益脾通便方对脾虚便秘小鼠胃肠功能调节的研究

1、66中 医 药 信 息2008年第25卷第3期Information on T raditional Chinese Medicine Vol 25, No 3, 2008生成有关, 此结论与王氏3等结论一致。本实验结果还显示, 脑心康片抗自由基生成作用虽与剂量有一定关系, 但并不完全符合量-效关系, 有关机制需进一步探讨。NO 的毒性作用在于它本身与超氧阴离子(O 2 结合, 形成亚硝酸盐过氧化物, 进而分解为 OH 和NO 2-, 它们实际上比NO 更活跃, 而具有更大的毒性。NO 在脑缺血早期升高, 随缺血时间延长逐渐下降, 再灌注后又升高。已证明NO 在脑缺血再灌注损伤中起重要作用-4

2、-由结果可见, 再灌注2h 后, NO 明显升高, 而脑心康片高剂量组却可减少其生成, 说明脑心康片有抑制再灌注脑损伤引起的NO 升高作用, 已知NO 的生成与NOS 活性有密切关系, 因此, 脑心康片抑制NO 生成作用是否与影响NOS 活性有关, 需进一步研究。参考文献:1 梁荣能. 白藜芦醇对脑缺血损伤的抗自由基作用J. 中国药理学通报, 1996, (12 :126.2 Martz D, Beer M , Betz AL. Di methylthi ourea reduces isc hemia brain edema without affecting cerebral bl ood

3、flow J. Cereb Blood Flow Metab, 1990, (10 :352.3 Wang F, Qu L. Effect of phenolic alkaloi ds from Menispe mum daucicumon myo-cardical-isc hemia-reperfusion injury i n rabbi ts J. ActaPharmoc ol Sinica, 2001, (22 :1130.4 Gursoy-Ozdemir Y, Bolay H, et al. Role of endothelial ni tric oxide generatiion

4、and peroxynitrite formation in reperfusion inj ury after focal cerebral is themia J. Stroke, 2000, (31 :1974.。由于NO 不稳定, 易降解成NO 2和-NO 3, 因此不易直接测定, 但通过测定其氧化代谢产物硝酸盐和亚硝酸盐可间接反映NO 的变化。本实验利用硝酸还原酶特异性将NO 3-还原为NO 2-, 通过显色反应测定其浓度高低, 从而反映NO 含量的变化。益脾通便方对脾虚便秘小鼠胃肠功能调节的研究杨勇1, 吴晓丹2, 任红3, 李丽华3, 梁月华3, 王绵之1(指导(1. 北京中医药

5、大学, 北京100029;2. 黑龙江中医药大学, 黑龙江哈尔滨150040; 3. 北京大学医学部中西医结合教研室, 北京100083摘 要:益脾通便方是导师王绵之教授多年临证总结的有效验方, 临床用于治疗饮食不节, 损伤脾胃, 脾胃虚损, 运化传导不利之大便秘结。本实验的目的在于探讨益脾通便方对胃肠功能的调节作用及其可能的机理。实验采取给小鼠灌胃易蒙停的方法建立了急性便秘模型, 并以此模型探讨益脾通便方的药效及作用机制。益脾通便方对正常小鼠的排便功能无明显影响, 但对便秘小鼠有较好的通便作用, 且呈现一定的量效关系; 能明显增加便秘小鼠小肠推进; 能增加便秘小鼠的总酸排出量, 并能加强胃蛋

6、白酶的分泌, 从而促进消化; 能增加正常小鼠十二指肠、回肠、大肠各段的蠕动频率和幅度, 从而加强胃肠动力, 能明显增加便秘小鼠脑内及大肠的5-HT 的含量, 说明益脾通便方可能通过影响5-HT 的释放而调节胃肠运动。关键词:脾虚; 便秘; 胃肠功能; 方剂; 实验研究中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1002-2406(2008 03-0066-031 实验材料1. 1 动物昆明小鼠雄性, 体质量1822g, 由北京大学医学作者简介:杨勇(1971-, 男, 医学博士, 北京中医药大学方药系讲师,主要研究方向:历代名医经典名方的配伍理论和实验研究。收稿日期:2008-01-

7、22修回日期:2008-02-10部实验动物中心提供。适应性喂养1周, 饲料为市售固体饲料, 饮用水为自来水。1. 2 药物益脾通便方(白术、炒枳实、槟榔、制香附、焦山楂、炙鸡内金、黄连、使君子、炙甘草 水煎浓缩液, 2g ml -1, 大黄水煎浓缩液1. 5g ml -1, 4 保存; 通便灵(河北省临西县制药厂生产 , 易蒙停(西安杨森制药有限公司生产 , 伊红y 指示剂, 酚红指示剂, 活性碳, 甲2008年第25卷第3期中 医 药 信 息Vol 25, No 3, 2008Information on Tradi tional Chinese Medicine67基橙, 五羟色胺(美国

