核酸蛋白测定仪使用说明及问题解决

1、仪器名称：核酸蛋白测定仪使用方向：快速、可靠地检测双链/单链 DNARNA 寡核昔酸,蛋白质和细菌细胞密度/混浊度型号：Biophotometer生产厂家：Eppendof添置时间：2006?氤灯光源,寿命长达 10 年,无需预热?可检测吸光度范围：0.000-3.000A?波长范围 230nm,260nm,280nm,320nm,562nm,595nm1%?光度计准确度:1A 的误差士即小匕 0.5%土?光度计精确度：1A 约为王累任目匕：?可测量核酸,蛋白质的紫外测定,lowry,bradford,BAC 比色法测定以及 OD600?储存和查看最新 100 个检测结果?自我检测功能?数据可

2、导入到 PC 机?自动计算浓度和稀释度,可转换浓度单位使用说明：操作说明：准备：开始测定前只需开启仪器背后的电源开关即可开始测定,无需预热.一、核酸浓度测定包括 dsDNAssDNARNAOligo1 .例如待测定样品为 dsDNAeg：PCRT 物,按下键“7/dsDNA假设待测样品为 ssDNAeg：反转录合成的第一链 cDNA 产物,那么相应按下键“8/ssDNA;假设待测样品为 RNA 那么按下键“9/RNA；假设待测样品为 Oligo寡聚核甘酸,eg:PCR 弓 I 物,那么相应按下键“6/Oligo.2 .将空白对照置入样品孔.注意：空白对照是空白液,并非所有情况都是水.例如用Tr

3、is 溶液溶解 DNA品,那么要用 Tris 液做空白对照.3 .按下键“Blank；4 .仪器记录空白对照,设置为 0.000A;5 .将第一个样品置入样品孔；6 .按下“Sample;7 .仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值,以及其他相关参考比值；8 .直接放入第二个样品；9 .按下“Sample;10 .仪器显示第二个样品的吸光度值和浓度值,以及其他相关参考比值；11 .依次测定,每个样品的测定值将自动存储在机器中,查看测定结果的方法如下：1按下键./Function2选择“DISPLAY-RESULT,按 Enter 键,查看每个样品的测定值记录本机可存储 100个样品的测定值.设定

4、样品的稀释度1按下键“Dilution；2输入样品体积和稀释液体积,按 Enter 键确认.二、蛋白质浓度的直接测定280nm 测定1. 按下键“4/Protein；2. 将空白对照置入样品孔；3. 按下键“Blank；4. 仪器记录空白对照,设置为 0.000A；5. 将第一个样品置入样品孔；6. 按下“Sample；7. 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值,以及其他相关参考比值；8. 依次测定,每个样品的测定值将自动存储在机器中,可查看测定结果.三、蛋白质浓度显色法的间接测定Bradford,Lowry,BCA1. 按下键1/Bradbordor2/LowryorBCA 选择蛋白质显色反

5、响的方法；注：Bradford 键按两次,每次显示不同的测定范围.2. 设置标准曲线的标准样品数量、测定次数和浓度范围.按下键“Parameter用上下键进行选择和参数调整.3. 将空白对照置入样品孔；4. 按下键“Blank；5. 仪器记录空白对照,设置为 0.000A；6. 将第一个标准品或样品如需沿用已存储的标准曲线,可直接测样品置入样品孔；7. 按下“Sample或Standard;8. 依次测定标准品或样品,每个样品的测定值将自动存储在机器中,查看测定结果.四、OD600 细菌生长密度测定1. 按下键“5/OD600；2. 将空白对照置入样品孔；3. 按下键“Blank；4. 仪器记

6、录空白对照,设置为 0.000A；5. 将第一个样品置入样品孔；6. 按下“Sample；7. 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值；8. 依次测定,每个样品的测定值将自动存储在机器中,查看测定结果.考前须知：1为了尽量减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于 0.1A,吸光值最好在 0.11.5A.在此范围内颗粒的干扰相对较小,结果稳定.样品的浓度不能过低或者过高.2混合要充分,否那么吸光值太低,甚至出现负值；3混合液中不能有气泡,空白液无悬浮物,否那么读数漂移剧烈；4必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否那么测定浓度结果差异太大；5换算系数和样品浓度单位选择要一致；6不能采用窗口

7、磨损的比色杯；7样品的体积必须到达比色杯要求的最小体积50ul；8 通常浓度的样品可以用 10mm 光程长度进行检测.对于高浓度的样品,只需将比色皿旋转 90.,使用稍短的 2mm 光径进行检测.重要的比值表示样品的纯度：1 A260/A280,用于评估样品的纯度.纯洁的样品,比值大于 1.8DNA或者 2.0RNA.如果比值低于 1.8 或者 2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响.2 A230 表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物、多肽、苯酚等,较纯洁的核酸 A260/A230 的比值大于 2.0.3 A320 检测溶液的混浊度和其他干扰因子,纯样品 A320 一般是 0.FAQ:1.

8、 问：仪器读数漂移答：所有的分光光度计测定的都是吸光值或者透光值,Biophotometer 以吸光值表示.然后通过系列计算因子换算成浓度.所以反映数据是否准确和仪器性能的关键指标是吸光值.当同一样品的所有吸光值在均数的正负 0.5%左右浮动,属于正常.如果读数位于一个标准品的 1%的误差范围内,说明测试准确.2. 问：读数出现负值,或者几次读数相差非常大答：?在测试之前,需要做空白测试.空白液必须与溶解和稀释样品的液体性质一致.?测试之前必须充分混匀,并保证无气泡产生.?测试种注意比色杯方向一致,光径准确.3. 问：上述所有问题我都是正确处理,依旧出现读数不稳的现象.答：?样品浓度太低,A2

9、60nm 的吸光值必须0.1,读数才有意义.?考虑样品是否刚从冰箱取出,样品在室温条件下有升温现象,会导致读数不稳定现象.?另外,大多数客户采用水作空白,应在测试前保证水新鲜和纯洁.如果水中有漂浮物,会导致读数严重漂移.4. 问:A280,A230,A260,A320 各个指标的意义是什么?以及 A260/230,A260/A280 比值范围在多少范围内正常.答：?260nm 波长一般是核酸的吸收峰,A260 一般表示核酸的吸光度?280nm 波长一般是蛋白质的吸收峰,A280 一般表示蛋白质的吸光度?当样品中出现悬浮物,微生物等大颗粒物质,A320 的读数相对增大.纯洁的样品中,320nm的

10、吸光值是 0,一般如果 A320 大于 0.01,应该设定 A320correct 功能为“ON?230nm 的吸光值表示样品中苯酚,芳香族化合物,肽,碳水化合物等杂质的含量?A260/A280 的比值表示 DNA者 RNA 样品纯度,前者一般 1,8-2.0,后者一般在 2.0-2.2 的范围内,表示核酸样品比拟纯.如果蛋白质污染会降低这些笔直.?A260/A230 的比值一般大于 2.0名称正常值范围工 3202.05.核酸可测定的最小值是多少？蛋白质可测定的最小值是多少？答：仪器的吸光值范围 0.000-3.000 之间.DNA 样品测试中,检测的最低吸光值 0.05,相当于 125ngDsDNA/50ul 样品,浓度 2.5ug/mlRNA 样品测试中,检测的最低吸光值 0.05,对应的浓度 2ug/ml,100ngRNA/50ul 样品.但实际操作中,要求 A260nm 的吸光值0.1 的