血浆内氧化低密度脂蛋白在肺癌和血管损伤性疾病中特异性变化的实验研究

1、血浆内氧化低密度脂蛋白在肺癌和血管损伤性疾病中特异性变化的实验研究         10-08-31 08:43:00     编辑：studa20                  作者：韩京军，李星云，尹学哲【摘要】  目的研究不同种氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）在肺癌（Ca）和动脉硬化性血管

2、损伤性疾病（As）病人血液中的特异性变化，探讨不同种氧化低密度脂蛋白与肿瘤及动脉硬化发病之间的相互关系。方法以临床确诊肺癌的16例患者为Ca组，12例患者为As组，选择健康大学生20名作为正常对照组。分别检测血浆内LPO含量、SOD活性及各组氧化脂质的峰线位置。结果Ca组、As 组LPO含量与正常组比较差异有显著性，As组SOD活性与正常组比较差异有显著性；在薄层层析中Ca组、AS与正常组的过氧化低密度脂蛋白分布均有不同。结论Ca与As患者和正常人比较其细胞氧化低密度脂蛋白代谢特征表现为代谢率增强，过氧化低密度脂蛋白具有不同的特异性变化。 【关键词】  氧化低密度脂蛋白； 肺癌； 动

3、脉硬化性血管损伤疾病Abstract：ObjectiveTo study the distinctive change of different peroxidized low density lipoprotein (OX-LDL) in the blood of arteriosclerotic disease (As) and lung cancer (Ca). To investigate the correlation of different OX-LDL in As and Ca.MethodsObjects were divided into three groups: pat

4、ients diagnosed as lung cancer (Ca group); patients diagnosed as arteriosclerosis (As group); 20 healthy students of university (control group). Low density lipoprotein (L-LDL) and high density lipoprotein (H-LDL) were collected from the plasma with ultracentrifuge method. The concentrations of LPO

5、and SOD in plasma were examined. And the top line positions and the rough concentrations of OX-LDL were evaluated.ResultsCompared to control group, the LPO levels in As group and Ca group were significantly increased. The SOD level was significantly higher in As group than in control group. In the R

6、IA, the distribution of Ca group and As group versus control group were different. Compared to control group, significant statistic differences were found in both of Ca group and in As group. But there was no statistic difference between Ca group and As group.ConclusionThe metabolic rates of OX-LDL

7、can significantly increase more both in Ca group and in As group than in control group, and the specific changes can be observed.Key words：Peroxidized low density lipoprotein (OX-LDL);  Lung cancer;  Arteriosclerotic disease    多年来世界各国的科学家们在研究心血管疾病时对人体内胆固醇（CH）载体血浆内低密度脂蛋白（LDL

8、）的变化进行了大量详细的研究，并发现了氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）导致血管损伤，诱发动脉粥样硬化性疾病发生的事实。但是，对消耗性疾病肿瘤发生发展过程中的低密度脂蛋白和氧化低密度脂蛋白的动态变化以及相互影响却研究甚少。    在本课题的前期工作中发现氧化低密度脂蛋白在肿瘤病人和动脉硬化性血管损伤性病人血液中具有不同变化，为进一步研究不同OX-LDL对人体血管内皮细胞的损伤机理，研究肿瘤患者血浆内OX-LDL和动脉粥样硬化病人OX-LDL构成的特异性变化，本实验以肺癌病人和包括糖尿病的血管损伤性病人为对象，对上述各种疾病发生发展过程中的低密度脂蛋白、氧化低密度脂蛋

9、白以及超氧化物歧化酶的变化进行了研究。同时，我们还应用薄层层析技术对上述各种疾病的血浆内氧化脂质进行了分析。1  材料与仪器1.1   试剂-LPO由日本协和株式会社提供，SOD试剂盒由北京北方生物技术研究所提供。1.2  仪器薄层层析板（美国Sigma公司）,超低温冰箱（日本三洋SIM-F124），高速离心机（德国Heraeus STRATOS HAS 15.94型），超速离心机（瑞士Centrikon T-1055型），层析用自动部分收集器HELIRAC（瑞士LKB公司）。2  方法2.1  分组以临床上经过各种检查确定临床诊断的

10、肺癌患者和包括糖尿病的血管损伤性疾病患者作为研究对象，正常对照选择了健康、体检证明肝功能、肾功能、胸部X线及血尿常规均正常的20名大学生自愿者。分组如下：肺癌组16例，男9例，女7例，年龄为4268岁，平均51岁；血管损伤组12例，男9例，女3例，平均年龄4772岁，平均56岁；正常组20例，男10例，女10例，年龄2124岁，平均年龄22岁。2.2   标本制备每人清晨空腹采血16 ml加入乙二胺四乙酸（终端浓度为0.05 mmol/L）抗凝、抗氧化，以3 500 r/min离心提取血浆，在冰箱0条件下保存备用。用哈贝尔的重层超速离心分离法，以40 000 r/min离心

