唾液尿素酶检测法-HPS诊断儿童幽门螺杆菌感染的评价

1、唾液尿素酶检测法-HPS诊断儿童幽门螺杆菌感染的评价叶国钦，叶小钦，叶小培Ameritek USA 螺旋菌研究所, 美国 西雅图【摘要】目的：评价唾液尿素酶检测法HPS在诊断儿童幽门螺杆菌感染中的价值。方法：采用“幽门螺杆菌唾液测试版”(HPS)1，在2008年月至9月，对浙江大学医学院附属儿童保健院35例有消化不良症状的初诊患儿进行唾液检测，其中27例同时接受13C-UBT试检；同時对100例體撿的小学生进行HPS检测。结果：35例有消化不良症状的患儿HPS阳性率为88.57%，其中27例接受13CUBT试验阳性率为25.92%；100名體撿儿童HPS阳性率为40%，两组比较差异显著(X2=

2、24.57，P<0.01)。结论：唾液中存在高幽门螺杆菌检出现象，说明在儿童中幽门螺杆菌感染非常常见，有消化不良症状的儿童幽门螺杆菌感染尤为严重。患病儿童个体发育不良和同年龄的儿童相比，体重身高都要差一些。亚洲儿童个体发育和欧洲儿童相比，身高，体重都比较小一些。经过长时期临床的观察发现这些症状是和螺旋杆菌感染有关, 儿童幽门螺杆菌感染值得重视。【关链词】  幽门螺杆菌 抗原 唾液 HPS儿童患有幽门螺杆菌(H.Pylori，简称Hp)感染是非常常见的。儿童感染幽门螺杆菌后主要症状是消化不良、发育与营养状况较差和贫血现象等。我们于2008年6月至9月，在浙江大学医学院附属儿童保健

3、院，对35例有消化不良症状的初诊患儿采用“幽门螺杆菌唾液测试板”(HPS)检测唾液中儿童中幽门螺杆菌感染抗原，其中27例用时进行13C尿素呼气试验(UBT)；同期在杭州市某鐵路小学对100名體撿的儿童进行HPS检测。现将结果报道如下：1 资料和方法1.1 研究对象 35例有消化不良症状的患儿中，男16例，女19例，年龄7.4(313)岁。100例體撿状儿童中，男52例，女48例，年龄9.2(813)岁。1.2 研究方法 唾液标本采取 受检者留取唾液1ml于试杯内送检。 唾液Hp抗原HPS检测法 将唾液吐入塑料杯中；用吸管吸取4滴唾液，滴入取样杯中；滴加2滴缓冲液于取样杯中；更换吸管，

4、充分混匀后，吸取3-4滴混合液，滴入唾液板的吸样窗口6,5-15分钟观察结果，如指示窗口5显示T线、C线，说明螺旋杆菌阳性；如指示窗口5只显示C线而没有T线，说明螺旋杆菌阴性。注意事项：测定前，患者一小时内不能进行饮食和饮水。1.3 13C-UBT试验 按常规方法进行。1.4 统计学处理 采用X2检验，P<0.05为差异有统计学意义。2 结果35例有消化不良症状的患儿HPS阳性31例(88.57%)；100名无症状體撿儿童HPS阳性率为40%。两组比较HPS阳性率有显著性差异(X2=24.57，P<0.01)。35例有消化不良症状的患儿中，27例同时进行13CUBT试验，

5、其中阳性7例(25.92%)，此7例HPS均呈阳性(100%)。3 讨论来自美国的报道2,3,4,，对一组平均为53月的婴幼儿进行调查，发现69.4%血清中幽门螺杆菌抗体阳性。瑞士一学者对858名小学生进行健康调查，发现81%的儿童患有幽门螺杆菌感染。一组来自东京的报道5，他们对283名日本儿童(平均年龄11.5岁)调查发现83%有幽门螺杆菌感染。我们的资料显示，35例有消化不良症状的儿童，HPS检测阳性率高达88.57%；100例无症状體撿儿童，HPS阳性率为40%。说明在儿童中幽门螺杆菌感染非常常见，有消化不良症状的儿童幽门螺杆菌感染尤为严重。儿童幽门螺杆菌感染通常受家庭人员健康

6、状况的影响6，父母双方都感染幽门螺杆菌，儿童感染的机会是44%；父母一方感染幽门螺杆菌，儿童感染的机会是30%；父母都未感染幽门螺杆菌，儿童感染的机会是21%。幽门螺杆菌在儿童中的传播可能是被污染的食物感染口腔，再从口腔到胃这一途径。因此，胃幽门螺杆菌炎症的源头在口腔中，幽门螺杆菌随着唾液不断吞入胃内，在胃内定植引起胃幽门螺杆菌炎症。伦敦大学医学院查了100名儿童，用胃镜、RUT、切片组织培养的方法诊断胃幽门螺杆菌感染。从阳性儿童的口腔牙菌斑中用PCR检测幽门螺杆菌，发现68%胃幽门螺杆菌阳性者，其牙菌斑有幽门螺杆菌存在，同时在胃幽门螺杆菌阴性儿童也有24%在牙菌斑中找到幽门螺杆菌。彭惠等7采

