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文档简介
1、中性粒细胞淋球菌感染模型的建立来源:医学论文发表作者:陈嵘,陈 蕾,张国学,樊翌明,吴志华 作者单位:(广东医学院附属医院皮肤科,广东湛江524001)【摘要】 目的 研究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及一氧化氮(NO)在中性粒细胞淋球菌感染模型中的表达。方法 分离正常人外周血中性粒细胞,在10%胎牛血清DMEM培养液上培养3 h,A组加入空白培养基,B组加入淋球菌菌液,随后在0、3、8、12 h分别以实时定量荧光PCR测定iNOS mRNA表达,用镉还原法检测NO浓度。结果 B组中iNOS mRNA表达和NO水平均较A组升高(P0.01),NO浓度在8 h达到高峰。结论 中性粒细胞淋球菌感染
2、模型可成功模拟该菌体内微氧感染环境,可用于研究淋球菌致病机制。【关键词】 淋球菌;中性粒细胞;一氧化氮Establishment of gonococcusinduced neutrophil infection modelCHEN Rongyi, ZHANG Guoxue, CHEN Lei, FAN Yiming, WU Zhihua (Department of Dermatology, Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 524001, China)Abstract:Objective To inves
3、tigate the expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and nitric oxide (NO) in gonococcusinduced neutrophil infection model. Methods Peripheral blood neutrophils were islolated from health men, and then cultured in DMEM medium containing 10% fetal calf serum for 3 h. Blank medium or gonoco
4、ccal inocula was added into group A or group B. NO concentration and iNOS mRNA expression at 0, 3, 8 and 12 h were determined by cadmium reduction method and realtime quantitative fluorescent PCR, respectively.Results Compared with group A, iNOS mRNA expression and NO level increased obviously in gr
5、oup B (P0.01), and NO content peaked at 8 h.Conclusion The gonococcusinduced neutrophil infection model can simulate the microoxygen infection circumstance in vivo, and is suitable for studying the pathogenic mechanism of gonococcus.Key words: gonococcus; neutrophil; nitric oxide淋球菌为兼性厌氧的革兰阴性双球菌,可引起
6、生殖系统急性化脓性炎症,脓性分泌物中存在大量中性粒细胞1。中性粒细胞是一种专职吞噬细胞,感染初期可在炎症介质的介导下聚集在病灶处,通过吞噬摄入致病菌2。中性粒细胞杀伤吞噬微生物的机制包括活性氧簇、抗菌蛋白、一氧化氮(NO)等3。尽管中性粒细胞在淋球菌感染初期可迅速聚集到病灶,但淋病的迁延不愈表明中性粒细胞引起的炎症反应不足以彻底清除淋球菌。中性粒细胞可杀灭大部分吞噬的细菌(如大肠杆菌),但部分淋球菌可在中性粒细胞内生存甚至繁殖45。淋球菌是如何实现免疫逃逸并得以在中性粒细胞内生存的问题目前尚未完全阐明。本研究拟建立中性粒细胞淋球菌感染模型,观察NO和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,旨在将
