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文档简介

1、原理时间应用范围优缺占八、样品与浓硫酸共热。810适用于用于含氮有机物即分解产小时氮，标准生氨（消化），氨又与误差为蛋白硫酸作用，变成硫酸± 2%质含氨。经强碱碱化使之量的分解放出氨，借烝汽准确将氨蒸至酸液中，根测据此酸液被中和的程定；度可计算得样品之氮干扰含量。少;费时太长双缩脲2030适用于用于(NH3CONHCONH3分钟110mg快速是两个分子脲经蛋白质测180 C左右加热，放出定,个分子氨后得到的但不产物。在强碱性溶液太灵蛋白质测定方法的比较凯氏定氮法双缩尿法中，双缩脲与CuSO4敏；形成紫色络合物，称不同为双缩脲反应。凡具蛋白有两个酰胺基或两个质显直接连接的肽键，或色相冃

2、匕过个中间碳原了 相连的肽键，这类化 合物都有双缩脲反 应。似Folin此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是40适用于5mg蛋灵敏加入了第二种试剂，即Folin 酚试剂，以增加白质-酚显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度O60分度试剂这两7种显色反应产钟咼，法生深监色的原犬是：倍）耗费在碱性条件、，蛋白时间质中的肽键与铜结长；合生成复合物。操作Folin 酚试剂中的磷要严钼酸盐一磷钨酸盐被格计蛋白质中的酪氨酸时；和苯丙氨酸残基还颜色原，产生深蓝色（钼深浅兰和钨兰的混合随不紫外 吸收 法物）。在一定的条件 下，蓝色深度与蛋白 的量成正比。司蛋 白质 变 化; 标准 曲线 不是 严格 的直 线

3、形 式， 且专 性 差蛋白质分子中，酪氨 酸、苯丙氨酸和色氨 酸残基的苯环含有共 轭双键，使蛋白质具 有吸收紫外光的性 质。吸收咼峰在280nm处，其吸光度510分钟适用于50100mg蛋白质用于 层析 柱流 出液 的检 测； 核酸（即光密度值）与蛋 白质含量成正比。此 夕、，蛋白质溶液在 238nm的光吸收值与 肽键含量成正比。利 用定波长下，蛋白 质溶液的光吸收值与 蛋白质浓度的正比关 系，可以进行蛋白质 含量的测定。的吸 收可 以校 正； 不消 Uy* L、A 耗样 品， 测定 后样 品仍 能回 收利 用考马 斯亮 蓝法考马斯亮兰G-250染 料，在酸性溶液中与 蛋白质结合，使染料 的最大吸收峰的位置（Imax），二由 465nm 变为595nm，溶液的 颜色也由棕黑色变为 兰色。经研究认为，515分钟适用于1 5mg蛋白质较好 的方 法;干扰 物质 少;颜色 稳疋； 颜色 深浅 随不 司蛋 白质 变 化; 标准 曲线 有轻 微的 非线染料主要是与蛋白质 中的碱性氨基酸（特 别是精氨酸）和芳香 族氨基酸残基相结 合。在595nm下测定的吸 光度值A595,与蛋白 质浓度成正比。我的看法：关于蛋白质的鉴定方法在不 断的更新进步，技术也在不断革新。考马斯 亮蓝法

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