患腹水综合症肉鸡的肺动脉转录组学研究

1、JIANGXI AGRICULTURAL UNIVERSITY本 科 毕 业 论 文（设 计）题目： 患腹水综合症肉鸡的肺动脉转录组学研究 学 院： 动物科学技术学院 姓 名： 学 号： 专 业： 动物医学 年 级： 二0 15 年 5 月摘要 为了探讨肉鸡腹水综合症与肺动脉生物学变化的关系，从转录组生物信息的水平上对肉鸡肺动脉进行分析。本实验选取了75羽15日龄健康AA肉鸡随机分成对照组（20羽）和造病组（55羽），造病组（D）饲喂含0.3% Nacl的高盐水，对照组（N）饮正常水。在饲养过程中肉鸡出现明显腹水综合症临床症状后颈静脉放血致死，并取RV/TV0.29的鸡肺动脉于液氮速冻，再放置

2、-80保存，备用于转录组测序技术（RNA-seq）检测。结果表明：（1）腹水鸡和正常鸡相比，发现了895个差异表达基因。（2）根据GO富集分析，895个差异表达基因主要参与Ribosome，Translation，Chemokine and cytokine activity，Immune system等多个代谢通路以及可导致它们发生生物学变化。本实验结果揭示了患腹水综合症肉鸡的肺动脉与正常的肉鸡相比，基因转录水平现出了显著的差异。因此，其结果为肉鸡腹水综合症的发病机制提供了更新的信息，也为研发肉鸡腹水综合症新的药物靶点筛选提供一定依据和临床价值。关键词：肉鸡；肉鸡腹水综合症；RNA-seqI

3、IIAbstract An experiment was carried out to investigate the pulmonary artery changes of broilers with Ascites Syndrome on transcriptome biological level. 75 15-days Arbor Acre commercial broilers were randomly divided into control group (20) and disease group (55), and the control group broilers (N)

4、 was raised with tap water while disease group broilers(D) was given 0.3% Nacl water. During the trail, birds were killed when they showed obvious clinical symptoms, and the pulmonary arterys were collected and stored in -80 for RNA-seq test if the RV:TV of the bird was over 0.29 . Results presented

5、 that: compared to control group, (1) the disease groups have 895 differential expressed genes. (2)According to GO analysis, 895 differential expressed genes enriched to these biological progress such as Ribosome, Translation, Cytokinecytokine etcr multiple metabolic pathways and cause them to occur

6、 biological changes. The experiment demonstrated that gene transcript level of pulmonary artery of the broiler with ascites syndrome had a remarkable difference compared to the normal broiler. Therefore, our results provided updated information for the pathogenesis research of broiler ascites syndro

7、me, and also offered evidence and clinical value for exploiting new drug targets against ascites syndrome.Key words：broiler; Ascites syndrome; RNA-seqIV目 录摘要IIAbstractIII前 言11 实验材料与方法21.1 试验动物和分组管理21.2 试验日粮21.3 样品收集与保存21.4 主要仪器和试剂21.5 实验耗材31.6 RNA-seq 检测样品的收集与准备31.6.1 RNA提取操作步骤31.6.2 DEG测序的实验室准备41.6

8、.3 序列分析51.6.4 RNA-seq 检测数据分析52 结果72.1 RNA样品检测结果72.1.1 RNA电泳结果72.2 样本间相关性102.3 基因表达Density图112.4 差异表达基因筛选112.5 差异基因GO Terms分析123 讨论143.1 RNA样品质量143.2 样本选择的可靠性143.3 差异基因GO Terms富集分析154 结论15参考文献16附录18致谢19V前 言 肉鸡腹水综合症(Ascites syndrome，AS）也称为肺动脉高压综合症(改为中文格式pulmonary hypertension，PH），是由多种致病因子共同作用而引起的一种营养代

9、谢病，在肉鸡养殖业中频繁发生，据统计，其发病率为5-10%，并且照成了巨大的经济损失1要上标，所有参考文献。肉鸡腹水综合症的发病表现为呼吸困难，精神沉郁，并且很快死亡，解剖发现腹腔和心包有大量积液，并且右心室显著肿大2.。 去掉对于肉鸡腹水综合症的发病原因，国内外一些研究发现，肉鸡腹水综合症发病的主要原因是肺动脉高压。由于肉鸡生长速度过快，在短时间内就可以达到一定的体重，尤其是快大型肉鸡，但是这时肉鸡的器官并没有发育完成，特别是心血管系统。为了维持机体的活动以及对氧气的需求，心脏就会泵出足够的血液来维持，这时过多的血液流到有限的肺血管中，血液压力过大，肺动脉高压情况就出现。此时，血液流速过快，