8、Sigma 公司生产 。2 实验方法脾虚便秘小鼠造模:本实验采用饮食失节加劳逸失常方法, 结合灌止泻药易蒙停的复合方法造模, 小鼠每天18 冷水游泳20min, 每日2次, 每日限食4g/只, 共4周造成脾虚模型, 然后用易蒙停以1g kg -1的剂量给脾虚便秘小鼠灌胃, 造成复合脾虚便秘模型。2. 1 对脾虚便秘小鼠排便功能的影响参考文献法, 观察粪便的性状(软硬度、颗粒大小 , 记录给药后第1粒含指示剂粪便的排出时间及8h 内排出的粪便粒数。2. 2 对脾虚便秘小鼠小肠推进的影响(碳末法参照文献法2, 计算碳末推进距离与胃肠道全长的百分比。2. 3 对小鼠胃酸胃蛋白酶分泌的影响(滴定法,

9、蛋白毛细玻管法按照文献法3, 4, 测量胃液量及总酸度、总酸排出量和胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量。2. 4 对脾虚便秘小鼠离体平滑肌收缩功能的影响(离体肠管法参考文献法51出时间长于大黄组, 但短于通便灵组。表1 益脾通便方对便秘小鼠排便功能的影响( x ! s 组别正常对照模型组通便灵组益脾通便方低益脾通便方中益脾通便方高大黄组药物剂量0. 2ml/只0. 2ml/只1. 25g/kg 5g /kg 10g/kg 20g/kg 5g /kg排出时间(min 126. 2! 31. 7361. 23! 29. 25309. 15! 58. 23*265. 0! 67. 7*228. 75! 8

10、3. 40*186. 67! 52. 04*粪便粒数15. 8! 8. 473. 88! 2. 368. 57! 4. 16*9. 35! 3. 12*9. 78! 4. 51*10. 21! 5. 04* #*141. 26! 20. 16*-注:*与模型组比较P <0. 05, *与模型组比较P <0. 001, 与正常组比较P <0. 05, 与通便灵组比较P <0. 05, #与益脾通便方低剂量组比较P <0. 05。3. 2 对小鼠小肠推进的影响 见表2。实验结果显示, 益脾通便方能显著增加便秘小鼠的小肠推进, 其作用要优于通便灵。表2 益脾通便方对小鼠

11、小肠推进功能的影响( x ! s 组别正常对照组便秘组益脾通便方组通便灵组动物数10101010小肠推进比(% 64. 66! 12. 26*36. 82! 6. 4555. 41! 6. 35*48. 16! 3. 12* *, 测量离体肠管的频率和幅度。2. 5 对脾虚便秘小鼠脑内及胃肠道5-HT 的影响(荧光法参照文献法6, 7, 在0. 4ml 的试管中, 按顺序加入0. 1ml0. 5%的半胱胺酸, 2. 5ml 的OPT(邻苯二甲醛, 0. 006%, 溶于10N 盐酸 , 在沸水浴中加热10min, 置入冰水浴中冷却, 以激发光360nm, 发射光470nm 测定5-HT 的荧光

12、强度。5-H T 的空白管:将剩余的组织提取液混合取0. 4ml, 先加入0. 1ml 的高碘酸钠(0. 02% , 其余步骤同样品管。以上实验结果均运用t 检验的方法加以统计分析。3 实验结果3. 1 对便秘小鼠排便功能的影响 见表1。肉眼观察粪便性状, 可见便秘小鼠排出的粪便颗粒小、硬度大; 而益脾通便方中低组的小鼠排出的粪便颗粒大、粪质软、无稀粪; 高剂量组粪质较稀软, 但成形; 通便灵组小鼠排出的粪便较益脾通便方组颗粒要小, 粪质也稍硬; 大黄组排出稀粪, 不成形。表2. 2实验结果显示:益脾通便方中、高剂量组均能缩短便秘小鼠第1粒含指示剂粪便的排出时间, 似乎可以看出有量效依赖的趋势

13、, 但统计学分析无意义, 与模型组比较, 有显著性差异, 但与正常组比较, 其第1粒粪便排, 1 注:*与模型组比较P <0. 001, 与通便灵组比较P <0. 01。3. 3 对小鼠胃酸和胃蛋白酶分泌的影响 见表3, 表4。结果显示益脾通便方能显著增加小鼠的胃酸排出量, 与通便灵比较, 有显著性差异, 但对便秘小鼠的胃酸总酸度无明显影响。表3 益脾通便方对小鼠胃酸分泌的影响( x ! s 组别正常对照模型组通便灵益脾通便方动物数10101010总酸度(mmol/L80. 71! 14. 2781. 50! 21. 6183. 79! 20. 3192. 03! 30. 93总酸

