中药注射液局部用药安全性评价

1、中药注射剂局部用药安全性中药注射剂局部用药安全性评价评价l过敏性试验过敏性试验l刺激性试验刺激性试验l溶血性试验溶血性试验一、过敏反应一、过敏反应过敏反应是一种变态反应过敏反应是一种变态反应, ,即一型超敏反应即一型超敏反应. .当过敏原当过敏原( (包括抗原与半抗原包括抗原与半抗原, ,如异种血清如异种血清, ,微微生物代谢产物生物代谢产物, ,花粉花粉, ,某些药物或食物等某些药物或食物等) )进入进入机体时机体时, ,可以通过特殊机制可以通过特殊机制, ,刺激机体产生抗体刺激机体产生抗体. .这种抗体附着在肥大细胞上这种抗体附着在肥大细胞上, ,此后当又有同样此后当又有同样抗原进入机体时

2、抗原进入机体时, ,即与抗体相反应即与抗体相反应, ,使肥大细胞使肥大细胞释放出组胺等物质释放出组胺等物质. .过敏原过敏原刺激刺激机体机体产生产生igeigeige与肥大细胞、嗜碱细胞结合与肥大细胞、嗜碱细胞结合致敏靶细胞致敏靶细胞脱颗粒释放活性介质（如组胺，白三烯等）脱颗粒释放活性介质（如组胺，白三烯等）毛细血管扩张，通透性增加等毛细血管扩张，通透性增加等全身反应，呼吸道反应，皮肤反应全身反应，呼吸道反应，皮肤反应致敏阶段致敏阶段发敏阶段发敏阶段芦丁提取物过敏性试验芦丁提取物过敏性试验实验目的实验目的: :观察动物重复接触受试药物后所产生的观察动物重复接触受试药物后所产生的过敏反应情况过敏

3、反应情况. .动物：豚鼠（动物：豚鼠（250250300g)300g)分组分组: :阴性对照组阴性对照组( (生理盐水生理盐水) ) 阳性对照组阳性对照组(5%(5%新鲜蛋清新鲜蛋清) ) 芦丁提取物组芦丁提取物组( (供试品供试品) ) 实验步骤实验步骤致敏反应：致敏反应：取豚鼠取豚鼠2 2只，隔天肌内注射芦丁提只，隔天肌内注射芦丁提取物取物0.5ml0.5ml，连续，连续3 3次，并行阴性对照组和阳性次，并行阴性对照组和阳性对照组各为对照组各为2 2只只豚鼠豚鼠。激发反应：于首次注射后的第激发反应：于首次注射后的第1414天，腹腔注射天，腹腔注射芦丁提取物芦丁提取物2-3ml2-3ml，观

4、察注射后有无用爪搔鼻、，观察注射后有无用爪搔鼻、喷嚏、竖毛、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、喷嚏、竖毛、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、休克和死亡等反应。休克和死亡等反应。 1010分钟内先后出现上述分钟内先后出现上述体征，体征，3030分钟内死亡。分钟内死亡。过敏性实验评价标准过敏性实验评价标准二、二、芦丁提取物芦丁提取物刺激性反应刺激性反应化学刺激化学刺激物理刺激物理刺激炎症等其它刺激炎症等其它刺激刺激性实验刺激性实验实验目的实验目的: :观察动物接触观察动物接触芦丁芦丁提取物后所产生提取物后所产生的刺激反应情况的刺激反应情况. .动物动物: :首选成年健康家兔首选成年健康家兔(2kg)(2kg)

5、分组分组: :阴性对照组阴性对照组( (生理盐水生理盐水) ) 阳性对照组阳性对照组(1%(1%酒石酸锑钾注射液酒石酸锑钾注射液) ) 芦丁芦丁提取物给药组提取物给药组 股四头肌股四头肌法法 股四头肌在后肢大腿的前面，正中为股股四头肌在后肢大腿的前面，正中为股直肌，股直肌之下为股中间肌，股直肌之外为直肌，股直肌之下为股中间肌，股直肌之外为股外侧肌，股直肌之内侧为股内侧肌，四块肌股外侧肌，股直肌之内侧为股内侧肌，四块肌肉合称股四头肌肉合称股四头肌。实验步骤实验步骤取健康家兔两只，分别于一侧后肢的股四头肌取健康家兔两只，分别于一侧后肢的股四头肌处注射处注射芦丁芦丁提取物提取物提取物提取物3 3ml

6、ml，于另一侧后肢，于另一侧后肢的对应部位注射同容积的灭菌生理盐水作为对的对应部位注射同容积的灭菌生理盐水作为对照。进针角度照。进针角度30-4530-45度为宜。度为宜。48h48h后试验家兔健后试验家兔健康如常。将家兔由耳缘静脉注射空气处死，解康如常。将家兔由耳缘静脉注射空气处死，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉组织的反应。肉组织的反应。并行阳性对照组：并行阳性对照组： 1%1%酒石酸锑钾注射液酒石酸锑钾注射液刺激性实验评价标准刺激性实验评价标准将肌肉组织的反应分为六级：将肌肉组织的反应分为六级：0 0级（级（- -）：注射供试品部位的肌

7、肉组织与对照部位肌肉组织任何差）：注射供试品部位的肌肉组织与对照部位肌肉组织任何差异。异。1 1级（级（+ +）：注射供试品部位的肌肉组织有充血，直径在）：注射供试品部位的肌肉组织有充血，直径在0.5cm0.5cm以下。以下。2 2级（级（+）：注射供试品部位的肌肉组织有红肿充血，直径在）：注射供试品部位的肌肉组织有红肿充血，直径在1cm1cm左左右。右。3 3级（级（+）：注射供试品部位的肌肉组织有红肿、发紫、光泽消失、）：注射供试品部位的肌肉组织有红肿、发紫、光泽消失、可见坏死点。可见坏死点。4 4级（级（+）：注射供试品部位的肌肉组织有红肿、发紫、光泽消）：注射供试品部位的肌肉组织有红肿

