卡介菌多糖核酸对正常小鼠T淋巴细胞亚群的影响

1、第40卷第4期2004年12月青岛大学医学院学报ACTAACADEMIAEMEDICINAEQINGDAOUNIVERSITATISVol.40,No.4December2004卡介菌多糖核酸对正常小鼠T淋巴细胞亚群的影响李永喜1,陈兴平2,邓云华2,陈映玲2,周礼义2(1青岛市市立医院皮肤科,山东青岛266011;2华中科技大学同济医学院附属同济医院皮肤科)摘要目的探讨卡介菌多糖核酸对正常小鼠T淋巴细胞亚群的影响及其免疫调节的机制。方法用流式细胞仪测量小鼠胸腺、脾脏、外周血单个核细胞中T细胞亚群CD4+、CD8+细胞变化并计算CD4+/CD8+的比CD8+细胞的比例,值。结果与正常对照组比较

2、,卡介菌多糖核酸可提高正常小鼠上述3种不同组织中CD4+、并在第35天有明显差异(F=5.6311.21,q=5.329.13,P0.05),而对CD4+/CD8+比值无明显影响。结论卡介菌多糖核酸可以促进T细胞的分化与成熟,并可能通过调节CD4+、CD8+细胞两亚群之间的平衡来发挥免疫调节作用。关键词卡介菌多糖核酸;T淋巴细胞;免疫测定;小鼠中图分类号R967文献标识码A文章编号167224488(2004)0420328203EFFECTSOFBCG2POLYSACCHARIDESNUCLEICACIDONT2LYMPHOCYTESUBSETSINNORMALMICELIYong2xi,C

3、HENXing2ping,DENGYun2hua,etal(DepartmentofDermatology,QingdaoMunicipalHospital,Qingdao266011,China)ABSTRACTObjectiveToinvestigatetheeffectsofBCG2polysaccharidesnucleicacid(BCG2PSN)onT2lymphocytesubsetsofnormalmiceanditsroleinimmunoregulation.MethodsThechangesofCD4+andCD8+lymphocytesweremeasuredwithf

4、lowcytome2tryinthethymus,spleenandperipheralbloodofthemice,andtheCD4+/CD8+ratiowascalculated.ResultsComparedwiththecon2trolgroup,BCG2PSNcouldincreaseCD4+andCD8+lymphocytesintheabove2mentionedtissues,thedifferencebecamesignificantonthe35thday(F=5.63-11.21,q=5.32-9.13,P0.05),butithadnoeffectontheCD4+/

5、CD8+ratio.ConclusionBCG2PSNcanacceleratethedifferentiationandmaturityofT2lymphocytesandmayexertsitsimmunoregulativerolebyregulatingthebalancebetweenCD4+andCD8+.KEYWORDSBCG2polysaccharidesnucleicacid;T2lymphocytes;immunoassay;mice卡介菌多糖核酸是从卡介菌中经热酚法提取多糖、核酸,配以灭菌生理盐水制成的一种注射剂,临床上广泛应用于病毒感染性疾病、自身免疫性疾病等的辅助治疗

6、,证明其有很好的疗效。但其具体的作用机制尚未完全清楚。本实验以流式细胞仪检测了卡介菌多糖核酸对正常小鼠的胸腺、脾脏、外周血中T淋巴细胞CD4+、CD8+亚群的影响,以探讨卡介菌多糖核酸的作用机制。现报告如下。1材料与方法1.1材料及其来源由BectonDikinson公司生产。1.2分组与处理卡介菌多糖核酸注射液由长沙九芝堂生物制药有限公司提供,胸腺肽注射液由武汉梅山生物化学制药厂生产,FITC2CD4+单抗、PE2CD8+单抗由美国PharMigen公司生产,Ficoll2Hypaque淋巴细胞分离液由上海试剂二厂生产。实验动物为健康昆明种小白鼠,雌雄兼用,45周龄,体质量(203)g,由同