10、并没有携带足够的氧气，造成了体内氧气供求不平衡。为了缓解这一情况，右心室会代偿出更多的血液，出现了右心室壁显著增厚的情况3。实际上，国内外很多报道已经证实缺氧，低温，高能量日粮等外界因素都会使肉鸡发生肉鸡腹水综合症4。很多研究把肉鸡心脏指数AHI超过0.29和血容量升高当作指示肉鸡腹水综合症的重要指标5, 6.研究报道通过限饲，长时间基因选育以及药物预防等方法来来缓解肉鸡腹水综合症对养鸡业造成的损失的效果并不显著，故对于肉鸡腹水综合症的研究值得众多科研工作者投更多的精力7。事实上，对于肉鸡腹水综合症的研究，目前国内外大多数都是停留在水平和生化水平上，对于基因水平研究少之又少，有基因方面的研究也

11、是个别基因，并不全面。故下一步的研究应当从整个基因组水平来分析。随着科学的进步，高通量测序方法深受研究者的青睐，特别是在人医研究中，其优点是能鉴别组疾病发生过程中差异基因的表达以及差异基因参与的代谢通路，这就为后续的研究提供了非常好的铺垫。本实验的研究目的就是用seq-RNA的方法在整个基因水平来分析肉鸡腹水综合症的发病机理。据报道，肺动脉血管的变化与肉鸡腹水综合症的发生有关，已经证实发生肉鸡腹水综合症时肉鸡的肺动脉血管会发生重塑，而且肺动脉中的缺氧诱导因子表达会显著增高8。故改为：因此，本实验选取的是发生肉鸡腹水综合症的肉鸡肺动脉做转录组分析，找出与肉鸡腹水综合症相关的所有差异表达基因和这些

12、基因参与的生物过程，从而为更好的治疗和预防肉鸡腹水综合症做出铺垫。1 实验材料与方法1.1 试验动物和分组管理本实验选取的是AA肉鸡（Arbor Acre commercial broiler chickens）75羽。所有肉鸡按常规免疫程序进行免疫。所有肉鸡人工笼养至21日龄，然后随机分为，造病组55羽和对照组20羽。在21日龄前均正常饲喂和饮水，第22日龄，其中造病组饲喂含0.3%的Nacl水，对照组正常饮水。对照组和造病组都给予相同饲料，自由采食。所有肉鸡均按规定免疫程序进行免疫，驱虫。对照组、造病组隔离笼养。试验持续6周。1.2 试验日粮本试验中肉鸡基础日粮来源于南昌某公司肉仔鸡饲料。

13、字体不一样1.3 样品收集与保存 在造病组出现精神沉郁，呼吸困难，采食和饮水废绝的肉鸡时采样，每次采样挑选健康状况最差的造病组鸡5只，随机挑选照组鸡3只，剩余肉鸡在第50日龄一次采完。采样前一夜禁水禁料，采样当天空腹称重，颈静脉放血致死，观察组织病理变化。迅速取每羽鸡肺动脉，用DEPC水清洗多次后，放于DEPC水处理过的1.5mLEP管中，迅速放入液氮中速冻，然后转移到-80超低温冰箱冷冻保存，用于RNA-seq检测。段前空格多了，只要两个汉字空格就可以了，字体大小不一致1.4 主要仪器和试剂ZDX-35BI型座式自动电热压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；DW-86L388海尔立式超低温冷

14、冻冰箱（青岛海尔特种电器有限公司）；电热恒温水浴箱（上海医疗器械七厂）；SZ-93自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣科学仪器有限公司）；全自动生化分析仪BS-380检测（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）；各种规格微量移液枪（芬兰Labsystem公司）DF206电热鼓风干燥箱（北京医疗设备二厂）普通冰箱（南昌齐洛瓦电器集团）；分析电子天平（Sartorius Groupe，Germany）；100万单位链霉素，80万单位青霉素，肝素钠、NaCl、去掉等均为市售。字体不一1.5 实验耗材 各种规格托盘，手术剪，眼科剪，眼科镊，组织镊，手术刀片，PE手套，封口膜，一次性口罩，保鲜膜，无脂纱布，自封袋，

