考点2：微生物的分离与计数

1、Sw-x1-2014-8 考点2 微生物的分离与计数 执笔人：cln 审核人：cln 一、学习目标：说出培养基对微生物的选择作用，并进行微生物的分离和计数。二、学习导航：自主学习（一）、分解尿素的细菌的分离与计数1、分离原理：用_培养基筛选菌株，即用_做唯一氮源的培养基。在培养基中加入 指示剂，若指示剂变红，说明该种菌能分解尿素。2、计数方法：测定微生物数量的常用方法有 和_ 法。 稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 活菌，通过统计平板上的 数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置35个平板

2、，选择菌落数在30300的平板进行计数，并取 值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，这是因为当两个或多个细胞连着一起时，平板上观察到的只是一个菌落。（二）、分解纤维素细菌的分离1、筛选方法： 染色法。2、原理: 用_ _做唯一碳源的选择培养基筛选菌种。刚果红是一种染料，它可以与像 这样的多糖物质形成 色复合物，但并不和水解后的纤维二糖 和葡萄糖发生这种反应。当我们在含有 的培养基中加入刚果红时， 能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被 分解后，刚果红纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的 。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。合作探究：1、统

3、计的菌落数往往比活菌的实际数目低 ，这是因为什么？2、为提高实验结果的准确性，如何设置对照？3、利用了选择培养基筛选纤维素分解菌，为什么还要用刚果红染色法鉴定后分离？三、典型例题：例1：饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。以下是科研人员从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株的过程示意图。请分析作答。（1）培养基中除了添加植酸钙以外，应含有 、 、水、无机盐等基本营养物质。（2）为防止杂菌污染，要对培养基和培养皿等进行，而且须将接种后的培养皿呈状态放置。（3）接种以前进行的一系

4、列操作，目的是在培养皿表面形成 。根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的 就能大致推测出样品中的活菌数。（4）由于植酸钙的不溶解性，使培养基中形成白色浑浊。产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验结果显示AE五种菌株中， 是产植酸酶的理想菌株。（5）获得目的菌以后，若要用于植酸酶的生产，还需要进行 。变式1-1：莠去津是一种含氮的有机化合物，它是广泛使用的除草剂之一。莠去津在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，按下面程序选育能降解莠去津的细菌（目的菌）。已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明

5、。据图回答：（1）由于莠去津的_作用，在长期使用莠去津的土壤中可能含有目的菌。OA瓶B瓶C瓶乙类细菌丙类细菌甲类细菌最大密度（2）下图是AC瓶中三类细菌的最大密度柱形图，由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的目是。（3）在固体培养基中，无透明菌落利用 的氮源主要是；有透明带菌落利用的氮源主要是_，据此可筛选出目的菌。（4）要培养和分离这种目的菌，实验室常用的方法是_法和_法。四、反馈拓展： 1、从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的是（ ）A.将土壤用无菌水稀释，制备10-310-5土壤稀释液B.将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上C.用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌

6、D.从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株2、 从土壤中分离能够降解纤维素的微生物，下列说法不正确的（ ） A可以从纤维素丰富的腐叶土中采集土壤样品 B利用稀释涂布平板法接种 C利用纤维素作为唯一氮源的培养基进行筛选 D利用刚果红染色法，挑选出有透明圈的菌落即为目的菌3、将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37恒温箱的目的是（ ） A对比观察培养基有没有被微生物利用 B对比分析培养基是否被杂菌污染C没必要放入未接种的培养基 D为了下次接种时再使用4、（09安徽）下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是（ ）A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后

7、倒平板B取104、105 、106倍的土壤稀释液和无菌水各01ml，分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，370C恒温培养24-48小时D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数5、取少量酵母菌液放入血球计数板直接记数，测得的数目是A活细胞数 B死细胞数 C菌落数 D细胞总数6、随着环境污染的加剧和石油危机的出现，越来越多的国家使用乙醇作为燃料，玉米和麦草的秸秆可以用来生产燃料乙醇，已知秸秆的主要成分是纤维素，回答下列问题：(1) 人们首先利用纤维素分解菌将纤维素分解，纤维素分解菌多分布在_ _的土壤中，该微生物产生的纤维素酶是一种复合酶，一般包括三种成分：C1酶

8、、Cx酶、葡萄糖苷酶。前两种酶能使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。(2) 从土壤中筛选纤维素分解菌需要配制_ _培养基，该培养基中需要加入纤维素粉作为唯一的_ _。(3) 经过梯度稀释后，要将样品均匀涂布在用于鉴别纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是_ _，当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生_ _来筛选纤维素分解菌。当利用涂布器涂布平板之后需要对涂布器进行_处理(填“消毒”或“灭菌”)。(4) 产生葡萄糖后需要用到_ (微生物种类)发酵产生酒精，还可以使用_检测产物是否为酒精，该试剂在酸性条件下可与酒精反应，溶液呈灰绿色。7、(11丰台一模)在调查