8、、发紫、光泽消失、坏死范围直径达失、坏死范围直径达0.5cm0.5cm左右。左右。5 5级（级（+）：注射供试品部位肌肉的各项反应更重，有大片坏死。）：注射供试品部位肌肉的各项反应更重，有大片坏死。刺激性实验评价标准刺激性实验评价标准凡两只家兔的平均反应级数在凡两只家兔的平均反应级数在2 2以下者可供肌以下者可供肌肉注射之用；平均反应级数超过肉注射之用；平均反应级数超过3 3者不能供肌者不能供肌肉注射之用；平均反应级数在肉注射之用；平均反应级数在2-32-3之间者可进之间者可进行复试或结合其他项目考虑其临床试用问题。行复试或结合其他项目考虑其临床试用问题。凡刺激性试验不能达到肌肉注射要求的知己

9、制凡刺激性试验不能达到肌肉注射要求的知己制剂一般也不宜供皮下注射之用。剂一般也不宜供皮下注射之用。静脉注射制剂的安全性评价静脉注射制剂的安全性评价 静脉注射制剂根据我国药政部门的规定，要必静脉注射制剂根据我国药政部门的规定，要必须进行常规安全性评价，主要包括血管刺激性须进行常规安全性评价，主要包括血管刺激性试验、体外溶血性试验、过敏性试验、热原试试验、体外溶血性试验、过敏性试验、热原试验等。验等。血管刺激性试验血管刺激性试验实验目的实验目的: :为确保注射液制剂安全性，检查制为确保注射液制剂安全性，检查制剂经多次静脉注射后对血管刺激性反应。剂经多次静脉注射后对血管刺激性反应。 动物动物: :家

10、兔家兔分组分组: :供试品组供试品组 生理盐水对照组生理盐水对照组实验步骤实验步骤家兔家兔8 8只，禁食只，禁食1616小时，随机分成小时，随机分成2 2组，每组组，每组4 4只。设供只。设供试品组与生理盐水对照组。兔固定于兔箱，试品组与生理盐水对照组。兔固定于兔箱， 药液通过药液通过消毒恒速注射器与小儿头皮针注入耳缘静脉内。每天消毒恒速注射器与小儿头皮针注入耳缘静脉内。每天给药给药1 1次，连续次，连续3 3天。天。 实验实验给药期间，观察动物全身反应、血管及周围组织给药期间，观察动物全身反应、血管及周围组织的刺激性反应。的刺激性反应。组织病理学检查组织病理学检查 于末次给药完毕后两天，剪下

11、各于末次给药完毕后两天，剪下各兔进针点前方的耳静脉及其周围组织一段（长约兔进针点前方的耳静脉及其周围组织一段（长约1.5cm1.5cm）固定于福尔马林生理盐水溶液中，送病理学检查。固定于福尔马林生理盐水溶液中，送病理学检查。 图图1 0.9%氯化钠注射液氯化钠注射液对照组兔耳静脉血管对照组兔耳静脉血管（he 3.310） 图图2 银杏叶提取物注射液组兔耳静脉血管与对照组比较无明显改变（he 3.310）三、体外溶血试验体外溶血试验实验目的实验目的: :为确保注射液制剂安全性，检查制为确保注射液制剂安全性，检查制剂剂, ,有无溶血和红细胞凝集等反应。有无溶血和红细胞凝集等反应。动物动物: :家兔

12、家兔供试品：芦丁提取物供试品：芦丁提取物 实验步骤实验步骤2% %兔红细胞生理盐水混悬液制备：兔红细胞生理盐水混悬液制备： 取兔取兔1 1只，只，颈动脉放血，将血盛于放有玻璃珠的烧杯内，颈动脉放血，将血盛于放有玻璃珠的烧杯内，轻轻摇荡约轻轻摇荡约1010分钟，除去纤维蛋白，分钟，除去纤维蛋白， 用生理用生理盐水反复洗盐水反复洗3-43-4次，将所得红细胞按其容积，次，将所得红细胞按其容积，用生理盐水稀释成用生理盐水稀释成2%2%的混悬液。的混悬液。实验步骤实验步骤试管试管7 7支，编号后依次排列于试管架上，按表支，编号后依次排列于试管架上，按表格分别加入格分别加入2%2%兔红细胞混悬液和生理盐

13、水，混兔红细胞混悬液和生理盐水，混匀后置于匀后置于3737 c c水浴中水浴中30min30min，然后向各管内加，然后向各管内加入不同量的芦丁提取物注射液，入不同量的芦丁提取物注射液，第第6 6管为阴性管为阴性对照对照，第第7 7管加入蒸馏水作为阳性对照管加入蒸馏水作为阳性对照。各管。各管轻轻摇匀后，置轻轻摇匀后，置3737 c c恒温水浴中。开始每隔恒温水浴中。开始每隔1515分钟观察分钟观察1 1次，次，1 1小时后每隔小时后每隔1 1小时观察小时观察1 1次，共次，共观 察观 察 4 4 小 时 （ 双 管 法 测 定 ） 。小 时 （ 双 管 法 测 定 ） 。试管号 1 2 3 4 5 6 7 2%兔红细胞混悬液(ml) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 生理盐水(ml) 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.5(蒸馏水)芦丁提取物注射液(ml) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 结果 +注：“”表示阴性反应；“+”表示阳性反应。 实验步骤实验步骤评价标准评价标准全溶血全溶血: :溶液澄明溶液澄明, ,红色红色, ,管底无红细胞残留。管底无红