11、26 h分离血浆内低密度（d=1.0631.18），以40 000 r/min离心28 h分离血浆内高密度脂蛋白(d=1.181.21)。     10-08-31 08:43:00     编辑：studa202.3  血浆内LPO的测定八木别法测定各组血浆的低密度脂蛋白内过氧化脂蛋白含量。2.4   血浆内SOD活性测定用放射免疫法测定各组血浆内超氧化物歧化酶(SOD)的活性。2.5   标本中各种脂类的薄层层析取标本0.8 ml（0.6 ml血浆+0.2 ml

12、蒸馏水）加甲醇2 ml，加三氯甲烷1 ml混匀，加醋酸2滴混匀后再加入三氯甲烷1 ml，加蒸馏水1 ml混匀，高速离心2 000 rmin，10 min。吸取下层在真空泵内连续吸引干燥812 h。展开液由石油乙醚75 ml+乙醚25 ml+乙酸1 ml组成。薄层层析板先用三氯甲烷洗1次，在自然条件下干燥12 h后，在层析板上取一边打5个格，用三氯甲烷100 l溶解脂质在薄层上滴注，以能吸干为度。将层析板放入含有展开液的展开槽中展开，展开至层析板顶部23 cm时停止展开，层析板进行显影。析板放入显影槽（碘化）510 min后取出进行摄影。初步判定各组氧化脂质的峰线位置和大致浓度。2.6 

13、;  统计学处理应用SPSS11.5统计软件，数据以±s表示，结果处理使用配对t检验。3  结果3.1   血浆内LPO测定如表1所示，正常对照组与血管损伤组比较P<0.01，与肺癌组比较P<0.05，均具有统计学意义。氧化低密度脂蛋白含量在肺癌组与血管病变组之间有测定数值的变化，但无统计学差异。表1  血管损伤组和肺癌组血浆内LPO测定值（略）3.2   血浆内SOD活性测定如表2所示，血管损伤组与正常对照组比较有明显差别，具有统计学意义（P<0.05），说明在血管损伤性疾病发生时血浆内SOD值

14、有明显上升趋势。表2  血管损伤组和肺癌组血浆内SOD测定值（略）3.3   薄层层析结果 正常对照组血浆、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和极高密度脂蛋白的薄层层析板中几乎看不到任何氧化物质，而肺癌组和血管损伤组的低密度脂蛋白与正常组有不同分布，可以初步推测在血管病变性疾病和肺癌发生过程中出现的氧化低密度脂蛋白可能来自不同的物质。4  讨论    过氧化低密度脂蛋白是低密度脂蛋白(LDL)被氧化修饰后的产物。当体内产生过多活性氧自由基时，LDL氧化修饰作用增强，极易转化为氧化低密度脂蛋白，它是动脉粥样硬

15、化最重要的致病因素1，2。同时，自由基也是导致癌症发生的重要因素之一，它既可直接造成DNA链损伤致突变。也可通过脂质过氧化作用影响DNA，引起基因DNA变化，合成出无活力或功能缺陷的SOD，随着SOD活性降低，引起自由基进一步堆积，最终诱发癌症3。在本次实验中肺癌患者组SOD活性出现增高，推测其原因可能为代偿性。本实验肺癌患者与血管损伤组和正常人比较，其细胞氧化低密度脂蛋白代谢特征表现为代谢率增强，即单位时间内细胞的氧化低密度脂蛋白结合、内吞和降解量均显著增加。提示过氧化低密度脂蛋白的增加可能是肿瘤致病或增强致病因素之一。    脂质是肺的重要成分,肺组织具有合成

16、与分解血脂及脂蛋白功能,肺泡型上皮细胞及肺毛细血管内皮细胞内和表面具有脂蛋白脂酶,提示肺脏具强大脂质代谢能力。肺癌时肿瘤细胞增生活跃并伴毛细血管的增多使肺的脂质代谢异常活跃。同时肿瘤组织的某些代谢产物和分泌的某些具有生物活性的物质可直接或间接地影响细胞膜上感受器功能活性,从而形成肺癌时所特有的血脂及脂蛋白氧化修饰4，5。薄层层析实验表明，肺癌和血管损伤性疾病形成过程中过氧化低密度脂蛋白具有不同特异性变化，因此推测两种氧化低密度脂蛋白的产生来源可能不同，具体机制在进一步研究中。【参考文献】  1尹学哲，上村継道，金沢武道過酸化LDLPlatelet Endothelial Cell Adhesion Molecule-1（PECAM-1）発現及影響中西医结合动脉硬化症·血拴症·一次预防（曲直部壽夫，陣紹武監修、都島基夫，金恩源編集），1996：172.2Bonnefont-Rousselot D，Therond P，Beaudeux JL，et al.High density lipoprotein(HDL) and the oxidative hypothesis of atherosckerosisJ.Clinica