9、某湖水中H细菌指数（1升水中含有的H细菌菌群数）的实验中，先将5升湖水水样浓缩至5毫升，然后各取浓缩水样1毫升，涂布到4个培养皿中培养，培养后统计的菌落数分别是42、38、55、18。实验引发出一系列的问题，请回答： （1）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_ _ _。（2）配制好的培养基用_法灭菌，并在 条件下接种。（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于_ _中培养，培养的温度设定在37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_ _作为对照进行实验。（4）细菌培养产生的单个菌落在生态学中称为_。 根据上述结果计算，被检水样的H细菌指数为_。

10、8、海洋上的石油泄漏会对海洋造成污染。自然环境中假单孢杆菌能够分解石油，请回答下列问题：（1）假单孢杆菌同化作用类型是 ，属于生态系统成分的 。欲从自然环境中分离提纯假单孢杆菌，除了基础营养外，可在培养基中必须加入石油，制成 培养基。（2）下面是某实验小组做的假单孢杆菌分离和计数的实验方案及结果，其中有4处明显错误,请指出并改正。a将溶化后的培养基倒平板备用。b将接种环放在酒精灯的火焰上灼烧后立即沾取一环菌液，然后，将培养皿皿盖轻轻放在桌面上，手拿培养皿，在火焰旁划平行线，盖上皿盖。c将接种过的培养皿倒置放入恒温箱内，在适应条件下培养一段时间并观察结果。d统计出三个培养皿中菌落的数目分别为21

11、、212和256，以这三个平板上菌落的平均值163作为统计结果。 （3）用假单孢杆菌进行实验后，所有用过的培养液、培养基等必须经过 处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散，污染环境。9、（07宁夏）某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。（1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_ _和_ _。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是_ _和_ _。（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_。（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于_ _中培养，培养的温度设定在37。要使该

12、实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_ _ _作为对照进行实验。（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有_种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_。（5）如果提高培养基中NaCl浓度，可用于筛选耐_细菌，这种培养基被称为_。10、蓝色牛仔裤是深受人们喜爱的休闲服装，常用极粗的棉布制成。过去在加工过程中常用“石洗”的方法，即把成捆的布料和浮石放在一架大机器中翻滚，以增加牛仔裤的舒适度。现在采用“生物石洗”的方法，即用一定量的纤维素酶洗布料，同时加入蓝靛染料，当达到所希望的柔软度时，立即冲洗掉纤维素酶。请根据上述资料，回答问题：（1）纤

13、维素的元素组成为_，它是_的主要结构成分。自然界中纤维素的根本来源是植物通过 作用产生的。（2）纤维素酶增加棉布布料柔软度的原因是_，该酶还可用于去除细胞壁获得 。（3）为了从土壤中筛选纤维素分解菌，某生物小组同学利用下列材料和用具进行相关实验，请你完善下列实验步骤。（提示：刚果红能与纤维素形成红色复合物，纤维素分解菌在含有刚果红和纤维素的培养基上形成的菌落周围会出现透明圈）材料用具：采集的土样，研钵，配制纤维素分解菌培养基的各种原料，纤维素粉，刚果红，培养箱，无菌水等。实验步骤：通常在 地点采集土样。利用纤维素分解菌培养基的各种原料以及_ 配制固体培养基后进行 _灭菌。将采集的土壤样品在研钵

14、研碎后，用_稀释，制成土壤匀浆。在无菌室内利用涂布方法把土壤匀浆均匀涂布在培养基上，然后放在_内在适宜条件下培养。 一段时间后，取出固体培养基进行观察，挑取_，即为纤维素分解菌，进行进一步纯化培养。无机液体培养基+甲醛，振荡培养制取菌悬液挑取不同菌落分别接种无机固体培养基+甲醛，恒温培养LB培养基，振荡培养无机液体培养基+甲醛，振荡培养取样测定甲醛浓度接种10mL活性污泥10mL11、（西城2013.1.35）（10分）3540%的甲醛水溶液（福尔马林）可作为防腐剂，其防腐的原理是使蛋白质变性。自然界中有能分解甲醛的细菌和真菌。下图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程。请分析回答： （1）过程的

