表皮生长因子防治急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障损害

1、    表皮生长因子防治急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障损害        摘要：目的探讨表皮生长因子(EGF)对急性胰腺炎(AP)大鼠肠粘膜屏障的保护作用。方法SD大鼠32只，建立AP模型后随机分为对照组(n=16)和治疗组(n=16)。对照组给予全肠外营养的支持；治疗组给予全肠外营养支持和EGF皮下注射。于成模后1，5d处死，检测大鼠肠道通透性、空肠粘膜湿重、微绒毛高度和面积、双糖酶活性及髓过氧化物酶活性。结果在成模后5d，治疗组动物空肠粘膜湿重、微绒毛高度及面积、双糖酶活性均显

2、著高于对照组(P<0.01)；而其肠道通透性及髓过氧化物酶活性显著低于对照组(P<0.01)。结论EGF对急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障功能具有保护作用。关键词：表皮生长因子-尿抑胃素/治疗应用；胰腺炎/病理学；肠粘膜/病理学；疾病模型，动物中分类号：R975；R576文献标识码：A文章编号：1005-6947(2000)03-0222-03 The protective effect of epidermal growth factor on intestinal barrier in rats with acute pancreatitisCHEN Dong-li,WANG Wei-

3、zhong,WANG Jun-yi,WANG Tao(Department of General Surgery,Xijing Hospital,The Fourth Military Medical University,Xi'an 710032,China)Abstract:ObjectiveTo evaluate the protective effect of epidermal growth factor(EGF) on intestinal barrier in rats with acute pancreatitis(AP).MethodsThirty-two male

4、SD rats after AP models induced were randomly divided into two groups:(1) control group(n=16) treated with total parenteral nutrition(TPN) only.(2) treatment group(n=16) with TPN and EGF(hppodermatic injection).Rats were sacrificed on day 1 and day 5 after AP induced.ResultsIn treatment group,plasma

5、 fluorescein isothiocyanate-dextranoncentration was significantly lower than that in control group(P<0.01);mucosal wet weight,villus highness and area in jejunum were significantly higher than that in control group(P<0.01);activities of sucrase and maltase in jejunal mucosa were significantly

6、higher than that in control group(P<0.05,P<0.01),whereas myeloperoxidase acitivity was significantly lower than that in control group(P<0.01).ConclusionsEGF may have pretective effect on intestinal barrier in rats with AP under TPN treatment.Key words：EPIDERMAL GROWTH FACTOR-UROGASTRONE/the

7、r use；PANCREATITIS/pathol；INTESTINAL MUCOSA/pathol；DISEASE MODELS，ANIMALCLC number：R975；R576Document code：A     急性胰腺炎(AP)可造成全身性病理损害，病情凶险，死亡率极高。禁食以减少胰液分泌是AP的根本治疗措施，此时全胃肠外营养(TPN)为最适合选择。但长期TPN易损害肠粘膜屏障，导致肠源性感染。表皮生长因子(EGF)可维持肠粘膜形态和结构的完整性，避免长期TPN所致的肠粘膜屏障受损1。本实验利用接受TPN的AP大鼠，观察EGF对大鼠肠道通透

8、性、空肠粘膜湿重、微绒毛高度及面积、双糖酶活性、髓过氧化物酶活性的影响，探讨EGF对AP大鼠肠粘膜屏障功能的保护作用及其机理。1材料与方法1.1动物模型制备SD大鼠32只，体重220g±10g，购自第四军医大学实验动物研究中心。采用经胰胆管逆行注入3.5%牛磺胆酸钠(1.0ml/kg法)制备AP模型2。于右颈外静脉插入硅胶管至上腔静脉，接旋转轴装置，使大鼠在自由状态下可持续输液，以微量输液泵控制输液速度在10ml.kg-1.h-1。1.2分组AP成模后，随机分为两组：对照组(n=16)，输注常规TPN溶液；治疗组(n=16)，除输注相同TPN溶液外，另每日皮下注射EGF(第四军医大学

