独活寄生口服液质量标准的研究

1、    独活寄生口服液质量标准的研究        摘要目的：为控制独活寄生口服液的质量，建立独活、人参、肉桂的薄层色谱鉴别及二氢欧山芹醇乙酸酯的薄层扫描定量方法。方法：样品中的独活、人参及肉桂进行薄层色谱鉴别。对独活中的二氢欧山芹醇乙酸酯进行薄层扫描定量。结果：鉴别方法专属性强，定量方法简便、准确，平均回收率为96.5%，RSD为2.44%。结论：本质量标准可有效地控制独活寄生口服液的质量。关键词独活寄生口服液；独活；人参；肉桂；二氢欧山芹醇乙酸酯；薄层扫描Quality

2、standard of Duhuo Jisheng KoufuyeWang Hongyan(Wang HY),Xu Suixu(Xu SX),Zhang Lei(Zhang L)，et al (Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang110015)ABSTRACTOBJECTIVE：To control the quality of Duhuo Jisheng?an Koufuye.The TLC identification method of Angelica pubescens,Panax ginseng and Cinnamomum cas

3、sia and the quantitative determination of columbianetin acetate by TLCS were established. METHODS:Samples were identified respectively by TLC in contrast with Angelica Pubescens,Panax ginseng and Cinnamoum cassia drugs after treated.Columbianetin acetate in Duhuo Jisheng?an Koufuye was extracted ref

4、luxenthy with CHCl3 and determined by dual wavelength thin layer chromatography scanning. RESULTS:The TLC identification was highly specific and the spots were clear and concentrated.The average recovery of columbianetin acetate in samples was 96.5%(n=5).with RSD 2.44%. CONCLUSION:The quantitative m

5、ethod was simple,sensitive,reproducible and accurate.This quality standard was capable to effectively control real quality of Duhuo Jisheng?an Koufuye.KEYWORDSDuhuo Jisheng?an Koufuye,Angelica pubescens,Panax ginseng,columbianetin acetate,TLCS独活寄生汤由独活、桑寄生、秦艽、人参、肉桂等15味中药组成。具有祛风湿，止痹痛，益肝肾、补气血。用于治疗风寒湿痹、

6、日久正虚，见腰膝冷痛，下肢屈伸不利，肌肤麻木等症，效果显著。但由于用药剂量较大，不易保存、携带等，从而给临床应用带来不便。为使这一药物更好地用于临床，我们研制了独活寄生口服液，克服了上述不足。为了有效地控制其内在的质量，进行了定性及定量研究，制定了独活、人参、肉桂的薄层色谱鉴别及独活中二氢欧山芹醇乙酸酯的含量测定。1材料与仪器1.1材料独活寄生口服液(自制)；处方中的各味中药原料药由沈阳药科大学中药鉴定室鉴定，符合药典规定；二氢欧山芹醇乙酸酯、人参皂苷-Re(沈阳药科大学天然药物教研室提供)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；其它试剂均为分析纯。1.2仪器CS-910型双波长薄层扫描仪(日本岛津)；定

7、量毛细管(美国Drummond)2实验方法与结果2.1薄层色谱鉴别2.1.1独活的薄层鉴别取本品10ml，加硅藻土10g，搅拌均匀，自然晾干。置沙氏提取器中，加150ml氯仿回流6h，回收氯仿，浓缩液置5ml量瓶中并加氯仿定容，作为供试品溶液。另取独活对照药材粗粉3g，按上法制成对照药材溶液。取二氢欧山芹醇乙酸酯对照品适量，加氯仿溶解制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(10.5)为展开剂展开，取出晾干，在紫外灯(254nm)下检视。供试品色谱中在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的暗紫色斑点。见1。1独活的

8、薄层色谱1-阴性对照品；2-二氢欧山芹醇乙酸酯对照品；3-供试品；4-独活对照药材2.1.2人参的薄层鉴别取本品10ml，加水饱和正丁醇萃取3次，每次用量40ml，回收正丁醇，加甲醇溶解，作为供试品溶液。另取人参对照药材粗粉2g，按上述方法制备对照药材溶液。取人参皂苷-Re对照品适量，加甲醇溶解制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。取供试液15l点于硅胶G薄层板(10×10cm)右下角距两边各1cm处，以氯仿-甲醇-水(653510，下层)为第一向展开剂横向展开，取出，晾干。以正丁醇-乙酸乙酯-水(411)为第二向展开剂纵向展开，另取对照药材溶液及对照品溶液各10l点于薄层板上作

