(完整word版)设计RT-PCR引物方法

1、设计RT-PCR引物方法要鉴定某一个基因在 mRNA水平上的表达，需要使用Q-PCR的方法。引物 设计是很重要的一环，要进行 Q-PCR时，获得引物的途径有很多种，其中最为 方便的是使用NCBI和primer bank，首先介绍这一方法：比如你要检测某药物对 小鼠细胞中IL-2的表达影响，通过Q-PCR检测，要设计引物。登陆NCBI，选择gene,在选框中输入IL-2 mus （搜索小鼠IL-2基因）点击搜索PublQjed 胛(5enRIL-2 musUS Naticnai Library of Msd cinerwcna.AdvancedInstitutes Qf HeaHhGon*Gen

2、en| IL-2 musSave search Limits AdvancedPi呂卩Iny 宜erting头 Summary, 20 per Sorted by RelevanceResults: 1 to 20 of 174 IIZ- intml已uki厂i 现恤g itij：s匚ulus亏e nnDUEE) interleukin 2Official Symbol: II2 Other Aliases: DN-14*H 19.3.11-2Other DasignatioriG： T-c?ll growth factor, TCGF, interleukin-2Lacation: 3 13

3、.3 cM 、Annotation. Chromosome 3, NC_000069.6 (37120713.37125954, complement) ID：16183OnlfluPhlA ilsng II2Q - ntElEUKiri 2El?已口tCi. Q日 171吕匚別门MUS rnUtCUlUStlULISE (10115)1 2 interleukin 2 receptor, gamma chain选择第一个基因，打开，可以获得gene的IDDIsdIw Settinys: 0 Full Repoit112 interleukin 2 Mus musculus (house mo

4、use)San r IDSummarychi SymbolOffiOfficial Full Blaint Pi iindiy sourceLdcus tcig See relatedG*i、申ty卩传 hefSeqOi jjdhiMii Lilies ije112 prcTidtd by MCI inlcrlaukin 2 rj-cvidcc by MCI 廿GIJ随43DN-144H1&3Ei$Enl:EFEMU弓血000027720; WgmaJTTMUSGOOODOOCP制7 protein codingVAJLIDTLD廿th iiiumiluwA Is j kn iwn ii-iE

5、ukarydd, Metdiuj, Cl uiCdtd, Cidiiidid, /tJiieLreid,匚uleleuslnmi, Manmaha,M Liraidea; Mundde, Mur rise, Mus, fus11-2+ Genomic context利用primer bank和ncbi的gene ID就可以获得前人已经设计好的引物 登陆 primer bank (/primerbank)，按下图选 择NCBI gene ID 选择物种 mouse，在for text中输入前面获得的你要 检测基因的ID( NCBI的编号)Prim

6、erBankPCR Primers for Gene Expression Detection dnd QiHame/SearcbPCR Prclacol Primer Si Misti a CammenlsPrimerSubmissionPriinei SearcliSearch for PCR PrimersOrder OligoCc_arh_b WtEl Gcn& IDYdu can h自yq 口 riimar：& i/nth products &quriced 吕tULJ=-tiSutmitDMA CorFor fn * Cnprip i|tjjti jYou car b 同 prme

7、rtank比 口口sequence .=g=mst the 5匕口hi已ez已Db hrePnmerQanh a public resource For PCF ormers. Tbew prinners are ieigr ed for 岂no点击submit查询，获得如下结果o可以看到其它人设计的好几对引物，基本上是通过实验验证的，做Q-PCR的话直接拿来用就行了，点击绿色高亮的链接可以看到其他人使用这对引物做Q-PCR获得的结果、自己设计Q-PCR引物方法比如要检测CXCR3的表达，做Q-PCR的扩增目的条带在100bp左右，如果半定量的话（通过跑胶定量）扩增产物一般 400bp左右 登

8、陆NCBI，选择gene,在选框中输入 CXCR3 mus（搜索小鼠CXCR3基因）点击搜索- -I 九口刚 HEiirrri,P P|D r b#伽tMfNibttartdSIU I J.ra rm 二： EmurEdPrimerBankQPCR VaHdaUon ReeUIFzrPrimerBankThe rollowing matches are found for NCBI Gene ID (Mouse); *16133Gn Dttcrlptlan*:NCBI GenelDlJriUjM_nns366NCBI Protein AccessionSp*c|#aCoding DNA Len

