结核杆菌对利福平药物的敏感性试验

1、结核杆菌对利福平药物的敏感性试验     【摘要】  目的 分析结核分枝杆菌对利福平的耐药现况，为结核病的防治提供依据。方法 采用直接涂片检查法和培养法,对肺结核病人的痰液进行检查，阳性标本经抗酸染色镜检确认后，采用绝对浓度法的间接法进行耐药性测定。结果 131例疑似肺结核病人痰标本中，直接涂片法检出阳性标本21例，阳性检出率为16.0%（21/131）；培养法共检出阳性标本56例，阳性检出率为42.7%（56/131）。比较两种检测方法的阳性检出率，差异有显著性（P<0.05）。培养法高于直接涂片法。将培养阳性标本进行利福平药物敏感性试

2、验，其中有17株发生耐药，耐药率为30.4%（17/56）。结论 结核杆菌对利福平的初始耐药率仍处在较高水平，必须进一步加强对耐药结核杆菌的监控。 【关键词】  结核分枝杆菌 福平 药敏试验Study on the primary drug resistance against rifampicin for tubercolusisZHANG Sheng, CHEN  Sidong, WANG  Baoguo，ZHOU Yong,ZHOU Weiping(Institute of Disease Prevent and Control of Songgang To

3、wn,Shenzhen 518105; Guangdong CollegeofPharmacy,Guangzhou,Guangdong  510006,China)Abstract:Objective  To study the situation and trend of rifampicin resistance for tuberculosis and provide the basis for tuberculosis prevention and treatment. Methods  Sputum fluid is examined with dire

4、ct smear and culture on modified Lowenstein-Jensen medium after treatment with 4% NaOH. Then the positive samples were subjected to susceptibility testing against rifampicin using absolute concentration method. Results  The positive rate with culturing and smearing method was 42.7%（56/131）,and

5、the positive rate with direct smearing method was16.0%（21/131）. The prevalence rate of primary drug resistance was 30.4%(17/56). Conclusion  The rate of primary drug against rifampicin is still at a higher level. Monitoring of the resistance of tuberculosis should be strengthened.Key words: myc

6、obacterium tuberculosis; rifampicin; drug resistance test结核病是我国重点控制的重大疾病之一，也是全球关注的公共卫生问题和社会问题,世界卫生组织已将结核病作为重点控制的传染病之一。全球80%的结核患者分布在22 个结核病高负担国家,中国是其中之一,结核患者人数仅次于印度居世界第二位1。但是，近10年来,临床上发现抗结核药的耐药性对结核病化疗效果的影响日益严重,尤其是利福平耐药的发生率不断上升给抗结核治疗带来较大的困难。为了解结核杆菌对利福平耐药的状况，为临床合理、联合用药提供依据，特作本研究。结果报告如下。1  材料与方法1.1

7、  病例来源     2005年11月2006年5月，在广州市白云区某医院、深圳市宝安区某医院检查首次确诊为肺结核的病人，共131例。病例发病前均未服用过抗结核药物。结核分枝杆菌参考菌株为H37Rv敏感株，由中国结核病防治临床中心国家参比实验室提供。1.2  痰液直接涂片检查     用接种环取脓性痰液12环，均匀涂于载玻片上，待自然干燥，微火焰固定，经抗酸染色后镜检。1.3  分枝杆菌培养1.4  药敏试验    具体操作参照结核病诊断细菌学检验规程2。2

8、0; 结果2.1  痰涂片情况  131例肺结核病人标本中，共有21例痰涂片为阳性,阳性率为16.0%。2.2  痰培养情况  131例标本中，经培养有菌生长且经抗酸染色镜检后，共有56例确定为结核分枝杆菌，阳性检出率为42.7%。两种检测方法其阳性检出率比较，差异有显著性（P<0.05）。培养法高于直接涂片法。见表1。表1  直接涂片法和培养法检出阳性结果（略）Tab.1  The  results of  sputum fluid examination with direct smear and cul

