结果表明,本法测定结果稳定,在此浓度范围内的相对标准偏差均在10%以内.3.结果3.1单次给予甲硝唑结肠缓释片和普通片后甲硝唑血药浓度测定结果狗服用缓释片和普通片后的不同时间血药浓度结果见表1、表2.表1家犬服用甲硝唑普通片后各时间点的血中甲硝唑浓度(ugml-1)时间(h)动物0.330.671235791324A7.0912.9810.2717.6614.9710.338.226.732.640.61B10.6711.5217.6918.1513.3113.1310.556.833.870.70C10.2611.1

16、217.2618.1413.2513.0810.366.523.760.69D0.557.5315.1229.2126.4614.8110.575.892.430.01E0.483.7916.5516.2722.8340.820.19F0.541.036.2814.6817.4614.209.947.513.112.22Mean4.937.9913.8619.0218.0514.279.476.802.770.74s4.994.764.595.175.463.241.420.591.120.78表2家犬服用甲硝唑结肠缓释片后各时间点的血中甲硝唑浓度(ugml-1)时间(

17、h)动物4689101112131416202836A1.892.162.091.872.232.062.1760.390.120.00B1.162.402.943.383.052.492.615.353.092.352.040.710.13C0.000.000.340.411.392.352.832.772.502.381.470.200.00D0.000.260.190.440.400.560.614.834.223.271.780.240.00E0.241.311.151.601.922.271.992.592.031.340.980.220.08F0.000.1

18、80.250.480.542.313.861.460.970.810.450.560.28Mean0.551.051.161.361.592.012.344.532.341.791.180.340.08s0.801.020.721.050.690.240.11从表1、2中数据可见,普通片吸收较快,峰浓度较高,给药23h达到峰值.缓释片吸收较慢,12.7h才达到峰浓度,峰浓度较低.血药浓度-时间曲线图见图1.图1甲硝唑结肠缓释片和普通片的血药浓度-时间曲线参比:普通片受试:缓释片采用药代动力学参数分析软件计算缓释片和普通片的药代动力学参数如表3:表

19、3甲硝唑结肠缓释片和烟酸普通片中的甲硝唑药代动力学参数参数甲硝唑普通片甲硝唑结肠缓释片Cmax(ugml-1)20.584.684.942.79Tmax(h)2.30.512.70.5t1/2(h)4.221.825.654.5MRT(h)7.242.2316.655.1AUC0-(ughml-1)152.3911.536.0912.81AUC0-(ughml-1)158.5313.5837.6311.92对Cmax、AUC0-t、Tmax进行方差分析比较,结果表明,甲硝唑结肠缓释片的Cmax显著下降,Tmax显著延长至结肠释药,MRT也比普通片延长,显示了本品有较好结肠释放和缓释的特征.生物利用度分析结果表明,缓释片和普通片生物不等效.