7、其用于研究淋球菌致病机制。1 材料与方法1.1 淋球菌菌株淋球菌株ST2951用WGC淋球菌专用培养基培养(购自中国科学院武汉生物制品研究所)制备成OD600值为0.15的细菌悬液。1.2 外周血中性粒细胞的分离6名健康成年男性分别抽取2 mL肝素抗凝静脉血,取抗凝血与Hank液混匀后小心加入到人中性粒细胞分离液中(天津灏洋生物制品科技有限公司,LTS1087),18、2000 r/min离心20 min,待离心管由上至下分4层;吸取第3层(中性粒细胞)加入到含Hank液15 mL的试管中,充分混匀,2000 r/min离心10 min,弃上清,沉淀反复洗涤2次,再用含10%胎牛血清DMEM培
8、养液重新悬浮细胞(1107/mL);充分混匀后滴入细胞培养板中,置5%CO2培养箱37培养3 h备用。取少量细胞液涂片,作台盼蓝拒染实验,鉴定其存活率。1.3 中性粒细胞淋球菌感染模型的建立取出培养板,A组每孔加入含10%胎牛血清DMEM 培养液150L,B组每孔滴入淋球菌悬液150L;加样完毕后继续孵育,按0、3、8、12 h时间点在培养孔中吸出培养液作相应检测,每组设3个复孔。1.4 实时荧光定量PCR检测iNOS mRNA含量用Trizol溶液(美国GIBCO公司)提取中性粒细胞总RNA,经紫外分光光度计检测符合纯度后逆转录为cDNA,再进行实时荧光定量PCR检测。根据GeneBank序
9、列设计iNOS、actin引物,序列见表1。反应条件:94预变性3 min,94变性5 s,60退火10 s,72 延伸20 s,共40个循环。应用SYBR Green荧光染料(美国Biotium公司)技术行实时定量PCR反应,获取各组标本的标准曲线,计算机分析Ct值(每个反应管内荧光强度达到系统认为有目的DNA合成时的循环数,以阴性对照作参考)。表1 引物序列1.5 NO浓度检测收集细胞培养液-70保存,用镉还原法测定亚硝酸盐浓度。培养液以3000 r/min离心5 min,用NaOH和硫酸锌作蛋白沉淀处理,3000 r/min离心5min,取上清液1.5 mL依次加入0.08 mmol/L
10、 甘氨酸NaOH缓冲液1.0 mL、活化镉3.0 g,摇匀后放置90 min;取1 mL加入新试管,依次加入1% 磺胺0.5 mL、0.1% N1萘基乙二胺盐酸0.5 mL,摇匀后静置20 min,用721分光光度计测OD值(=546 nm,灵敏度=1,空白调0),根据该值计算亚硝酸盐浓度。1.6 统计学处理数据以(s)表示,采用SPSS12.0统计软件进行单因素方差分析及q检验、t和t检验。2 结果2.1 中性粒细胞中iNOS mRNA含量实时荧光定量PCR显示:淋球菌刺激后B组中性粒细胞中iNOS mRNA含量均升高,而A组变化不明显(图1,表2);同一时间点相比,B组的iNOS mRNA
11、表达显著高于A组(F=51.87,P0.01)。2.2 细胞培养液中NO水平A组NO水平明显低于B组(P表2 两组NO与iNOS mRNA表达同一时间点两组间比较,*P0.01;同组不同时间点间比较,#P0.01。0.05);B组不同时间点NO浓度差异有统计学意义(F=106.79,P0.01),8 h时最高(表2)。2.3 iNOS mRNA与NO表达的关系Spearman相关分析表明,B组中性粒细胞iNOS mRNA表达与细胞培养液中NO水平呈高度正相关(r=0.87,P0.05)。治疗组的副作用发生率为9.1%,明显低于对照组的76.2%(2=19.88,P0.01)。结论 卤米松乳膏是
12、治疗儿童面颈部白癜风的有效药物,且副作用较少。【关键词】 卤米松乳膏 白癜风 儿童白癜风是一种原发性局限性或泛发性的皮肤色素脱失症,发病率为0.5%1%。白癜风好发于颜面、四肢等暴露部位, 容易引起人们注意,患者常遭受非议甚或受到歧视, 造成极大的精神痛苦1。儿童也有发生,易造成心理损伤,影响人际交往。目前治疗白癜风手段多样,但疗效不尽人意,尤其是儿童白癜风的治疗更为困难。我科用0.05%卤米松乳膏治疗儿童面颈部白癜风22例,取得良好疗效,现报道如下。1 资料和方法1.1 病例与分组43例面颈部白癜风患儿均为我院2006年6月至2008年6月间门诊就诊确诊的患者,将患儿随机分治疗组和对照组。治
13、疗组22例,其中男15例,女7例,年龄212岁;病程2个月至3a,平均(12.20.3)个月;静止期17例,进展期5例。对照组21例,其中男13例,女9例,年龄312岁;病程3个月至3年半,平均(12.10.5)个月;静止期16例,进展期6例。所有患儿均无系统性疾病,2月内均未接受系统治疗,3个月内未接受糖皮质激素、紫外线以及其他外用药物治疗。两组患儿在年龄、性别、病程、病情方面无明显差别,具有可比性。1.2 治疗方法治疗组用卤米松乳膏(澳能乳膏,香港澳美制药有限公司生产)搽涂于皮损处,对照组外用丙酸氯培他索乳膏(恩肤霜,广东顺峰药业有限公司),轻揉5min使药物尽量吸收,每天2次,均不加用其