7、济医学院实验动物中心提供,流式细胞仪FACSort收稿日期2003211220;修订日期2004203208作者简介李永喜(19702),男,硕士,主治医师。鼠胸腺、脾脏,剥除表面结缔组织被膜后在200目不锈钢网中轻轻揉搓,以PBS液冲洗,然后加入Tris2NH4Cl液使红细胞裂解,最后用PBS液洗涤,调整4期李永喜,陈兴平,邓云华,等1卡介菌多糖核酸对正常小鼠T淋巴细胞亚群的影响329于NS组及Th组(F=5.63、9.65,q=4.968.01,+P0.05);Th组CD4明显低于NS组(q=7.62,P0.05)。见表2。2.3卡介菌多糖核酸对正常小鼠外周血T淋巴细冷PBS液洗涤,10g

8、/L多聚甲醛液固定后用流式细胞仪进行检测。2结果2.1卡介菌多糖核酸对正常小鼠胸腺中T淋巴细胞亚群的影响用药后第14天BCG2PSN组CD4+、CD8+值明显低于Th组(F=4.89、7.37,q=6.73、10.25,P0.05);Th组CD4+、CD8+值明显高于NS组(q=7.23、8.59,P0.05),CD4+/CD8+值明显低于NS组与BCG2PSN组(F=6.57,q=7.81、8.20,P0.05)。胞亚群的影响用药后第14天BCG2PSN组CD8+明显低于NS组及Th组(F=8.79,q=4.76、5.62,P0.05);用药后第35天BCG2PSN组CD4+、CD8+明显高

9、于NS组(F=8.39、10.41,q=6.17、9.13,P0.05);Th组CD4+明显高于NS组(q=8.20,P0.05),CD8+明显低于NS组及BCG2PSN组(q=6.54、7.89,P0.05),CD4+/CD8+明显高于NS组与BCG2PSN组(F=9.25,q=6.39、7.15,P0.05)。见表3。3讨论T细胞根据其表面表达的CD分子的不同,分用药后第35天,BCG2PSN组和Th组CD4+、CD8+明显高于NS组(F=8.73、11.21,q=5.327.21,P0.05),BCG2PSN组CD4+、CD8+值明显低于Th组(q=6.13、7.17,P0.05)。结果

10、见表1。2.2卡介菌多糖核酸对正常小鼠脾脏T淋巴细胞为CD4+细胞和CD8+细胞两大亚群。正常的免疫应答有赖于各免疫细胞,尤其是T细胞亚群之间的相互制约,以形成适度的免疫应答,使机体在此过程既能清除抗原性物质,又不损伤自身组织。免疫功能的紊乱,常常是由于各T细胞亚群之间的不平衡造成的1,2。现代免疫学观点认为,外周血中T细胞亚群的影响用药后第35天BCG2PSN组CD4+、CD8+明显高表1卡介菌多糖核酸对正常小鼠胸腺T细胞亚群的影响(%,xs)组别n实验前CD+CD+CD+/CD+CD+第14天CD+CD+/CD+CD+第35天CD+333注:CD4+/CD8+为比值。第14天与、比较,F=

11、4.897.37,3q=7.238.59,P0.05;与比较,q=6.73、10.25,P0.05;第35天、与比较,F=8.73、11.21,3q=5.327.21,P0.05;与比较,q=6.13、7.17,P0.05表2卡介菌多糖核酸对正常小鼠脾脏T细胞亚群的影响(%,xs)组别n实验前CD4+CD8+CD4+/CD8+CD4+第14天CD8+CD4+/CD8+CD4+第35天CD8+CD4+/CD8+2.200.1929.973.0339.542.0233注:CD4+/CD8+为比值。第35天与、比较,F=5.63、9.65,q=4.968.01,P0.05;与比较,q=7.62,P0

12、.05表3卡介菌多糖核酸对正常小鼠外周血T细胞亚群的影响(%,xs)组别n实验前CD+CD+CD+/CD+CD+第14天CD+CD+/CD+CD+第35天CD+CD+/CD+333注:CD4+/CD8+为比值。第14天,与、比较,F=8.79,q=4.76、5.62,P0.05;第35天时与比较,F=8.39、10.41,q=6.17、9.13,P0.05;与比较,#q=8.20,P0.05;与、比较,F=8.39、9.25,33q=6.397.89,P0.05330青岛大学医学院学报40卷亚群的数目和CD4+/CD8+比值是估计机体免疫调节平衡状态最有意义的参数之一,也是疾病严重程度和预后的