9、gthGene DescriptionyJ：E T .III-； -：Emi二：ILj TrValidation RaaultaI51MJ SialPrimerBapH IDAmpliccn SizeSequence m ”苗I- oward Pt ie 刘口 也Qm二ajTSJLSA口 TAtAfiliRefVQrsqi RrimerGTCCAAGTTCATCT亡TAGCACPPin The Center 伽 CbmpulJlinaii UUlU 刃冋 IndgTiatii r 占inL口gvra&HYRVMRD 嫁 MEDICAL SCHOCHGenBankFrimer Pair 1EJI

10、 MA?ihA fri.-srrr5LengthTmLocation236i ?i176 19w23BO JOM 5-273NCBIResources HowToSDiwBy Stnimrs: M Summary, 20 per pae. Sortad by RelevanceResults: 1 to 20 of 29 匚乂心旳 一 chEm匚ikinE fC-X-C nncitif】己、己口忙r 3 Mu雪 mu合亡ljIlb (Ficiliee mDiJw已H1 -chemoklne (C-X-C motif) receptor 3Official Symbol: Cxcr3Other

11、Aliases: RP23-49Q3 4, Cd1 E3, Cnkar3Other Designations: C-X-C cherriokinB re ceptortype 3; CXC-R3; CXCR-3; IP-10 receptor; c receptor丨Location: X 44 58 cMi. m.mi.lifrin rinri r r tA ni rr 血 厂r 尸 ri n n t -Ti i rf d tt #点击打开Cxcrl chemokine |C-X-C motif) receptor J Mus tnusculus (house rtioirn)Gene ID

12、 12766, iipdtd on 15-Sep-2013亠 SmmmaryCfflcitl Symbl Hchl Full Ndtm Prinuiy 曲iir“ Lo dis tag S*e MOIlI* mnuking (C-X- 2 matiQ rtLutur 2 p I l“ il&lMGLU7T2O7RP2349C8.4Ehseti 匚NEMUSGODOCC05D232 也如OTTMUE规0DFD1 氏迪将网页往下拖到NCBI referenee sequenee选择箭头所示mRNA序列CM1R-3IP-10 receptorchamokinB (C-X- C)低 Bplor 3In

13、tarferon-induciblo praneh 1D recepcarNCBI Rf*r*nc equeniC*1!3 RfljS曲q丹 iwiniMiiw I i nit i.ii-rirkiiiil i f Alin血订帕lI GWMiOlMia击I厲注 i蚌l皆“血仏詈2 sj.isi md|.iiiJ-ihtly 艺 yiiiu t . ui -匸;whi rmRNA Mif PMifefiifi)UU犢 1山2 HPC-X-C dieinnUhv lecploi type JUkmkaJ m me 帕PRuWlSlUFiAL骂輒Q初申切I0l3|iCoiTE-MirtCDS 呃辱

14、测祜JpicrtRelinledAE!MSL1!CC：D33i：319.1Ef-dSUUSPOdiaLuaW. JTTIMLtSPOail JUU19734 ENzJML旧TCJUZlQEl砧匕 1 丄 0l.ser-*4l 訂oniiliissj.ntaw? transmembrane TeteplM-(rtiifltJopsintemiRkl 特 N 起 MO打开链接Limits AckancedDHphiiy 歧警nl“q唸 1兰1 GmiiBdnkMus mu sc ulus chemokine (C-X-C motif | receptor 3 (Cxcr), mRNANCBl Pu

15、ference Sequence. NM_0D9910.2F 豁 1A wh_(二 n 0LOCUSJW_nO59lO1608 aRUTA lineal RCD 15-SEP-2D13DEFTNITLClf lus a os cuius chEJidki 廿(C-X-C not if) rsc&ptor 3nFlTA.1D7BSSIOK IfflLOOPSlO往网页下方拖动，可以看到 CDS,点击CDS (编码蛋白区)exon*T I!STS/not e= chenok ine (C-X-C not if) receptor/ db.xrefiGentiri: 12766/db_xref=*M

16、GI:12772071. 101/gerLe=Cscr3w/百ene-Eyn口nyn=kCdl83; CmkarS*/inference-a1ijnment:1, 39 E82 181/gene=Cxcr3/gene_syronyni=-fCdl83; Cntkar3*/st andar d_na e-RH14 2674/dtj_xref=7UniSTS: 23152T90.1193/geneCxcrS/gsne_synQnyM=Cdl83: Cmkar3 /note=CXG-R3 : CKCR-3: IF-W receptor : interferon-inducible protein 1