7、用PCR,SSCP法检测138例胃溃疡和159例十二指肠溃疡患者的唾液和胃黏膜，幽门螺杆菌的检出率分别为71.7%和100%，98%口腔与胃内的幽门螺杆菌呈现相同的单链构象。作者对另一组126例成人慢性胃炎初诊患者进行HPS检测，同时接受14CUBT、RUT或WS银染检查，结果显示HPS的阳性率为73.02%，14CUBT、RUT、WS银染总阳性率为53.17。本组有消化不良症状的患儿HPS阳性率为88.57%，13CUBT阳性率为25.92%，13CUBT阳性率明显偏低的原因有待进一步探讨。但7例13CUBT阳性的患儿HPS检测均呈阳性，支持胃幽门螺杆菌感染者唾液中存在高幽门螺杆菌检出现象。

8、来自东京的另一报导讲，他们对283个日本儿童（平均年龄是11.5岁）调。查发现83%的幽门螺旋杆菌者都有口腔螺旋杆菌的感染，这些患病儿童伴也有贫血现象5。有一批巴西的报导，儿童随着年龄的增长螺旋杆菌感染率随着增长8。朝鲜一篇报导称，儿童有胃螺旋菌感染者，除了一般营养不良之外，还通常有明显血清鐵含量下降（正常为39mg/ml,感染者为24mg/ml（9,10）。他们推测患有螺旋菌感染儿童身高、体重都低于同年龄儿童的真正原因正是血清铁含量的下降。台湾报导，成年人胃癌患者，他们多数是在儿童时期曾患有螺旋菌感染11。香港的报导說有些儿童的螺旋菌感染是由於接受螺旋菌感染患者的輸血而引起的12。這里有一个

9、重要的建议：输血者必需事前通过螺杆菌检查为阴性。目前，唾液幽门螺杆菌抗原检测方法有PCR法、ELISA法和作者采用HPS法。PCR法需要10万級凈化糸統和貴重儀器設備,有很高的假陽性检,檢测麻烦, 費用昂贵。C13呼气法的精確性和儿童的呼气动作小有關,儿童做吞服C13胶囊之后，在收集气体时，儿童没有做好充分地呼气动作，这样也影响到收集标本的数量，这也影响到阳性率。HPS法是测定唾液中具有毒力标志细胞毒相关基因A(Cag A) 幽门螺杆菌释放的尿素酶，这种尿素酶的结构和口腔中其它细菌产生的尿素酶没有交叉反应13。HPS法具有敏感性、特异性高，操作方便、快速等优点，可用于口腔幽门螺杆菌感染的实验室

10、诊断，胃幽门螺杆菌炎症患者也有很高的阳性检出率。HPS法为临床提供了一种新的非侵入性无创幽门螺杆菌检测方法14，也可用于临床流行病学调查。作者感謝对浙江大学医学院附属儿童保健院和杭州鐵路小学的幫助。参考文献1 叶国钦;中國專利証書, 第1282313 號,51 Int. Cl. 2009.G01N 33/569 (2006. 01), G01N 33/558 (2006.01), 專利號 ZL 200820183327.7.2 Barbara Braden, Hans-Georg Posselt, Peter Ahrens, Richard Kitz, C. F. Dietrich, and

11、Wolfgang F. Caspary . New Immunoassay in Stool Provides an Accurate Noninvasive Diagnostic Method for Helicobacter pylori Screening in Children. PEDIATRICS 106: 115-117, 2000.3 Aaron W. Jensen; Childrens H. pylori Infection Can Endanger the Family. BJM; 319:537-541, 1999.4 R. P. Allaker, K. A. Young

12、, J. M. Hardie, P. Domizio and N. J. Meadows; Prevalaence of Hellicobacter pylori at oral and gastrointestinal sites in children; evidence for possible oral to oral transmission. J. Med.Microbiolo; 51:312-317, 2002.5 Seiichi Kato et al. The prevalence of Helicobacter pylori in Japanese children with

13、 gastritis or peptic ulcer disease.6 Patrizia Dominici et al. Familial clustering of Helicobacter pylori infection: population based study. BMJ. 319: 537-541, 1999.7 彭惠，潘国宗;在唾液中检测幽门螺杆菌的意义J.中华内科杂志，38:17,1-173, 1999.8 Andrea, B. C. et al; Helicobacter pylori Clolonization among Children up to 6 years:

14、 Results of a Community-based Study from Northeastern Brazil.Journal of Tropical Pediatrics Advance Access published online on June 19, Journal of Tropical Pediatrics, doi:10.1093/tropej/fmm051, 20079 P Patel, MA Mendall et al. Helicobacter pylori infection in childhood; risk factors and effect on g

15、rowth. BMJ. 309:1119-1123,1994.10 Jeong Kee Seo et al. Serum ferritin and Helicobacter pylori infection in children: A sero-epidemiologic study in Korea. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 17: 754-757, 2002.11 DB Lin, WT Nieh, HM Wang, NW Hsiao, UP Ling, SP Changlai, MS Ho, SL.You, and CJ Chen. Seroepidemiology of Helicobacter pylori infection among preschool children in Taiwan. American Journal of Tropical Medicine and Hygiene, 61: Issue 4, 554-558, 1999.12 K C