13、重要标志之一3,4。本实验观测了卡介菌多糖核酸对CD4+、CD8+的影响,结果显示,卡介菌多糖核酸可以提高胸腺组织中CD4+、CD8+细胞的比例,并可以维持两者间的平衡,使CD4+/CD8+值保持在正常水平,这种作用在用药后的第35天非常明显。T淋巴细胞在胸腺中由始祖T细胞(pro2T)经过一系列的过程最后分化发育为成熟CD4+、CD8+细胞,并通过胸腺进入外周血液及淋巴器官,发挥免疫作用。研究同时显示,在脾脏和外周血中,CD4+、CD8+细胞在用药后第35天亦明显高于正常对照组,CD4+/CD8+Zlotta等6分离提取卡介苗的细胞壁、浆膜、多糖(葡聚糖、阿拉伯聚糖)等成分,并刺激结核菌素纯

14、蛋白衍生物试验阳性健康人外周血单个核细胞,发现这几种成分均可以促进CD4+细胞的增殖与活化。而卡介菌多糖核酸作为卡介苗的提取物,其主要成分为多糖与核酸的混合物。结合本实验及既往研究说明,卡介菌多糖核酸可能在外周血、外周免疫器官(脾脏)和中枢免疫器官(胸腺)中直接调节CD4+、CD8+细胞的成熟与分化而维持二者的平衡,使机体免疫功能得到维持和提高。但卡介菌多糖核酸对T淋巴细胞调控的信号途径尚需进一步研究。参考文献1234值一直维持在正常水平,CD4+、CD8+细胞在脾脏和外周血中的变化情况与在胸腺中的变化情况一致。实验结果还显示,胸腺肽虽然也可影响CD4+与CD8+细胞的比例,但同卡介菌多糖核酸

15、比较,其在一定时间内(胸腺中第14天,外周血中第35天)可使CD4+、CD8+两亚群发生紊乱,从而导致值低于(胸腺组织中)或高于(外周血中)正常水平,而卡介菌多糖核酸对两亚群的调节为均衡的,从而使免疫应答能正常进行。在以前的实验中还显示,卡介菌多糖核酸可以调节环磷酰胺诱导的免疫功能低下小鼠CD4+、CD8+CD4+/CD8+1998.8289.McMichaelAJ,FabreJUS.MonoclonalantibodiesinclinicalmedicalM.London:AcademicPressINCltd,1982.230.SyrijalaH,SurcelHM,IlonenJ.LowC

16、D4+/CD8+lymphocytera2tioinacutemyocardialinfectionJ.83:326.ClinExpImmunol,1991,5陈兴平,李永喜,邓云华,等.卡介菌多糖核酸对免疫抑制小鼠T淋巴细胞亚群的影响J.华中科技大学学报,2002,31(3):336.两亚群的比例,使两亚群恢复至正常水平5,6ZlottaAR,VoorenJPV,DenisO,etal.Whataretheimmuno2logicallyactivecomponentsofbaciliecalmette2guerinintherapyofsuperficialbladdercancerJ?I

17、ntJCancer,2000,87:844.从而说明卡介菌多糖核酸可以维持正常机体的免疫功能。(上接第327页)2AmHeartJ,1998,135:733.CircRes,1986,58:(本文编辑厉建强)SanDiego,Calif:Grune&Stratton,1985.265276.6RobertV,VanThiemN,CheavSL,etal.IncreasedcardiactypesandcollagenmRNAsinaldosteron2salthypertensionJ.Hypertension,1994,24:30.Chest,1981,8DilaverisPE,GialafosEJ,AndrikopoulosGK,etal.ClinicalandelectrocardiographicpredictorsofrecurrentatrialfibrillationJ.PACE,2000,23:352.PACE,9FanK,LeeKL,ChiuCS,etal.Effectsofbiatrialpacinginpr