17、C receptor (CX-C) receptor 3*/cadon_Etart=1/pr duct=C-X-C chejookine receptor type /prote ln_ if KF CI3404CL 1/db_7ref=frGI: 6753458*/db-XrCCDS:CCDS303L9. r /db_xref=GeneID:12766/血_注诈fjfci:空型TnnzMYT PVFRCilH nAWAFr T FNTP出现如下界面，高亮部分为 CDS去ATG起始密码子TAA终止密码子灵12：U：2413015S：421431E4lB01N-；721 说B4BEP511D21

18、1DB1H41 】四： 1261 1321 i =；s4a-ltcrajTTTWTct-rwj-w-iic ggftrtictt aar tctticcrttg|Ma?itCiet t cl al gca住ungnI独狙氏也上 亡討亡tt氏门 訂匕七亡亡亡亡裟 亡贾豹亡亡泌1JCCtciaacttccca c；C j j|CCtECtCCGCSftatC削de削瓷彗mt盘莒tiutEttcx亡色：二口11：畫営弋上氏：右1：1岂“曲贰HtgitE98!.心t carl匸七电匚;gcclzcaartccM0Ftfi=i*ErmnKUt brBrraa?acbrr Eh a Lt/ db_K n-

19、f-BUcisTE! isenp*复制CDS区及其附近部分序列，如果要提取基因的话需要完全包括 CDS区, 如果只是检测的话，比如半定量的话就没必要全部包括。oom/at脚皿1：=1肚11叩】啦丿血 _zef= Ur3T5: JlLia*二口匚it 心 /刚 NHll c-l/eoi /f* i打开primer 5软件，新建一个DNA序列将复制的序列粘贴到选项框中，点击 oK序列就导入了 primer 5中，然后单击箭头所指primer，进入引物设计界面Scq tlo |Jieadcr |m | FindFind NeirtEEdsDHAL1GCMGTTCCCAGCACAAGTGGCAAAGG

20、CAGACAAGCAGG诲（X AGGAGACCTGACGCCA1CCAOCCACAG-CCGCACCACCACCCAkGCCATtJTACCTTGACGTTAGTGAACGTCAAG-TCC1丄2丄TACAGCCTCCCACTTT&tTCTTTCTTCT5GAAAACACCACCTCTCCCT ACCATTAT&CCC1SLwlacLagag-CCACTTCTCTCACTCCCCCCCCTGTCCACACCATT7CAGCCTCAACTTTC241acagaAjcttCCTGCCAGCCCTCTACAGCCTCCTCTTCTTGCTG&G&CTGCTAGGCAArG301GGGGGGTGTG

21、CTGTGCTACTGA&TCA&匚GCACTSCCCTGAGGAGCACGGACACCT ICC361TCt?TCCACCTCCCTCTAC-CCCATCTTCTCCTCCTCTTAACTCTTCCATTCTCCCCA&-TCC4ZLA TGTTGCT GTCCAGTGGG-TTTTCGGCCCTGGCCTCTGCAAAGTGGCAGGCGCCTTGTTCA431ACAI匚RAGTTCTATGCAG-GGGCCTTCCT&CT&CTrGTATAAGCTTCGACAGATATCT&AFunction:Active SeqierK：e;|NewSequenceTranslations:界面如下，

22、点击search,使用primer自动寻找引物功能进入界面后，分别按下图选取所需要的参数，PCR product size使用默认值即可，primer length 般在20bp左右比较合适点击OK后进入如下界面，点击0KSearch Complete.Primal Seal di Rnlt9：Remaining P ejected Sense:Aiiti-flense:Slringency;Veiy H19I1回 HiyhMoil eriileLowVery LowManualHIairs Found100Primer Pairs:出现如下界面，点击rating,按打分排列，打分是100分制

23、，分值越咼引物越好，根据自己试验目的，选择打分高的，产物片段 400bp左右的引物对， 并且Tm温度最好在60以上，有义链和反义链Tm值靠的越近越好，最好 不要超过2摄氏度，下图中Tm行中蓝色字体表示有义链的Tm值，红色字 体表示反义链Tm值，PCR退火温度一般设置比Tm值低5摄氏度。nllxFingTm 席】I Product I|TaRt|1 I* 1Mark8936S6.S厂895S.110*433EMSB. J23255.4B758.458.5401厂5B4SI.I3呢$6.7r我选择的是排行第四的引物对，单击选择后在，引物设计窗口，我们可以看 到这对引物的具体情况，下图中红色箭头指的