9、病理教研室产品)2次(0.1g/g)。TPN营养液每日提供非蛋白热量933.03kJ/kg，供蛋白质1.5g/kg，热氮比为1161。1.3标本采集及检测两组动物分别于术后第1d(n=8)及第5d(n=8)麻醉后开腹，从距屈氏韧带5cm处将一段60cm长的小肠两端结扎，向其内注入1.0ml荧光异硫氰酸盐-葡聚糖(FITC-dextran,25mg)溶液。30min后，抽取肠系膜上静脉血液2.0ml，检测血浆中FITC-dextran浓度。小肠的通透性按我们以前的方法测定3，单位为mgFITC-dextran/L血浆；从屈氏韧带远侧2cm处开始取5cm空肠，以冰盐水冲洗干净肠内容物和血迹，采用C

10、hen法检测空肠粘膜微绒毛高度及面积4；再取20cm空肠，刮取空肠粘膜，检测空肠粘膜湿重4，双糖酶活性及髓过氧化物酶活性。双糖酶活性采用Dahlqvist法5测定，单位为mmol.min-1.g-1蛋白；髓过氧化物酶活性采用Bradley法6测定，单位为mol.min-1.g-1组织。1.4统计学方法结果以均数±标准差(<"0 (881 bytes)" src=" 12 14>±s)表示；采用Student's t检验进行分析。2结果2.1肠道通透性变化成模后5d，治疗组动物肠道通透性显著低于对照组(P<0.01)(表

11、1)。表1EGF对肠道通透性的影响(<"0 (881 bytes)" src=" 12 14>±s,mg/L)时间n组别FITC-dextranP值第1d8对照1.23±0.478治疗1.14±0.42>0.05第5d8对照7.46±0.908治疗3.28±0.71<0.01     2.2空肠粘膜湿重、微绒毛高度及面积变化成模后5d，治疗组空肠粘膜湿重、微绒毛高度及面积显著高于对照组(P<0.01)(表2)。 表2EGF对肠粘膜湿重、微绒毛高度

12、及面积的影响(<"0 (881 bytes)" src=" 12 14>±s)组别n肠粘膜湿重(mg/cm)高度(m)面积(m2)对照830±2272±2118658±2469治疗844±3409±3243220±5342P值<0.01<0.01<0.01     2.3空肠粘膜双糖酶活性变化成模后5d，治疗组空肠粘膜蔗糖及麦芽糖酶活性显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)(表3)。 表3EGF对肠粘膜双糖酶

13、活性的影响(<"0 (881 bytes)" src=" 12 14>±s,mmol.min-1.g-1)时间n组别蔗糖酶P值麦芽糖酶P值第1d8对照32.41±6.63105.21±19.248治疗29.36±4.17>0.05108.76±15.10>0.05第5d8对照11.54±2.9150.25±9.348治疗16.72±4.30<0.0572.98±14.15<0.01     2.4空肠

14、粘膜髓过氧化物酶活性变化成模后5d，治疗组动物肠粘膜髓过氧化物酶活性显著低于对照组(P<0.01)(表4)。 表4EGF对空肠粘膜髓过氧化物酶活性的影响(<"0 (881 bytes)" src=" 12 14>±s)时间n组别活性(mol.min-1.g-1)P值第1d8对照2.56±0.678治疗2.19±0.45>0.05第5d8对照5.84±0.838治疗4.02±0.76<0.01     3讨论目前认为EGF具有促进肠粘膜上皮细胞分化

15、和更新、维持肠粘膜屏障完整的作用。AP伴有胃肠道损害也获公认，本实验利用接受TPN大鼠的AP模型，探讨EGF对AP大鼠肠粘膜屏障功能是否有保护作用及其机理。肠道通透性是反映肠粘膜屏障功能的重要指标。FITC-dextran可经过肠粘膜上皮细胞之间的紧密连接通道进入肠系膜上静脉内，任何原因所致的肠粘膜屏障损害均可导致肠道对FITC-dextran的通透性增加，因此它可精确反映肠粘膜屏障受损程度3。本实验结果发现，治疗组动物肠道通透性在治疗5d后显著低于对照组(P<0.01)，提示EGF可防止AP所致的大鼠肠道通透性增加。治疗组动物空肠粘膜湿重、微绒毛高度及面积在治疗5d后显著高于对照组(P

