流式细胞术步骤_第1页
流式细胞术步骤_第2页
流式细胞术步骤_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、利用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡1. 细胞按每孔4X 105个的密度接种于60细胞培养皿内，培养 过夜后，用相应药物处理细胞。（设置实验组和对照组，实验组依辛伐他汀浓度分为 3组，2卩、5卩、10卩辛伐他汀组正常对照组 （组） ：胰岛素终浓度 0.058A组：辛伐他汀终浓度 2卩胰岛素终浓度0.058 ;B组：辛伐他汀终浓度 5卩胰岛素终浓度0.058 ;C组：辛伐他汀终浓度10卩胰岛素终浓度0.058 ;于37C, 52培养箱中孵育48h）2. 胰酶消化收集细胞， 并用 1 缓冲液清洗剩余细胞一次， 全部 加入 15 管中。3. 800 离心 5 分钟，去除上清，加 5 缓冲液重悬细胞，再次

2、离 心弃上清，重复两次，最后重悬细胞于 0.5 中。4. 用低速振荡器边震动边加入 5预冷的70%乙醇，固定，4C过 夜。5. 次日将固定好的细胞以 1000 的转速离心 5分钟， 弃上清， 加 入 4 清洗一次，用 0.4 重悬细胞。6. 加入5卩L （10 ） 37 C消化1小时，加入终浓度50碘化丙 啶（）4C避光染色过夜（或者37C避光染色1小时）,在 流 式细胞仪上分析。利用流式细胞抗体检测检测细胞膜表面蛋白的变化1. 细胞按每孔4X 105个的密度接种于60细胞培养皿内，培养 过夜后，用相应药物处理细胞。2. 胰酶消化收集细胞，并用1缓冲液清洗剩余细胞一次，全 部加入15管中。3.

3、800 离心5分钟，去除上清，加5缓冲液重悬细胞，再次 离心弃上清，重复两次，最后重悬细胞于0.1中，并转移到1.5离心管中。4. 按照1:100加入1 一抗（如下图对应），置于垂直混合液上室 温孵育1-2小时。5. 1500，小型离心机离心 5分钟，去除上清，加 1缓冲液重悬细胞，再次离心弃上清，重复3次，最后将洗好的细胞重悬于0.1 中。6. 分别将荧光二抗488、567按照1:100比例加入细胞悬液中， 室温孵育1小时。7. 1500离心5分钟，去除上清，加1缓冲液重悬细胞，再次 离心弃上清，重复3次，最后重悬细胞于0.2中。8. 用锡箔纸包住避光，将细胞加入流式管中，在流式细胞仪上分析。检测类型细组组组A组B组C组胞一抗无1二抗无488488488488488目的空白对昭八、同型对照实验组对昭八、实验组1实验组2实验组34检测类型细胞组组组A组B组C组一抗无2a4444二抗无567567567567567目的空白对昭八、同型对照实验组对昭八、实验组1实验组2实验组3（因为 和4同样为鼠源抗体，并且分开进行

人人文库> 全部分类> 应用文书 > 作业报告

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论