紫外-可见吸收光谱法定性定量测定食用合成色素

1、紫外-可见吸收光谱法定性定量测定食用合成色素1实验部分1.1主要试剂及仪器紫外-可见分光光度计色素标准：胭脂红、苋菜红、柠檬黄、日落黄和亮兰均为国家标准物质(GBW，由国家标准物质研究中心生产、提供。标准溶液：精密称取各色素标准50mg，用pH=6的水溶解并定容至50ml。此溶液每毫升含色素1mg，作储备液。用时取储备液以水稀释至每毫升含色素0.1mg，作标准工作液，亮兰进一步稀释至每毫升含色素0.01mg。其它试剂同国标法。1.2实验方法取标准溶液置于lcm石英比色皿中，以水为参比，于波长700nm190mn之间连续进行吸收扫描。测量工作条件如下：测量方式：ABSI吸收度(峰高。扫描范围：7

2、00nm190mm。(峰高记录范围：0-3.99A。扫描速度：Veryfast/很快扫描次数：1。显示方式：Overlay/重叠2结果与讨论2.1定性取标准溶液，在测量条件下进行连续吸收扫描。即得标准谱图。见图1-5。从标准谱图看，不同的色素具有不同的吸收波长及其谱图，谱图直观易于区别。胭脂红与苋菜红的鉴别。由于胭脂红与苋菜红在332nm，及220nm处附近都有吸收，且峰强弱相似，两者鉴别的要点如下：(1主色峰在508nm为胭脂红，在522nm为苋菜红。(2苋菜红在370nm、332nm及280nm有明显的逐级抬高的阶梯峰；而胭脂红在280nm处较332nm处的吸收为弱，故不形成阶梯峰。(3苋

3、菜红在350nm-410hm之间有一较宽(约有60nm的平台，而胭脂红的平台较窄，在360nm390nm之间(仅有30nm左右。2.2定量不同的色素具有不同的吸收波长，且在一定浓度下，峰高与含量成正比，故可定量测定。2.3标准曲线的配制胭脂红、苋菜红、柠檬黄、日落黄分别吸取标准工作液005、010、050、100、200、400、500、600、700、800ml；亮兰吸取(0.01mg/m1标准工作液0.20、0.50、1.00及(0.1mg/m1标准工作液020、050、100、200、400、600和800ml，分别置于10ml比色管中，用水稀释至刻度，混匀后按方法进行测量。标准系列一次

4、配制，在不同波长下，每种色素都可绘制出两条标准曲线，线性范围宽，高、低浓度差最大达100倍，在线性范围内。浓度与峰高呈非常显著相关，r09999。见表1。2.4方法检出限、灵敏度及精密度按实验方法重复测定标准曲线6次，合并线性方程，见表1。从标准曲线上查出峰高值0.02处的浓度值为方法检出限，则各色素的方法检出限为(ug/ml：胭脂红0.51；苋菜红0.58；柠檬黄0.46；日落黄0.40；亮兰0.086。从标准曲线的斜率计算得各色素表观摩尔吸光系数为(Lmol-1cm-1：胭脂红2.27 104；苋菜红2.22 104；柠檬黄2.33 104；日落黄2.18 104；亮兰1.23 104。重

5、复测定各标准曲线6次，变异系数平均为2.84，范围在1.764.01之间，各标准曲线变异系数见表1。2.5标准加标回收实险据标准曲线的线性范围，取低、中、高浓度值的1/2作原含量，分别为C1、C2、C3；每个原含量再分别加入C1、C2、C3的量作加标量，然后按方法进行测定。结果五种合成色素的标准加标回收率在96.2-102.5之间说明本方法准确度高。2.6样品测定及样品加标回收实验测定样品时，样品的处理及提取按国标法进行，提取液用本法及HPLC法测定，结果见表2。取1、2、4。、6样作样品加标回收实验，结果见表3。两种方法的测定结果作配对t检验，P005。说明两种方法测定结果无显著性差异。从表3知，样品加标回收呈现系统负偏差。平均回收率仅为92.0，主要原因是在样品处理、提取过程中，因吸附、提纯、洗脱、转容等多种步骤引起损失所致。3小结本文应用紫外-可见吸收光谱法测定食用合成