北豆根提取物中有效成分分析方法的建立

1、北豆根提取物中有效成分分析方法的建立                              作者：朱孝芹， 韩铁刚， 张欢， 刘翠哲 【摘要】  目的采用酸性染料比色法测定北豆根提取物中北豆根总碱（）的含量，采用高效液相色谱（）法测定蝙蝠葛碱（）的含量。方法溴甲酚绿在无水甲醇（ ）中，可与 直接

2、络合生成绿色化合物，用于比色测定，最大吸收波长为 。 法，色谱柱： 柱；流动相：乙腈水磷酸；流速： ? ；检测波长： 。结果酸性染料比色法：线性范围为 ? ，r （n ），平均加样回收率为，RSD ； 法：线性范围为 ? ，r （n ） ，平均加样回收率为， RSD。结论建立的方法灵敏、准确、重现性好，可作为北豆根提取物中 和蝙蝠葛碱的含量分析方法。 【关键词】  北豆根总碱 蝙蝠葛根 酸性染料比色法 高效液相色谱法Abstract：Objective ic in Menispermum dauricum（）， n Methods d i ， ， ： （ × ， ）， （）

3、， the flow rate was ? ， wavelength was Results ic ： ? ， r （n ）， y RSD . ： ? ， r （n ） , y RSD Conclusion ， ， Key words： in menispermum dauricum（）；  ；  ；      北豆根为防己科植物蝙蝠葛Menispermum dauricum 的干燥根茎，其有效部位是生物碱。现已知北豆根中含有近 种生物碱，总碱含量可达以上，其中含量最高的生物碱为蝙蝠葛碱，其含量约占总生物碱的左右 。北豆根总碱（）对呼

4、吸道致病菌有抑菌作用，尤其对肺炎球菌效果更为显著。其制剂北豆根片可治疗急性咽炎、扁桃体炎，经过多年的临床应用已收入 版中国药典。 版中国药典用酸碱滴定法控制含量，终点不易判断，误差大。本实验采用酸性染料比色法测定提取物中 的含量，采用高效液相色谱法测定提取物中蝙蝠葛碱的含量，从而用这两个指标控制提取物的质量。  器材    紫外可见分光光度计； 型电子分析天平（瑞士梅特勒）； 型电热恒温干燥箱（北京恒星医疗器械厂）； 型旋转蒸发仪（上海医械专机厂）； 型旋转蒸发仪（上海申顺科技公司）； 高效液相色谱仪（ 紫外可见检测器， 泵， 色谱工作站，日本）；北豆根

5、饮片（市售，承德产，经鉴定为蝙蝠葛）；北豆根碱（对照品，自制，含量）；乙醇、氨水、硫酸、三氯甲烷、无水甲醇、磷酸、酚酞为分析纯； 甲醇、乙腈为色谱纯。  方法与结果  酸性染料比色法测定提取物中 的含量  比色原理不吸收可见光的无色物质通过络合、氧化还原等反应生成有色物质，可用于比色测定。实验证明，溴甲酚绿在无水甲醇（ ）中，可与 直接络合生成绿色化合物，用于比色测定。  最大吸收波长的选择精密称取蝙蝠葛碱对照品（干燥至恒重） 置 容量瓶中，加无水甲醇溶解，最后用无水甲醇定容至 ，作为对照品溶液。    精密吸取对照品溶液

6、置 容量瓶中，加入溴甲酚绿溶液 ，用无水甲醇定容，在 进行扫描，选择最大吸收波长，确定最大吸收波长为 。  显色剂用量的考察分别精密吸取溴甲酚绿溶液， 置 容量瓶中，再分别加入对照品溶液 ，用无水甲醇定容，在 处测定吸收度。结果见表。表1  蝙蝠葛碱与溴酚绿络合后的吸收度（略）结果表明，显色剂用量为 时吸收度最大，故选用显色剂用量为 。  显色稳定性的考察以加入溴甲酚绿溶液 的样品为考察对象，在 内于 处测定吸收度，随行试剂空白。结果见表。表2  蝙蝠葛碱的显色稳定性考察（略）平均吸收度为，RSD为，表明吸收度在 内没有明显变化。  标准曲线的