14、他药物,3个月为1疗程。每月复查1次,记录疗效及副作用。所有患儿均完成并观察全过程。1.3 疗效判定标准参照中国中西医结合学会制定的标准2。痊愈:色素脱失斑全部消失,恢复正常肤色;显效:色素脱失斑部分消退或缩小,恢复正常肤色的面积为50%90%;有效:色素脱失斑为部分消退或缩小,恢复正常肤色的面积0.05)。不良反应:治疗组有2例(9.1%)发生皮肤毛囊性丘疹及皮肤红斑,均出现在用药第3个月。对照组共有16例(76.2%)发生不良反应,其中3例出现毛囊性丘疹,5例出现皮肤红斑及毛细血管扩张,3例出现皮肤萎缩,5例出现不同程度的色素沉着。不良反应发生时间:5例出现在第1个月,10例出现在第2个月
15、,1例出现在第3个月,未作特殊处理。经统计学分析,两组在副作用发生方面的差异有统计学意义(2=19.88,P0.05);但卤米松副作用少而轻,且发生较晚,在观察期第3个月才出现。对照组有16例出现不良反应,发生率为76.2%,与治疗组比较差异有统计学意义(P0.01),且副作用发生较早,多出现在观察期治疗第1、2个月。由于儿童皮肤较薄,药物吸收较多,所以用药不宜超过3个月5。综上所述,卤米松乳膏是治疗儿童面颈部白癜风疗效好、副作用少的药物之一,值得临床推广应用。【参考文献】1侯霞,梁玉梅.稳定期白癜风自体表皮移植术治疗的施护与体会J.广东医学院学报,2002,20(1):71.2中国中西医结合
16、学会皮肤性病专业委员会色素病学组.白癜风的临床分型及疗标准(2003年修订稿)J.中国中西医结合皮肤性病杂志,2004,3(1):65.3Kovacs S O.VitligoJ. J Am Acad Dermatol,1998, 38(5Pt1):647666.4王侠生,廖康煌.杨国亮皮肤病学M.上海:上海科学技术文献出版社,2005:651.5李建明,唐杨婷. 卤米松乳膏治疗儿童白癜风临床27例疗效观察J.中国皮肤性病学杂志,2005,19(3):186.中药配合针灸治疗中老年人带状疱疹后遗神经痛的临床观察来源:医学论文发表创新医学网作者:赖新平 作者单位:广东省兴宁市慢性病防治院皮肤科,广
17、东 兴宁 514500【摘要】目的:探讨中药配合针灸治疗老年带状疱疹后遗神经痛的疗效。方法:将166例患者随机分为中药口服加穴位针灸治疗组(A组)72例;针灸组(B组)56例;西药口服组(C组)38例,比较3组临床疗效。结果:A组与B组及C组总有效率比较差异均有统计学意义(P0.050.01)。结论:口服中药配合针灸治疗带状疱疹后遗神经痛疗效显著,且无明显不良反应,易被患者接受。【关键词】 带状疱疹;神经痛;后遗症;中药;针灸Effect of combined therapy of traditional Chineses medicine and acupuncture on post h
18、erpetic neuralgia after zoster in the middleaged and eldersLAI Xinping(Dermatology Department, Preventive and Treatment Hospital for Chronic Diseases in Xingning, Xingning 514500, China)ABSTRACT Objective: To explore the effects of combined therapy of traditional Chineses medicine and acupuncture on
19、 post herpetic neuralgia after zoster in the middleaged and elders. Methods: A total of 166 cases were randomly divided into combined therapy group (Group A, 72 cases) , acupuncture group (Group B, 56 cases), and western medicine group (Group C, 38 cases), and clinic effects in three groups were com
20、pared. Results: There were significant differences of total effective rate among three groups (P0.050.01). Conclusions: Combined therapy of traditional Chineses medicine and acupuncture is effective on post herpetic neuralgia after zoster without inducing side effect, and is acceptable for patients.