16、<0.01)，可能与EGF可增加肠道对谷胱甘肽的吸收，为肠粘膜上皮细胞的再生提供更多能量以避免肠粘膜萎缩有关；也可能与EGF可增加肠粘膜内的DNA及蛋白有关1，7。本结果提示给予外源性EGF可减轻AP所致的大鼠肠粘膜萎缩。蔗糖酶及麦芽糖酶是小肠重要的双糖酶，主要存在于小肠绒毛顶端，对小肠的消化及吸收功能有重要意义，同时也是监测小肠功能受损最敏感的指标之一5。本实验结果发现治疗组动物空肠粘膜蔗糖酶及麦芽糖酶活性在治疗5d后显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)，提示EGF可减轻AP对大鼠空肠消化和吸收功能的损害。肠粘膜的炎性损害均伴中性粒细胞浸润，它可引起并加重小肠的脂质

17、过氧化损害。肠粘膜内浸润聚集的粒细胞与肠粘膜的损害程度成正相关。髓过氧化物酶是中性粒细胞内一种重要的氧化酶，常用作表示组织内粒细胞浸润程度的指标7。我们以前的研究发现正常肠粘膜内髓过氧化物酶活性很低，5-氟脲嘧啶可引起小肠粘膜内粒细胞浸润聚集而表现为其活性显著增高8。Okumara9发现AP大鼠肺内有粒细胞浸润，髓过氧化物酶活性较正常大鼠显著增高。但AP大鼠肠粘膜内髓过氧化物酶活性变化尚未见报道。本实验结果表明，治疗组动物空肠粘膜内髓过氧化物酶活性治疗5d后显著低于对照组(P<0.01)，这提示EGF可减轻AP时空肠粘膜内粒细胞浸润聚集所致的炎性损害。我们认为，EGF可减少AP大鼠肠道通

18、透性的增加，防止肠粘膜萎缩，维持空肠粘膜蔗糖酶及麦芽糖酶活性，减轻中性粒细胞浸润聚集所致的炎性损害，从而起到对AP大鼠肠粘膜屏障功能的保护作用。 作者简介：陈冬利(1965-)，男，陕西西安人，第四军医大学西京医院主治医师，硕士，从事能量代谢与肠屏障损伤的防治方面研究。陈冬利(第四军医大学西京医院普外科，陕西西安710032)王为忠(第四军医大学西京医院普外科，陕西西安710032)王俊义(第四军医大学西京医院普外科，陕西西安710032)王涛(第四军医大学西京医院普外科，陕西西安710032)参考文献：1Wang JY,Zhang LH,Song WL.Epidermal growth fa

19、ctor regulates intestinal glutamin uptake during total parenteral nutritionJ.Clin Nutr,1996,15(1):21-23.2秦仁义，邹声泉，吴在德，等.重症胰腺炎大鼠肿瘤坏死因子产生及吸收部位的研究J.中华实验外科杂志，1997，14(4)：205-206.3Chen DL,Sando K,Chen K,et al.Protective effects of selenium supplementation in minimizing 5-fluorouracil induced lipid peroxida

20、tive damage of the small intestineJ.J Trace Elem Exp Med,1997,10(2):163-171.4Chen K,Okuma T,Okumura K,et al.Insulin-like growth factor-1 prevents gut atrophy and maitains intestinal integrity in septic ratsJ.JPEN,1995,19(2):119-124.5Dahlqvist A.Assay of intestinal disaccharidasesJ.Anal Biochem,1968,22(1):99-106.6Bradley PP,Priebat DA,Christensen RD,et al.Measurement of cutaneous inflammation:Esti