9、为一维随行对照，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，110加热5min。供试品色谱中在与对照药材及对照药品色谱相应的位置上，显相同的粉红色斑点。见2，3。2人参的薄层色谱1供试品；2人参皂苷-Re对照品；3人参对照药材3人参的薄层色谱1阴性对照品；2人参皂苷-Re对照品；3人参对照药材2.1.3肉桂的薄层鉴别取肉桂对照药材粗粉2g，按独活鉴别项下的供试品制法制备，作为对照药材溶液。另取肉桂醛1ml，加氯仿1ml稀释，作为对照品溶液。吸取对照药材溶液、对照品溶液与独活鉴别项下的供试品溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿为展开剂展开，取出晾干，喷以0.2% 2，4-二硝基苯肼乙醇溶液。供

10、试品色谱中在与对照药材及对照品色谱的相应位置上，显相同的橙黄色斑点，见4。4肉桂的薄层色谱1阴性对照品；2肉桂醛对照品；3供试品；4肉桂对照药材2.2含量测定2.2.1薄层扫描条件采用双波长反射锯齿扫描法。扫描宽度：10.0mm。线性参数Sx3，由扫描确定S320nm,R400nm。2.2.2标准曲线精密称取二氢欧山芹醇乙酸酯对照品适量，加体积分数为95%的乙醇制成0.068mg.ml-1的标准溶液。精密吸取4，8，12，16，20，24l，分别点于同一硅胶G薄层板上，上行展开约10cm，取出晾干。在UV254nm条件下，扫描测定，以面积积分值对二氢欧山芹醇乙酸酯浓度绘制标准曲线，回归方程：Y

11、=3.33+84.77x,r=0.999 4。结果表明：二氢欧山芹醇乙酸酯在0.2721.7mg.ml-1浓度范围内呈现良好的线性关系。2.2.3稳定性实验吸取二氢欧山芹醇乙酸酯对照品溶液8l，点于薄层板上展开，取出晾干。每隔30min，扫描一次，结果在2h内稳定，RSD2.50%(n=5)。2.2.4精密度实验板内：同一板上点同样量的同一样品，结果RSD4.45%(n=5)。板间：二块相同厚度的硅胶G板上点同样量的同一样品，按实验条件测定，结果RSD5.29%(n=5)。2.2.5重现性实验准确称取样品5份，按含量测定方法测定。结果样品每支平均含量为0.307mg，RSD为2.85%2.2.

12、6样品的测定精密取供试品10.0ml，加硅藻土10g搅拌均匀，自然晾干。置沙氏提取器中，用氯仿150ml回流提取6h，回收氯仿至干，加甲醇溶液并定容于5ml量瓶中，作为供试液。分别吸取标准品溶液12l，供试品溶液10l，点于同一硅胶G薄层板上，按标准曲线项下展开，扫描，采用外标两点法计算含量。测定了3批独活寄生口服液中二氢欧山芹醇乙酸酯的含量。测定结果见表1。表1独活寄生口服液中二氢欧山芹醇乙酸酯测定结果.n=4样品批号每支含量/mgRSD/%10.2922.620.3162.530.3362.22.2.7加样回收率试验精密称取已知含量的独活寄生口服液，加入一定量的二氢欧山芹醇乙酸酯对照品，按

13、样品液制备，点样，展开，晾干，扫描测定，结果见表2。 表2回收率测定结果样品量加入量测得量回收率RSD/g/g/g/%/%/%0.5440.7161.2095.20.5440.7161.1893.60.5440.7161.2196.096.52.440.2720.9731.2298.00.2720.9731.2499.62.2.8独活寄生口服液中独活原料药的测定取独活原料10g，按口服液制备方法制成10支单味药口服液。精密取其10.0ml，按样品的测定项下操作，测定了2批独活原料中二氢欧山芹醇乙酸酯的含量，测定结果见表3。 表3独活原料药中二氢欧山芹醇乙酸酯测定结果.n=4样品批号每支含量/mgRSD10.2991.620.3084.2由表1，3可见，二氢欧山芹醇乙酸酯的含量相当,说明样品中原料药与制剂中其它成分干扰较少。 3讨论3.1本实验曾选用独活中主要有效成分二氢欧山芹醇作为含量测定指标，但后经实验发现，其它成分对它有干扰，故选择极性较小的相应的乙酸酯。关于二氢欧山芹醇乙酸酯分析方法的报道有双