21、KEY WORDS Zoster; Neuralgia; Sequela; Traditional Chinese medicine; Acupuncture带状疱疹是由水痘带状疱疹病毒引起的累及神经及皮肤的常见病,临床以身体一侧出现带状分布的成簇小水疱,并伴有局部神经痛为特征。好发于老年患者。2007年3月2008年5月我科采用中药口服加穴位针灸治疗该病,疗效满意,现报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料搜集2007年3月2008年5月我院门诊及住院的166例带状疱疹患者。年龄4578岁,平均63.28岁,排除严重心、肝、肾功能损害者;严重高血压、糖尿病患者;长期使用皮质类固醇者及各种原因
22、中断治疗者。将166例患者随机分为中药口服加穴位针灸组(A组)72例,针灸组(B组)56例,西药组(C组)38例。A组男性37例,女性35例,病程20d18个月;B组男性32例,女性24例,病程24d20个月;C组男性19例,女性19例,病程18 d18个月。1.2 方法A组患者采用中药内服以理气活血,疏肝止痛为主,方药以柴胡疏肝散与活络效灵丹加减,基本处方:柴胡15g、枳壳15g、当归15g、赤芍15g、陈皮15g、甘草10g、丹参30g、乳香5g、没药5g、元胡15g、郁金15g,余邪未尽加黄芩15g、栀子10g,正气不足加黄芪30g,气阴两伤加党参15g、当归15g,头部加川芎10g,下
23、肢加牛膝15g,夜寐不安加远志15g、合欢皮15g,水煎服,每日1付。穴位治疗:根据西医神经解剖定位取穴,确定支配疼区的神经节段,取其患侧夹脊穴:发于面颊部者,取颈2颈4夹脊穴;发于胸背部者,取胸4胸11夹脊穴;发于腰腹部者,取胸10腰2夹脊穴;发于上肢者,取颈5胸2夹背穴;发于下肢者,取腰1腰5夹脊穴。有明显痛点者,可配合阿是穴,采用围刺法,即视疼痛局部范围大小,每次在痛区内取阿是穴38个,由痛区中心开始,依次向外围取穴,穴间上下左右间隔3cm左右,均匀分布。不同患者手法不同。(1)实证、急性痛症患者则用提插捻转,用泻法,留针2030min,每日2次,用毫针刺,局部卧针横刺;(2)实证、急性
24、病症患者可用三棱针于龙眼穴放血23滴,每日或隔日1次;(3)皮肤针或梅花针于疱疹周围浅刺,每日12次。B组患者口服维生素B1、维生素B6各10mg每日3次,每日肌肉注射维生素B12 1mL,同时配合针灸(针灸方法同上)。C组口服药物同B组,再配合曲安奈得注射液10mg、2%利多卡因注射液4 mL局部注射。1.3 疗效判定标准痊愈为疼痛基本消失,功能恢复;显效为疼痛明显减轻,偶有疼痛;有效为疼痛较前减轻,但仍有疼痛;无效为疼痛无改善,仍明显疼痛。总有效率以痊愈+有效+显效计算。1.4 统计学处理采用2检验,检验水准=0.05。2 结果3组疗效见表1。A组总有效率(95.8%)明显高于B组(91.1%)和C组(65.8%)(P0.050.01)。表1 3组临床疗效比较(略)3 讨论带状疱疹是由水痘带状疱疹病毒引起累及神经及皮肤的病毒性皮肤病,病因传统医学描述为:(1)多因情志不遂、饮食失调,以致脾失健运,湿浊内停,郁而化热,湿热搏结,兼感毒邪而发。(2)以针灸言,带状疱疹病常为心经火旺、脾肺湿热与肝胆火旺所引发。再者带状疱疹后遗神经痛为“络”病,“久
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