15、牛皮纸，7.5cm滤纸，脱脂棉，称量纸，擦镜纸，盖玻片，载玻片，玻片架，中性树胶等。10mL、1mL和5mL注射器，1.5mL，5mL和10mLEP管，200L和1000L枪头，50mL与100mL烧杯，100量筒和500mL量筒，液氮罐；。与上同样的问题1.6 RNA-seq 检测样品的收集与准备 建库测序的流程一般包括以下步骤（图1）：总RNA样品的检测，mRNA的富集，双链cDNA的合成，末端的修复、加poly-A和接头，片段的选择和PCR富集，文库质量的检测，上机测序15。从RNA样品的提取到最终获得数据，每一个环节（样品检测、建立文库、测序）都会对最终数据的好坏产生巨大影响，而后续信

16、息分析又直接受到数据的好坏的影响。因此要对每一个生产步骤严格把控，产生高质量的数据，从而从源头上确保结果的准确可靠。与上同样的问题图1 RNA-seq主要技术流程Fig要加点.1 The main technical process 1.6.1 RNA提取操作步骤 （1）取用液氮研磨后样本20mg 左右加入1mL Trizol 中，震荡，室温静置5min，12000rpm，离心10min，然后将上清转移至新管。 （2）按照Trizol：氯仿=5:1 的比例加入氯仿，盖紧管盖，漩涡振荡器上振荡混匀，室温静置3-5min，自然分相。 （3）4C，12000g 离心10min，混合物会分成三层。 （

17、4）将上层水相转入一新管，加入等体积氯仿，振荡混匀，室温静置3-5min，自然分相，4C，13000g 离心15min。 （5）将上层水相转入新的1.5mL EP 管（约400-500L），加入等体积的异丙醇，混匀后，80放置20min。 （6）4C，13000rpm 离心15min，弃掉上清。 （7）RNA 沉淀用1.0mL 75乙醇漂洗，4C，13000rpm 离心5min。 （8）重复步骤7。 （9）将沉淀置于超净工作台吹干，用适量DEPC 处理水溶解RNA 沉淀。RNA的定值与定量，琼脂糖凝胶电泳分析RNA降解程度以及是否有污染，Nanodrop检测RNA的纯度（OD260/280比值

18、），Qubit对RNA浓度进行精确定量，Agilent 2100精确检测RNA的完整性。 1.6.2 DEG测序的实验室准备 每个RNA样品输入3g。按照NEBNext Ultra RNA Library Prep Kit for Illumina （NEB, USA）使用说明书建立序列库，并在每个样品的属性序列中加入索引编码。方法是用多聚T微链接磁珠将mRNA 从总RNA中纯化出来。将碎片用二价离子在高温NEBNext首链合成反应液（5X）中提取出来。首链cDNA 用随机六聚体引物和M-MuLV 反转录酶（RNase H-）合成。随后，次链cDNA用DNA聚合酶I和RNA酶H合成。末端通过核

19、酸外切酶/聚合酶活性转换成钝端。DNA碎片3末端腺苷酰化作用后，绑结上带发夹结构的NEBNext Adaptor 为杂交做准备。用AMPure XP system （Beckman Coulter, Beverly，USA）纯化库碎片，以选择150200 bp长度cDNA 碎片。在大小适当，并加入适配器的cDNA中加入3 l应是L，全文要统一 USER Enzyme （NEB，USA）， 37C，15分钟，95C，5分钟，然后在Phusion High-Fidelity DNA 聚合酶，通引和指引下进行PCR，最后，用AMPure XP系统纯化PCR产物，并用Agilent Bioanalyz

20、er 2100系统评定建库质量。 获得Sequenced Reads 后，在有相关物种参考序列或基因组的情况下，进行生物信息分析，其流程如图2。GO富集分析蛋白互作网络分析蛋白互作网络分析原始测序数据参考序列比对分析基因表达水平分析RNA-seq整体质量评估基因差异表达分析测序数据质量评估图 2 生物信息分析流程Fig. 2 Bioinformatic analysis process1.6.3 序列分析空格按照使用说明书，在cBot 集群生成系统上使用TruSeq PE Cluster Kit v3-cBot-HS （Illumia）进行引物编码样本的聚类，集群生成后，在Illumina H