9、ture与直接涂片法比较：* P<0.05（2检验）2.4  药敏试验结果    质控H37Rv生长情况：对照培养基为4+，高、低浓度含药培养基均不生长，为敏感。故所配制的培养基质量合格，能用于药物敏感性测试。    56株痰培养阳性标本中，共有17株出现耐药，总耐药率为30.3%，其中，属中度耐药有10株，耐药率为17.8%，属高度耐药有7株，耐药率为12.5%。见表2。  表2  56株痰培养阳性标本利福平敏感性测定结果（略）  Tab.2  The results of s

10、usceptibility testing against rifampicin in 56 positive samples3  讨论    直接涂片检查法和分枝杆菌培养法是结核病实验室诊断中常用的2种方法，2种方法的阳性检出率对结核病实验室诊断有重要影响。本研究中培养法阳性检出率高于直接涂片检查法。因此，临床上可将2种方法结合使用，以提高结核菌的阳性检出率。    耐药性试验不仅是临床选择和评价化疗方案的依据，更是流行病学的重要指标。我国于2000年开展了第4次全国结核病流行病学抽样调查，结果显示，利福平耐药的初始耐药率

11、为10.3%3，本研究中利福平敏感性试验初始耐药率为30.3%，比全国流行病学调查测出的耐药率要高；与其他省份耐药情况相比，湖北省的研究显示结核杆菌对利福平的初始耐药率为3.8%4，福建省的为9.5%5，本研究中利福平初始耐药率高于该两省；与广东省内其他城市相比，深圳市利福平初始耐药率为7.7%6，东莞地区为7.5%7，本次药敏实验利福平初始耐药率也均高于两市的研究结果。    利福平自1971年发明以来，一直是结核化疗方案中的一个关键药物。特别在短程化疗中起着重要作用。而对利福平的耐药意味着一方面由于患者对利福平耐药，临床上须加大用药剂量或改用其他抗结核药物，使

12、患者的疗程延长，增加患者的危险和经济负担；另一方面扩大耐药性传播的机会，使得总体人群暴露于耐药结核杆菌的危险性增加。    研究表明8，利福平产生耐药性是由于其作用靶分子RNA多聚酶亚单位的编码基因（rpoB）突变所致。由于结核分枝杆菌产生自然耐药变异的频率很低，造成耐药的主要原因是治疗过程中不合理的联合用药、间断用药、不执行归口管理与治疗等。因此，在今后的结核病防治工作中，重点为社会性综合防治措施，抓好结核病人的发现、登记、管理和合理治疗。坚持在直接面视短程化疗(DOTS)9下,早期、适量、规律、全程、联合应用敏感药物或抗结核药物复合剂,辅以免疫剂治疗,使得在强

13、化期内迅速、大量杀灭结核菌,使痰菌转阴。对于耐药病例防治,须坚持联合用药的原则，根据既往用药史和药物敏感性试验制定个体化治疗方案。结核病防治有关部门也应加强对耐药菌株的检测，掌握结核病耐药趋势，以指导临床合理、有效用药。【参考文献】  1 DONALD A E,HANS L R,THURIDUR A,et al. Management of tuberculosis,a guide for low income countriesM. The Fifth Edition. Paris: Union Against Tuberculosis and Lung Disease,2000 : 3.2 中国防痨协会结核病诊断细菌学检验规程J.中国防痨杂志,1996,18：28-31.3 刘宇红,姜广路,赵立平,等.第四次全国结核病流行病学抽样调查结核分枝杆菌耐药性分析与评价J.中华结核和呼吸杂志,2002,25(4):224-227.4 李国明,吴兴荣,张缇,等.湖北省结核分枝杆菌耐药性监测研究J.中华结核和呼吸杂志,2002,25(12):723-726.5 邹盛华,代腊梅,张丽水.1008例初治菌阳肺结核患者的初始耐药情况分析J.海峡预防医学杂志,2004,10(4):77-78.6 黄小玲,罗道泉,欧阳