7、制备分别精密吸取对照品溶液， ，置 容量瓶中，加入溴甲酚绿溶液 ，于 测定吸收度，随行试剂空白。以蝙蝠葛碱浓度C 对吸收度A 进行线性回归，得标准曲线方程：C A ，r （n ），线性范围为 ? 。  精密度实验取 中的样品（ ? ）测定吸收度，重复测定 次，平均吸收度为，RSD 为。  加样回收率实验精密称取北豆根提取物 （总碱含量以北豆根碱计为），置 容量瓶中，加无水甲醇使溶解，超声提取 ，用无水甲醇定容至 ，总碱浓度以蝙蝠葛碱计 ? 。蝙蝠葛碱对照品溶液浓度为 ? 。分别精密吸取两种溶液各， ，一一对应混合于 容量瓶中，无水甲醇定容。测定结果见表。表3  T

8、AMD的回收率（略）  高效液相色谱法测定提取物中蝙蝠葛碱含量  色谱条件色谱柱： （ ， × ）；流动相：乙腈水磷酸（VVV）；流速： ? ；波长 ；柱温：室温；进样量 ；理论塔板数 。百事通  北豆根对照品、提取物和药材的 的图谱见图。图1  北豆根对照品提取物和药材的HPLC图谱（略）  标准曲线的绘制精密称取蝙蝠葛碱对照品（干燥至恒重） 置 容量瓶中，用流动相溶解并定容，作为对照品溶液。分别精密吸取对照溶液， 置 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，按上述条件进行检测，以峰面积（Y）对浓度（X）进行直线回归，得回归方程为：Y 

9、15; X × ；r （n ） ， 线性范围为 ? 。  精密度实验选用“”项浓度为 ? 的样品，连续进样 次，计算峰面积，平均峰面积为，RSD 为。  加样回收率实验精密称取 北豆根提取物（蝙蝠葛碱含量为）置 容量瓶中，加入流动相溶解，超声提取 ，用流动相定容，浓度为 ? 。蝙蝠葛碱对照品溶液浓度为 ? 。精密吸取样品溶液， 置 容量瓶中，分别加入对照品溶液， ，用流动相定容后测定含量。结果见表。表4  蝙蝠葛碱的回收率（略）  含量测定  北豆根药材的处理 饮片粉碎过 目筛，干燥。称取 置索氏提取器中，加入氯仿 ，氨水 ，浸泡 。

10、再加入氯仿 ，水浴回流 ，水浴蒸干氯仿。残渣用无水甲醇溶解，溶液转移置 容量瓶中，无水甲醇定容，作为备试溶液。  北豆根提取物的处理精密称取北豆根提取物（干燥至恒重） 置 容量瓶中，加无水甲醇溶解，过滤，洗涤容器及滤器 次，合并滤液及洗液，用无水甲醇定容至 备用。  北豆根药材中 的测定取备试溶液 置 容量瓶中，加入溴甲酚绿溶液 ，用无水甲醇定容，于 测定吸收度，随行试剂空白。根据回归方程计算 含量。经测定，本实验所选用的北豆根药材中 含量为。  北豆根药材中蝙蝠葛碱的测定取备试溶液 置 容量瓶中，挥干甲醇，加入流动相适量，振摇使溶解后用流动相定容。照色谱条件测定

11、峰面积。根据回归方程计算蝙蝠葛碱含量。经测定，本实验所选用的北豆根药材中蝙蝠葛碱的含量占 的。  北豆根提取物中 的测定取备试溶液 置 容量瓶中加入溴甲酚绿溶液 ，用无水甲醇定容，于 测定吸收度，随行试剂空白。根据回归方程计算 含量。经测定，本实验所得到的北豆根提取物中 含量为。  北豆根提取物中蝙蝠葛碱的测定取备试溶液 置 容量瓶中（浓度为），挥干甲醇，加入流动相适量，振摇使溶解后用流动相定容。照色谱条件测定峰面积。根据回归方程计算蝙蝠葛碱含量。经测定，本实验所得到的北豆根提取物中蝙蝠葛碱的含量占 的。3  讨论    中药质量标准的研究一直是中药现代化研究中的重要组成部分。由于中药成分复杂或有效成分不明确，有些直接以原药材或粗提物入药，使得很多中药的含量测定成为难点。近年来，一些现代化技术的应用推动了中药有效成分的提取、分离和含量测定的研究。中国药典 版收录的北豆根片中只规定了 的含量测定，方法为酸碱滴定法。由于各地北豆根药材中， 的组成有差别 ，只控制 的含量尚不能全面反映制剂所需的原料和成品的质量。本实验测定了单体蝙蝠葛碱在总碱中的含量，进一步完善了提取物和制剂的质量标准。酸碱滴定法操作复杂，终点不易判定，误差大。本实验采用酸性染料比色法测定 含量