21、iseq 2000/2500平台上进行库准备工作和并制定100 bp/50bp单端磁珠。1.6.4 RNA-seq 检测数据分析1.6.4.1 RNA质量检测项目RNA质量检测项目如表1。表 1 RNA检测项目Table 1 RNA test items样品类型RNA备注检测项目初步检测琼脂糖凝胶电泳定量；Nanodrop初步检测是必检环节，合格后才可以进行浓度、完整性、纯度的检测。浓度Nanodrop完整性Agilent 2100纯度Nanodrop 1.6.4.2 Reads质量控制 Fastq形式的数据首先通过原始数据内部脚本编程，去掉带接头的reads，包含多聚N的reads，以及低质

22、量的reads得到clean reads。同时，计算clean data的Q20，Q30和 GC含量。所有的后续分析都基于高质量的clean data。1.6.4.3 Reads比对参考基因 基因组和基因模型注释文件直接从基因组站点下载。参考基因组索引用Bowtie v2.0.6建造和单端clean reads用TopHat v2.0.9匹配参考基因组。选择 TopHat 作为比对工具，对于unigene DGE，单端clean reads用Bowtie v0.12.9匹配the unigene序列。1.6.4.4 基因表达水平的定量分析 用HTSeq v0.6.1计算比对到每个基因的read

23、s数。然后基于基因的长度比对到这个基因的reads数计算每个基因的RPKM。对于unigene DGE，用RSEM 计算比对到每个unigene的reads数。1.6.4.5 差异表达分析 对于有生物重复的DESeq，两种条件/两组（每种条件下两个个生物重复）的差异表达分析用DESeq R 包（1.10.1）进行。结果P-values用Benjamini 和Hochbergs 方法调整以控制错误率。DESeq中调整后P-value 0.05的基因被认为是差异基因。1.6.4.6 差异表达基因的GO分析 差异表达基因的GO富集分析通过GOseq R包进行，同时纠正基因长度的偏差，修正后P值小于0

24、.05的GO terms 被认为显著富集差异表达基因。2 结果2.1 RNA样品检测结果2.1.1 RNA电泳结果从图3可以看出28s和18s条带的亮度差不多，无杂带。样品的浓度分别达到N1：172ng/L，N2：284ng/L，D1：252ng/L，D2：274ng/L，RIN均为7以上，样品质量均达到A级（表2）。 图3 肺动脉总RNA PCR电泳结果M：Marker（Trans 2K Plus）；D1，D2：造病组；N1，N2：正常组 Fig. 3 RNA electrophoretic results of the pulmonary arteryM：Marker（Trans 2K P

25、lus）；D1，D2：Disease group；N1，N2：control group表 2 两组（N/D）的总RNA检测结果Table 2 Total RNA testing result of two group (N/D)样品编号浓度（ng/L）OD260/280OD260/23028S/18SRIN值检测结果N11721.871.5930.97.5AN22841.8931.5270.97.7AD12521.9381.1051.17AD22741,.8772.0451.27.2AA:样品质量满足建库测序要求，且总量满足2次或者2次以上建库需要2.1.2 测序数据质量及Reads与参考基

26、因组比对情况样品测序产出数据质量评估情况：从图4、5可以看出四个样本都只有前6个碱基错误率偏高，之后的碱基错误率均在0.01%以下。从表3也说明单个碱基位置的测序错误率均为0.01%，Q20，Q30值分别得到97%，95%以上，GC含量均在50%左右。图4 对照组测序错误率分布Fig 4. The testing result of error rate distribution of control group图5 造病组测序错误率分布Fig 5. The testing result error rate distribution of disease group 表.3 测序数据质量情况

27、Table 3 Quality status of the sequencing dataSample nameRaw readsClean readsClean basesError rate(%)Q20(%)Q30(%)GC content(%)N113172095129218320.650.0197.9395.9148.61N215908860156746750.780.0197.9495.9349.01D113818353134937940.670.0198.2496.6050.26D213992954137353610.690.0198.2396.6050.42注：Sample na