24、 S和A分别指的是有义链和 反义链，点击edit primers可以复制编辑引物选择引物序列，复制到word文档中作为正向引物点击ok后回到primer界面后点击A，然后点击Edit primers获得反向引物 序列F面是我获得的引物序列引物设计很S 链；GAHTCATCTACCTICAGC CAACTGCATAGAGCAGCGGATTGAG因为做半定量的模板是整个小鼠基因组，这就需要使用primer-blast验证引物的特异性(是否不会扩增出其它的基因)进入 primer-blast 网站(/tools/primer-blast/)P Pr

25、imer BLAST NCBIPi limi -BLAT: Fbidiiy piinier |.iTlc 1u yuta PCR itriijkrte litsilijr Pi kiimO niicl BLA$l)i 旳宀 Tir、小 tindltnjpiR必& t. -j加 gyvM *=勺” h匕却訂“匕飞 m = Lllm?iyhl h沁lt =PCRTcmplQTeEnT9i jcc9ss1oiip yl, Or PASTA Mqusnc* CAratSdq fACOtd IB pKTBfYPdJUenrTc01, ti卩|o-adl FASTA fileri m er Pa-a me

26、：E rs肚 mv o旳 forward primer (5 j* on plus shandyiny ov/ih wwi鬧 piiinor (5b r on minustraii4|U marForu/Afi| |niniiRcveist (jiiniieiRdHiqBFror-i在primer parameters中输入前面设计的正向引物和反向引物在 primer pair specificity checking 中选择 database为 refseq mRNA ,organism 中输入 mouse后选择 mouseSpecificity checkPrimer Pair Speci

27、ficity Checking ParametersH Enable search forprimar pairs specific to the intended FOR terDatjbnseOrganismExclusion (opimial)Entrez quary (aiJtiofhibPiimei specificity stihigeiicyR|fseq mRMAx house mouse (taxid: 10090)rmuse (tax id: 10090) rfouse-ear cress (taxid;3702) dwarf and mouse lemurs (taxid：

28、20G15)gray mouse lemur (13x1:30608)grey mouse lemur (1axid:3OEiOS)Arthromitus sp SFB-mousa 0axid:4911B)Sp&cifichy check叵 E oab fe a ?art ti ita r pnm er pi irs a r sc 1 f ihF- mrf nd?d pcf teipiarF hDalabaas| 励包eq ffl PIMA_貝 *EJiyjiiirsinirrou=e nar ri IQ旳Ew山胡蚀 uirion Ji*Entei mn加已 laxQflonr d qi* 百

29、日 ect iron theon ist as you “弓 妨A,iJi| In刖*二 Ex:lu p imdkljed F-sfsaq tanscr pls :e = =ior w#i hU,XR n匚 EclLdwni jILljntilonmnlEntiei qmeiy loptioikibPdhir 判建t iifi 亡附 sniriqeiicyPHr must, hive 就 1扁si 2 Q 1:111 eism那Chew Id unintended tarDls, i- eludingMfilmed pgtlucf sl?ear least 2 固 miTmatnhes iwi

30、thin ihe Iasr |s Q| hp= Htihe Ienr “ Igriweth art h划挖 1ui mai* iiiiim stcii- to thi? prim si. “jiojnodvklhnSplice viiihim bd ml Hi pg匸 Almprlmvii to impifmFENA nplL#ririinti 伽uli冒 iflfctqiimRNAMqutnct if FCR Imphrti inp血Giprprimuri回专Ikw iwilif in 4 rww 晰“do*卿 E Ue- mw qiplik vww v 4t|vaiiiced 卩加 亦Hl

31、EI日耳Hflie: Parnmerer vnluies tlhii ditlfti 1mm the defnulT 釧最后选择如下，选择在新窗口中显示结果，点击get primer。最后出现如下结果，反馈的结果中就只有一个基因CXCR3，就是我要检测的基因，证明这对引物的特异性不错，可以用于实验。hiiwi 叭ncins|i#rincilv ! pri$i4 Tmq cwpHTA? -ver Ta .rid n 白飞自cl dara*a- 口&址臼口 m即里 门坤 打応 Mu -:仃lusa灿計 CXhcr rvpvrlz-显 wdi _ -rrniariIW4llFATTTICTC TAi