15、目的是 ，过程培养出的是 。（2）上述实验中，不需要进行灭菌处理的是 ，培养基灭菌的常用方法为 。甲醛浓度（mg/L）160014001200100080060040020008 16 24 32 40 48 56 64 72 80 88 96 104 t (h)400 mg/L800 mg/L1200 mg/L1600 mg/L（3）由的接种可选用 法，通过培养能获得 。经过过程后，取样测定甲醛浓度，选出 ，再分离、培养菌株。此菌种异化作用的类型是 。（4）为研究甲醛初始浓度对菌株降解甲醛能力的影响，进行了相应实验并得到如下结果。由图可知，当甲醛的初始浓度小于1200/L时，菌株 ；当甲醛的

16、初始浓度增高至1600/L时，48小时后菌株对甲醛的降解能力很弱，甚至失去降解能力，其原因可能是 。12、水华可因蓝藻爆发所致。科研人员尝试利用某种细菌限制蓝藻数量，相关实验的示意图如下。图中-表示实验步骤。请回答问题：（1）从细胞结构的特点与复杂程度上看，蓝细菌属于_细胞；从生态系统的营养结构上看，蓝细菌处于_；蓝细菌的代谢类型通常是_。（2）引发水华的蓝细菌可产生蓝细菌毒素，蓝细菌毒素对人是一种致癌因子，可使原癌基因和 基因_，导致正常细胞发生癌变。（3）图中实验组在每个培养皿中，如果做三个重复实验，可采取的做法是_。为完善实验设计方案，应增设对照组，可采取的做法是： _。（4）蓝藻通常呈

17、蓝绿色。观察实验结果，发现培养皿中出现褪色空斑，说明蓝藻：_。例1、(1) 碳源   氮源   (2) （高压蒸汽）灭菌倒置      (3)  单个菌落  菌落数（）E    （5）扩大培养1-1、（1）自然选择 （2）初步选择能降解莠去津的细菌（目的菌）并提高其密度 (富集培养) （3）氮气   莠去津（4）划线分离   （稀释）涂布分离6 1异养型 分解者 选择培养基2 培养基没有灭菌；应灭菌。  接

18、种环温度太高将菌种烫死；接种环灼烧后应冷却，再沾取菌液。  不要将培养皿皿盖放在桌子上；应将培养皿皿盖打开一条缝。  三个统计结果，其中一个结果与另两个结果数据相差太多；需要重新做。（3）灭菌  7、（1）氮源（碳源不作要求） 碳源  无机盐  水  （2）高压蒸汽灭菌（3）恒温培养箱   无菌水 （4）多  高  （5）盐（或NaCl） 选择培养基8、 C、H、O；植物细胞壁 光合作用制造的 纤维素酶水解棉布中的一些纤维素；

19、植物体细胞杂交 原生质体 枯枝败叶多（落叶多、腐殖质多） 纤维素粉和刚果红 高压蒸汽无菌水 放在培养箱内在适宜条件下培养。周围有透明圈的菌落9（10分）（1）增加目的菌的菌群数量（提高菌的种群密度） 以甲醛为唯一碳源的细菌（2）活性污泥 高压蒸汽灭菌法（3）平板划线法（稀释涂布法） 单个菌落 甲醛浓度最低的培养瓶 需氧型（4）可以完全降解甲醛 甲醛浓度过高会使菌体蛋白质变性，从而降低了细菌降解甲醛的能力（甲醛浓度过高会产生毒害作用，降低了细菌降解甲醛的能力）2112江苏 下列关于制作果酒、果醋和腐乳的叙述，合理的是A在果酒发酵后期拧开瓶盖的间隔时间可延长B条件适宜时醋酸菌可将葡萄汁中的糖分解成

20、醋酸C果酒发酵过程中发酵液密度会逐渐减小D将长满毛霉的豆腐装瓶腌制时，底层和近瓶口处需加大用盐量答案： ABC【解析】在果酒发酵后期，由于瓶中的营养物质减少，单位时间内产生的CO2的量减少，所以拧开瓶盖的间隔时间可以延长，A正确；在糖源、氧气充足的条件下，醋酸菌可将葡萄汁中的糖分解成醋酸，B正确；果酒发酵过程中，营养物质消耗，并且有水的生成，密度会逐渐减小，C正确；将长满毛霉的豆腐装瓶腌制时，要分层加盐，加盐量要随着层数的加高而增加 ，近瓶口表面的盐要铺厚一些，但底层不需要大量用盐，D错误。30.【生物选修I：生物技术实践】（15分）回答下列关于腐乳制作的问题：（1）腐乳是豆腐经微生物发酵后制成的食品。多种微生物参与了该发酵过程，其中起主要作用的微生物是 ，其产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解为 和 ；其