28、me: 样品名；Raw reads: 统计原始序列数据，以四行为一个单位，统计每个文件的测序序列的个数；Clean reads: Clean reads的个数乘以长度，并转化为以G为单位；Error rate: 通过公式：Qphred = -10log10(e) 计算得到；Q20，Q30：分别计算Phred数值大于20、30的碱基占总体碱基的百分比；GC content: 计算碱基G和C的数量总和占总的碱基数量的百分比。 Reads与参考基因组比对情况：如果参考基因组选择合适并且相关实验不存在污染的情况下，实验所产生的测序序列的定位的百分比正常情况下会高于70%，其中具有多个定位的测序序列占总

29、体的百分比通常不会超过10%。在本实验中，total reads 与参考基因组的比对均达到89%以上，Multiple mapped 均在2%以下（表4）。表4 Reads与参考基因组比对情况Table 4 The situation of reads mapping to reference genomeSample nameN1N2D1D2Total reads12921832156746751349379413735361Total mapped11687676(90.45%)14161568(90.35%)12120029(89.82%)12315378(89.66%)Multiple

30、 mapped218094(1.69%)228240(1.46%)210695(1.56%)250856(1.83%)Uniquely mapped11469582(88.75%)13933328(88.89%)11909334(88.26%)12064522(87.84%)Reads map to +5734482(44.38%)6963551(44.43%)5955487(44.14%)6029451(43.9%)Reads map to -5735100(44.38%)6969777(44.47%)5953847(44.12%)6035071(43.94%)Non-splice read

31、s9790044(75.76%)11774512(75.12%)10000081(74.11%)10074221(73.35%)Splice reads1679538(13%)2158816(13.77%)1909253(14.15%)1990301(14.49%)注：Total reads: 测序序列经过测序数据过滤后的数量统计（Clean data）；Total mapped: 能定位到基因组上的测序序列的数量的统计；Multiple mapped：在参考序列上有多个比对位置的测序序列的数量统计；Uniquely mapped: 在参考序列上有唯一比对位置的测序序列的数量统计；Reads

32、to+，Reads to-：测序序列比对到基因组上正链和负链的统计；Splice reads：分段比对到两个外显子上的测序序列的统计，Non-splice reads为整段比对到外显子的测序序列的统计。2.2 样本间相关性样本间皮尔逊关联显示：对照组和造病组各组内比较R2均大于0.9，而两组组间比较则都小于0.9（图6）图6样本间相关性检测Fig 6 Correlation test of RNA-seq2.3 基因表达Density图图7 样本差异基因表达density图Fig.7 The density figure of sample differential expressed gen

33、es从图7可以看出对组和正常组的基因表达不能完全吻合，说明了腹水鸡和正常鸡基因表达有差异。2.4 差异表达基因筛选通过对基因表达进一步筛选出显著差异基因，从火山图可以看出造病组和正常组差异表达的基因共有895个，其中上调基因有437个，下调基因458个（图8）。图8 差异表达基因筛选Fig. 8 Volcano plot of differential expressed genes2.5 差异基因GO Terms分析 差异基因GO Terms富集柱状图，直观的反映出在生物过程（Biological process）、细胞组分（Cellular component）和分子功能（Molecula

34、r function）富集的GO term上差异基因的个数分布情况。我们挑选了富集最显著的30个GO term在图中展示，本实验结果表明：对照组与造病组之间所有差异基因GO富集柱状图中显著富集到2个参与生物过程，3个参与细胞组分，7个参与分子功能的差异基因；显著富集到1个生物过程，8个细胞组分及2个参与分子功能的下调差异基因；显著富集到2个参与生物过程，5个参与分子功能的上调差异基（图10）。图 10 GO富集柱状图A，B：分别表示下调基因及上调基因GO富集柱状图，纵坐标为富集的GO term，横坐标为该term中差异基因个数；不同颜色用来区分生物过程、细胞组分和分子功能；带“”的为显著富集的

35、GO+termsFig. 10 GO enrichment histogramA, B represent the down and up regulated gene GO enrichment histogram, the enrichment term is in vertical coordinates and the number of differential genes of the term is in horizontal axis; the classify Of biological process, cellular Component and molecular Fu