14、排出量(umol/h42. 57! 10. 5249. 94! 16. 2250. 16! 11. 36102. 36! 37. 06*注:*与正常组、模型组、通便灵组比较, P <0. 001。结果显示:益脾通便方能明显增加胃蛋白酶排出量, 与模型组和通便灵治疗组比较, 有显著性差异。表4 益脾通便方对小鼠胃蛋白酶分泌的影响( x ! s 组别正常对照模型组益脾通便方组通便灵动物数810108胃蛋白酶活性(活性单位/ml 195. 95! 12. 28190. 8! 15. 44202. 85! 15. 47203. 65! 17. 68胃蛋白酶排出量(活性单位/h 68. 67! 9

15、. 1573. 54! 14. 05149. 51! 19. 44*84. 83! 12. 53注:*68中 医 药 信 息2008年第25卷第3期Information on T raditional Chinese Medicine Vol 25, No 3, 20083. 4 益脾通便方对脾虚便秘小鼠肠道平滑肌功能的影响 见表5。频率(次/min组别正常组部位给药前十二指肠回肠大肠420! 34. 23269. 75! 21. 7425. 38! 2. 62结果显示:益脾通便方能显著提高脾虚便秘小鼠十二指肠、回肠、结肠的收缩频率和幅度。幅度(cm给药后给药前0. 19! 0. 050.

16、29! 0. 070. 55! 0. 09给药后0. 39! 0. 08*0. 59! 0. 15*1. 01! 0. 16*表5 益脾通便方对离体小鼠肠平滑肌的作用( x ! s 496. 25! 54. 23*304. 5! 13. 64*33. 38! 3. 58*注:*与给药前比较P <0. 05, *与给药前比较P <0. 001。3. 5 对小鼠脑内及胃肠道神经递质的影响 见表6。实验结果显示:便秘小鼠脑内、大肠的5-HT 的含量较正常组明显降低, 而应用益脾通便方可以明显提高便秘小鼠脑内及胃肠道5-HT 的含量, 有显著性差异。便秘小鼠小肠内5-HT 的含量也有降低的

17、趋势, 但统计学上没有差异, 应用益脾通便方有增加小肠内5-HT 含量的趋势。表6 益脾通便方对小鼠脑内及胃肠道5-HT 的影响( x ! s , ug /g 组织组别正常对照组便秘模型组益脾通便方组动物数10910脑组织1. 18! 0. 170. 75! 0. 22*小肠4. 28! 1. 193. 59! 1. 204. 23! 1. 24大肠7. 61! 0. 746. 09! 0. 58*7. 32! 1. 51*1. 02! 0. 19*注:*与模型组比较P <0. 05, *与正常组比较P <0. 01。4 讨论4. 1 增强胃肠道的运动益脾通便方能有效缩短便秘小鼠的

18、平均胃肠通过时间, 增加便秘小鼠的粪便排出粒数, 虽然其在通便时间上长于大黄, 但从粪便性状看, 小鼠排出成形软便, 而大黄排出稀粪, 说明益脾通便方的通便作用是温和的, 避免了峻下造成的气津受损, 符合临床攻补兼施的治疗原则。进一步的实验结果证实, 益脾通便方能加快胃排空和小肠推进, 从而缩短排便时间, 改善便秘症状。有报道8便秘患者有上消化道动力失常, 益脾通便方可以纠正便秘小鼠全消化道的动力减低, 从而增加排便。4. 2 增进化学消化机能益脾通便方增加胃酸和胃蛋白酶的分泌, 促进消化, 增加肠腔的容积和肠体重量, 表明其能增加肠腔分泌, 润滑肠腔, 从而证实了其健脾助运、润肠通便的作用。

19、4. 3 益脾通便方的可能作用机制益脾通便方能增加离体肠段的蠕动的频率和幅度, 其促动力作用与体内实验结果相一致。胃肠动力受包括神经、体液因素在内的多种因素的影响, 其调控机制也极为复杂。离体实验的结果说明益脾通便方能直接作用于肠道的神经肌肉系统, 引起平滑肌蠕动增强。现代研究表明, 支配消化道的神经以肠神经为主, 而肠神经系统(E NS 具有相对完整的独立性, 其可以在去除外来神经的情况下独立完成一系列的反射活动, 如蠕动反射, 大脑和ENS 之间有某种程度的相似, 因此有人将ENS 称为肠脑, 益脾通便方可以直接影响ENS 而发挥作用。本实验测定了脑内及胃肠道神经递质5-HT 的含量, 结果表明, 益脾通便方能增加胃肠道及脑内5-H T 的含量, 故认为益脾通便方主要通过增强副交感神经的兴奋性, 增加5-HT 的释放而实现其影响胃肠电活动, 进而加强肠肌蠕动, 并增加胃肠道的分泌, 从而促进排便。尽管现在还不明确脑内5-HT 的增加对胃肠道的运动和分泌有何影响, 但可以断言其对胃肠道功能的调节作用是整体和局部的综合效应。5 结论5. 1 益脾通便方有促进胃肠道运动、改善便秘症状的作用, 其能促进胃肠消化液的分泌, 增强消化机能, 符合中医临床健脾助运, 消积通便的功效。5. 2