初始污染菌方法验证

1、1. 目的验证产品初始污染菌数的试验方法.2. 范围适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测.3. 责任质量检验人员负责执行此规程.4. 依据标准及相关文件2021版?中华人民共和国药典第二部?附录XIJ微生物限度检查法GB/T19973.1-2005?医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一局部 产品中微生物数量的估计?GB15980-2021?一次性使用医疗用品卫生标准?5. 试验产品6. 本卷须知6.1本操作应在环境洁净度 10000级下的局部洁净度100级的无菌操作台内进行.操作过程应尽量预防任何可能使结果发生偏差的污染.6.215min前方可进行实验操作.6.3膜在过滤前后的完整性.

2、7. 器材与试剂7.1器材35 C恒温培养箱、23 C恒温培养箱、灭菌器、洁净工作台、无菌过滤装置、镶子、剪子、电子天平、移液器、 接种环7.2稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌.pH 7.0无菌氯化钠溶液一蛋白月东缓冲液0.9%无菌氯化钠溶液.7.3培养基营养琼脂培养基：按说明书方法保存配制.玫瑰红钠琼脂培养基：按说明书方法保存配制.改良马丁液体培养基：按说明书方法保存配制.改良马丁琼脂培养基：按说明书方法保存配制.营养肉汤培养基：按说明书方法保存配制.8. 计数方法的验证试验当建立产品初始污染菌数检查法时,应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证：以确认所采用

3、的方法适合于该产品细菌、霉菌及酵母菌的测定.假设产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时,计数方法应重新验证.验证时,按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及以下要求进行.对各试验菌的回收率应逐一进行验证.8.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代,从菌种保藏中央获得的冷冻枯燥菌种为0代,并采用适宜的菌种保藏技术,以保证试验菌株的生物学 特性.金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孑包杆菌 白色念珠菌CMCC B 26 003CMCCB 11 102CMCCB 63 501CMCCF 98 001CMCC F 98 003Candida albicansStaph

4、ylococcus aureus Escherichia coli Bacillus subtilis黑曲霉 Aspergillus niger8.2菌液制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽弛杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养 基中或营养琼脂培养基上,30-35 C培养18-24小时,接种白色念珠菌的新 鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上23-28 C培养24-48小时.上述培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50-100cfu 的菌悬液.接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上23-28 C培养5-7天,参加3-5ml含0.05% (mol/ml )聚

5、山梨酯80的0.9%无菌氯 化钠溶液,0.05% (mol/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml含菌数为 50-100cfu的弛子悬液.注：菌液制备后假设在室温下放置,应在 2小时内使用,假设保存在 2-8 C,可在 24小时内使用.黑曲霉孑包子悬液可保存在2-88.3供试液的制备在洁净工作台内,将样品分别放入配制好的pH7.0无菌氯化钠溶液一蛋白月东缓冲液中,充分震荡,作为试验液.8.4培养条件 细菌30-35 C培养3天； 霉菌及酵母菌23-28 C培养5天； 8.5验证方法8.5.1验证试验至少应进行3次独立的平行试验,并分别计算各试验菌每次试验 的回收率试验组菌回

6、收率=(A-C) /B 稀释剂对照组菌回收率=D/B 8.5.2薄膜过滤法依据ISO11737-1所述,膜过滤法尤其适用于微生物浓度较低的悬液.因此 本验证首选薄膜过滤法.A. 试验组100ml样品供试液100ml稀释的菌悬液,包括：1ml含50-100cfu的菌悬液和99mlPH7.0 无菌氯化钠一蛋白月东缓冲液；B. 菌液组100ml稀释的菌悬液,包括：1ml含50-100cfu的菌悬液和99mlPH7.0无菌氯化钠一蛋白月东缓冲液;C. 供试品对照组100ml样品供试液冲洗液:100ml无菌氯化钠一蛋白月东缓冲液PH7.0D. 稀释剂对照组100ml无菌氯化钠一蛋白月东缓冲液PH7.0100ml稀释的菌悬液,包括:1ml含50-100cfu的菌悬液和99mlPH7.0无菌氯化钠一蛋白月东缓冲液；8.5.3结果判定在3次独立的平行试验中,稀释剂对照组的菌数回收率应均不低于70%假设试验组的菌数回收率均不低于 70%照该供试液制备方法和计数法测定供试品的70%应采用其它适宜方法,并重新进行验证.