32、7riATC：fi&r：CAAi7r 2Z2G in. &3ATT5AG.W Win宁M 降|釈1448j|j mun ? m.e：仆 jae Jua :-he-:4 -e KC moill 心i即打匸 诵 叩F斗日Unth. i 粉 1Fom-4 prinar 1 iHTEUTTTArnmdfUiCT 驅1 P(.P*1L H t PIBnillBIIBIIIIIBIIBailBillllBI GOG并不是选择的每一对引物通过 blast后就只有一个基因，很多情况下回出现不是只有一个基因的情况，情况如下图，那就需要再次设计，然后检验，直到获得特异的结果。Rrwiw pnic*(XMlGMCA

33、.H WM GAG20開BSS6D0 削如Pi2j2Iil 1DKJ?|. rn區H4=f=duct lmEtk = S3 41 Tv . ；|FcrfVird pt1取ATTTCiTCTBCCr1 占IB JJSTorrl itfl2TC2 TUML .“T SfEEiMjJ-jjij.L. I PEIDiCTED EM专刊肌uk prf bPMwnji 耐心事话 pfiler*. PEO 临电 iumtngn 馆亠uni J (LCClfllD&l39!?i.piodui： t lflfLftij = scdGiTrMcmi is r r _ Aihfl2E10时益匸 1 FEDJCTED

34、. Mue 聞u駅uUi per&wswillmflmbrsr p叫眄 PEtTlM.仙1耦咽氓ml 1 (LW1Q1W55JKI. mflAiiTinnoraccrAir ia AlTL- -A- ITSShGnTTUOCTiLDCrATri IS *T_ _ _. AJi _ _ - _ _ _ T获得特异性结果后，可以使用 oligo7对所设计的引物进行评价，另外使用 primer5的设计的引物在很多情况下总是特异性不是很好，也可以使用oligo7 设计引物，oligo7设计的引物特异性会好一些。使用oligo 7设计引物新建一个序列将mRNA的序列粘贴到新建对话框中，选择 accept

35、&closejHjUjeJhIdo-tClhUL2AMTCC* rArrs&rfiGi rrGctcicu TTCTTTCTC7 GCGGCTkCC CACCAACTOCHjr-AA jurcrr 皿汕x TTKT LiViLLCXG AmCfi：MiC GETGTrJuLCT JUALTTCT4L mGCCC&G CUG?AJLCC TTAAACG7CGTGA&TGC7VT TGCL.&iJ&G GC4CTTCCCT 屈匚CF5A7W ITrTCKiljIjiKi GCCCCTIUCT TXATCCTCT CGKLTTG TA：卫：皿： CCTCTOGAAC 連匚二 GAGGCTA ASft

36、orcurr ACATKrTCiCA TGTATJGJUCl 优湖翱GCTMJTOTS T&rjLW>： 3&AAGTtAAA T&CCTUTOTC 町氐恥山 A ai JI lATJTTTGCC ATfJriCTCJL :CCTAMTGC :ACAGTTCTA ckKTJurrjs r Ascccirrn 泗TIRU nTTlTCACr TATTOXTCA TATCT7WT1G jCCTGCCTCZ&Mcrr 酬 WJ7TCCTG& AXTAClACC mcCTmu芾 rftcnsmADr LAJUCOTCAL CTTCiGCTCC rtCT71.CCT& C1ACTCQ.GA rfiM

37、TGCCM XLZCCXEUED TM门 UAZ wrocTaiG SG47JGCCA& ATCibLL a I rTGTTrirTnr? GGTiTTDECGCAaXIaTCiAG AMGGTGZ 匚 CGTCCT 加 GEGMXCTC ATTDCT冉匚 Kr MTTJuCT 沁&LjrrGG&rT AGUIXTGCA CCACMAG&T CCJ J IL LEEJUi. CiJ4LlLLATA icrrecx&K CCCCCTGCLC MCTCiCGCC CTOTOirCT GCCCGCGGCCiAATCA&IW! IGCTlTrTTT GTOiTOTGOT CCGATCTIXST KjC

38、UrCMA CJUXTACCTT Twrr 点rrro ILGTCLCTS： acuutch CAJG4GCTACT IT匚、匸匚CTEjT iTocrroTOk TOTGCTTC iMGcrrtTG &AUCCCTW TOC4TCTGTO TTGiGUlIAAiULTO6lTFiXrTO GXJGtlZrAT7 CCAZCAACi CCTAMCCTC 砂哂柯昌 :UTCttT&AGCCJLtGTGTL caj就沁： ACATCTWJ5C 丄匚 UGCJUZXTCCCAAiftCA liTCiTSGC UTUTUAt EAR负羽斤 r 上匚R-AATDO TCT&TCCiJlG ACmTCCT