36、nction is depended on the color, the terms with a “” is notable enrichment GO terms.3 讨论3.1 RNA样品质量 从RNA电泳图可以看出28s和18s条带的亮度差不多一样，无杂带（图3）。样品的浓度分别达到N1：172ng/L，N2：284ng/L，D1：252ng/L，D2：274ng/L，RIN均为7以上，样品质量均达到A级（表2），表明样品质量满足建库测序要求，且总量满足2次或者2次以上建库需要。数据质量与Reads对比情况一般情况下，单个碱基位置的测序错误率应低于0.01%，前6个碱基测序错误率较高的

37、原因为随机引物和RNA模版的不完全结合，最高在0.06%左右可以接受。Reads的GC含量指标的警告阈值为15%的reads的GC含量偏离正态分的标准差13。本实验中单个碱基位置的测序错误率均为0.01%，Q20，Q30值分别得到97%，95%以上，GC含量均在50%左右（表3），因此，本实验的数据质量可靠。Reads与参考基因组比对情况：如果参考基因组选择合适并且相关实验不存在污染的情况下，实验所产生的测序序列的定位的百分比正常情况下会高于70%，其中具有多个定位的测序序列占总体的百分比通常不会超过10%。在本实验中，total reads 与参考基因组的比对均达到89%以上，有多个比对位置

38、的测序序列的定位的百分均在2%以下（表4），表明选择的参考基因组可靠。3.2 样本选择的可靠性样品间基因表达水平相关性是检验实验可靠性和样本选择是否合理的重要指标，相关系数越接近1，表明样品之间的表达模式相似度越高14。从皮尔逊相关性可以看出在两个对照组和两个造病组之间相关性均大于0.9，而在对照组和造病组之间的相关系数则小于0.9，表明本实验造病成功和样本选择合理；基因表达韦恩图表达了各组表达的基因个数，以及其重叠关系，本实验基因表达韦恩图显示对照组和造病组有明显的基因表达差异。火山图可以反应出筛选后的差异基因整体分布情况，从图7也反应出造病组的基因表达和对照组有显著差异。 3.3 差异基因

39、GO Terms富集分析 差异基因GO富集柱状图，直观反应出发病鸡和正常鸡在生物过程，细胞组分和分子功能方面的变化16。下调差异基因GO富集柱状图中显示，显著富集到的与生物过程有关的下调GO term翻译，参与细胞组分的下调GO terms 核糖体，核糖核蛋白复合体，表明在腹水发生时机体的蛋白合成受到严重影响17，这可能是由于机体缺氧，以及细胞损伤等造成的；显著富集到的GO terms无膜界限的细胞器，胞内无膜界限的细胞器，细胞质部分，细胞质，细胞外基质，核糖体的结构组分以及结构分子活性，胞外蛋白高分子配合物，表明发生腹水综合症时，机体的蛋白质含量大大减低，并且细胞核糖体等细胞器受到损伤，以及

40、细胞基质发生变化，腹水综合症发生时细胞的结构受到破坏16，富集到的和生物功能有关的上调基因GO terms有免疫反应和免疫系统过程，表明机体发生腹水综合症时，肉鸡的免疫功能代偿性上调，而富集到的和分子功能有关的上调基因包括趋化因子活性，趋化因子结合受体，细胞因子活性，细胞因子结合受体及G-蛋白偶联受体，趋化因子是控制细胞定向迁移的一类细胞因子，趋化因子系统在清除病原体、炎症反应、等方面都起着重要的作用，其增多可能是腹水发生时，机体的炎症细胞大量增加，大量迁移的原因。细胞因子具有多种生物学活性，在机体内发挥重要的功能，机体细胞因子有关的分子功能GO terms 上调，也显示机体内环境发生了严重的

41、失调9。4 结论本实验通过高通量测序的方法在整个基因水平上研究了肉鸡腹水综合征发病过程中其肺动脉的变化，通过与正常鸡对比，腹水鸡出现了895个显著差异表达基因，而根据GO term 的富集发现显著下调的差异基因主要参与了核糖体，核糖体蛋白，转录，细胞外基质等生物过程，上调的差异基因主要富集到了免疫应答反应和趋化因子的活动等过程。根据结果可以推断，肉鸡在发生腹水综合征的过程中，肺动脉细胞受到损失，为了保护机体，其免疫功能代偿性上调。这些研究结果为肉鸡腹水综合症的发病机制提供了更新的信息，也为研发肉鸡腹水综合症新的药物靶点筛选提供一定依据和临床价值。参考文献1. Che, XH, Park, EJ

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