39、l C7G=GGCTG CCT&CIUA 肌曲何E占氐 匚 rmAji.GGjkltACAAU TtLT：rlAr i-GCATTTGi CCACZGXJCC CACCCAA.7ITATAHrtCTlA CTEAS-TCliC选择 search for primers& probes分别单击 paremeters和 ranges在parameters中根据图所示选择引物长度（一般在 20bp左右）在ranges中选择PCR产物的长度范围和设计引物的范围单击search后出现引物对选择 selected oligonucleotides单击选择评分最高的引物 ，然后选择 edit中forward

40、 primer和reverse primer，复 制 所 设 计 引 物 到 进 入 primer-blast 网 站 (http:/www. ncbi. nl m. /tools/primer-blast/)进行特异性检验Optimai Annealing Temperature: 57.9 *C (Malt: 6S j9 *C)Poslion andLengthTmrcGC %P.E.#&coteProduct33667 9533nXa633Forward Prrner4132257950.0466X468927Rfeverse Prrner7312056 4SOO467X4

41、67911upp 即 Oligo-Lower Oligo一一一一Pre duct Tm - Forward Primer Tm: 30.0 *C Primers Tm difference; 0.5 C Coinnents;ConcentrartionHigh cliflereroe betv/eer (F用)product andForward Friiier2(JO.OnMprimer melting teiriperartures.Reverse Primer200.anMUpper Oligo200.0nMLower Oligosctt.anMMonovalent Csrtion50.

42、0mMFree Mg2+0.7mMTotal Na+ Equivalent: 155.8 mWppr flllfOljiFri-rMl屮ZFm1：-._mOom iijT * w 血.: A -xAiCCTT- Tr GLLr5i ?：1isasran 1Tfl0731 HI* HlD4 “和蔚旦fFrirtjiLAisaKnAWtfh I NhfihiBe* Lc*i a,Dnrr沁7欣Tr. FiwSe*iflFW5i1LmpTm；17 4CVLHIjLtcFj 引0 4 ki4 tnrj3RT h叶 ti才 MH*XJl04 CTMJ12-Thjt err ZtL IT： LLA选择an

43、alysis中的PCR，查看引物的最适退火温度ile: NewSequence.seqFyR PVoductU_ Pnzdi.jctSet Score: &33*另外设计RT-PCR引物最好跨内含子，设计方法如下问题一：如何在 pubmed上找到目标基因的DNA序列以及其内含子和外显子情况。步骤：打开NCBI主页面，选 GENE，输入基因名称-显示出很多不同种但名字相同的基因(fig.1)-找到你要的种属，打开-显示基因信息，找到” Geno mic regio ns, tran scripts, and products点击基因名称，links到genebacl fig.2)-显示了该基因

44、DNA的信息(fig.3), 可以看到这是基因组 DNA,从mRNA选项中可以看到 JION后面的是外显子的位置， 该 基因一个共有3个内含子，4个外显子，以及外显子的起至位置，为了以后的操作，可以把这个DNA序列和外显子的起至位置记下来。町 MPJ*HWIdl jn4IW I VIF Wil 1;irtu*n 1 Fm stncftiOf her Decipnatians: 7 川r : r-i- nr liirntyn 1, irtumlGhromom; 4Anntatien:,NC_01Ck 1,OTTMIJSPOOOODMD277. SIF2-Hke proton l.nlRSd, s

45、ir；4H 1; sinuin 1 (Iilent Fating 即p冬 irfCTnatwn regulation Z hornoicg) iChrDmcsome: 1( Loc3tiflnr tCAnnctstjQH：匚hromcscrne 10, NC_00Ci76 5(62761.629017, compiement)GenelD玄T莎1 i Sirtl strtuin 4onttype intormMion reouMon 2 homolog 1 (S. corevi9) |$ummy：.：，”、 I Hlt ?04* Symbcl8“ Ml NawsiitM(Mlent rating type infdoacc4)Primiry tourceROD(3cecJlaxZQ 匸NMKOQOOOOOQgSQOw 8yMSeqstitiMMOOBLOr0ar4srinov*n asSW.Siitlt ?DZACjJFEATURESsouccegenemRNAORIGINLocation/QualifieES1.11193 /OEganisawRattus notvegicus,r /mo 1_ typ e genoai c DMA 7TTTTTTT=*BTr/db xrefM