四环素类药物残留分析技术——测定高效液相色谱法（二）

1、四环素类药物残留分析技术测定高效液相色谱法（二） 2)荧光检测器(fluorescence detection，fld) 在一定ph范围内，tcs及其部分衍生物可以产生荧光，因此可用荧光测定。tcs与一些金属离子有很强的整合能力，并能生成有色整合物，其中以铀、锌、铜、铝、镁等离子的整合物尤为稳定，可用于鉴别、测定tcs的含量。一些整合物在一定ph条件下的荧光强度增加，为荧光测定提供了基础。 lu等报道了采纳hplc-fld同时测定otc、dc、tc和ctc的办法。用反相c18色谱柱分别，甲醇-缓冲液(含乙二胺四乙酸二钠和，ph8.1)作流淌相，梯度洗脱，fld在激发波长(ex)380nm，放射

2、波长(em)532nm测定。otc、dctc和ctc的lod分离为0.1ug/l、0.5ug/l、0.3g/l和0.4ug/l。spisso等建立了检测牛奶中otc、tc、ctc的hplc-fld办法。以symmetry shield tm rp8色谱柱(150mm×4.6mmi.d，3.5m)分别，流淌相为0.01mol/l和，流速为1ml/min，梯度洗脱，用醋酸镁在中的柱后衍生增加荧光，fld检测，ex=385nm，em=500nm。办法的回收率为61%115%，cv为5%15%；测得牛奶中otc、tc、ctc的lod为535g/kg，loq为50ug/kg，cca分离为109

3、g/kg、108g/kg和124g/kg，cc分离为119g/kg、117g/kg和161g/kg。schneider等对鸡肉中otc、ctc、tc举行hplc-fld检测。以0.1mol/l丙二酸盐(含50mmol/l mg2+，浓氨水调ph6.5)和为流淌相，梯度洗脱，流速为0.5ml/min，xdb-苯基色谱柱(3.0mm×150mm，3.5m)分别，fld检测，ex=375nm，em=535nm。办法回收率为63%95%，otc、tc、ctc的lod分离为1ng/g、1.5ng/g和5ng/g，在无需柱后衍生的前提下该办法可获得较强的荧光。peres等建立了hplc-fld办

4、法检测蜂蜜中的otc、tc和ctc用na2edta-mclvaine缓冲溶液提取，spe净化，xdb-c8色谱柱(4.6mm×250mm，5um)分别，流淌相a为0.075mol/l二水乙酸钠、0.035mol/l二水氯化钙、0.025mol/l na2edta，用5mol/l调ph6.5，流淌相b为甲醇-水(95+5，v/v)，梯度洗脱，fld检测，ex=390nm，em=512nm。办法的回收率为86%111%，cv低于11%；l0d和loq分离为8ug/kg和25g/kg。 3)化学发光检测器(chemiluminescence detection，cld) cld是近年来进展

5、起来的一种迅速、敏捷的新型检测器，具有设备容易、价廉、线性范围宽等优点。其原理是分别组分从色谱柱中洗脱出来后，与适当的化学发光试剂混合，引起化学反应，导致发光物质产生辐射，其光强度与该物质的浓度成正比。cld不需要光源，也不需要复杂的光学系统，只要有恒流泵，将化学发光试剂以一定的流速泵入混合器中，使之与柱流出物快速而又匀称地混合产生化学发光，通过光电倍增管将光信号变成电信号，就可举行检测。 张琰图等基于tcs能够剧烈增敏通过恒电流电解办法在线电生bro和鲁米诺之间产生的化学发光，建立了hplc分别，柱后化学发光检测牛奶中tc、otc、ctc和dc的办法。精确移取5ml鲜奶于10ml容量瓶中，加

6、入乙腈混匀后静置10min，然后10000r/min离心，将上清液移入25ml容量瓶中用乙腈洗涤定容。以nucleosilrp-c18(250mm×4.6mm，i.d，5m)为色谱柱，0.05mol/l(ph2.5)-乙腈(30+70，v/v)为流淌相，流速1.2ml/min，柱温25。将一根长为10cm的无色玻璃管(内径为2mm，外径为3.5mm)加工缠绕成直径为0.8cm的平面螺旋管作为检测流通池并将其放置在光电倍增管前面，用法恒流泵分离将电解液和鲁米诺溶液以2.0ml/min的流速通过相应的管道泵入分析系统，同时开启恒电位仪(控制电解电流为0.2 ma)和高压泵，待基线平稳后，

7、用进样器将20l的tc、otc、ctc、dc标准液(或样品溶液)注入色谱柱，经色谱柱分别后与鲁米诺及电生的bro-溶液混合，在流通池中产生化学发光，记录色谱图，按照色谱峰高举行定量分析。该办法lod为0.0020.008g/ml，回收率为90%115%，rsd为2.0%3.6%。morandi等开发一种基于铕敏化发光检测的hplc办法，用于测定牛奶中的tc残留。镧系元素阳离子的电子放射性能被用作铕(ii)络合tc指纹。提取和纯化过程的优化提供了一种容易和便利的途径来制备稳定的tc样品，可以平安地反抗冷冻循环。该办法首次用于牛奶中tc的测定，各项性能指标满足欧盟命令2002/657/ec的要求，

8、假符合率(错误)低于5%。 wan等利用tcs可增加高锰酸钾亚硫酸钠-b-环糊精体系在磷酸溶液中的化学发光强度，建立了蜂蜜中otc、tc和mtc的hplc-cld办法。以和溶液提取，xad-2树脂柱净化，xdb-c18色谱柱分别，乙腈和0.001mol/l磷酸为流淌相，cld检测。该办法用于蜂蜜中tcs的分析，线性为0.51000.0ng/ml，lod为0.95.0ng/ml，日内rsd为3.1%7.4%，日间rsd为2.2%8.6%。 valverde等报道了采纳hplc-cld测定水样中tc、otc、ctc、dmct、dc和mcc的分析办法。cld测定基于在硫酸介质中光照耀tc会增加铈(i

9、v)-罗丹明b系统的化学发光。采纳aquasil-c18色谱柱分别，乙腈和0.1mol/l磷酸缓冲液梯度洗脱，用法光反应器组成的pfa管式反应器线圈和8w氙气灯举行光衍生化。办法日内rsd小于10%，lod在0.120.34g/l之间。 4)电化学检测器(electrochemical detection，ecd) ecd主要有安培、极谱、库仑、电位、电导等检测器，属挑选性检测器，可检测具有电活性的化合物。目前它已在各种无机和有机阴阳离子、生物组织和体液的代谢物、食品添加剂、环境污染物、生化制品、农药及医药等的测定中获得了广泛的应用。zhao等采纳hplc-库仑电极阵列法检测牛奶中的otc、tc、ctc、mtc和dc。牛奶样品用1mol/l盐酸调ph4.0，超声5min，8000g离心10min，取上清液，30ml正已烷萃取2次，取下层的水相。有机相用2ml水洗涤1次，水相真空旋蒸低于10ml，甲醇定容至10ml，0.22um滤膜过滤，取20l进样，hplc-库仑电极阵列法分析。色谱柱为c18反相柱(150mm×4mmi.d，5um)，流淌相为二水磷酸二氢钠溶液(ph2.2，0.05mol/l)-乙腈(78+22，v/v)，流速为1ml/min；四电极的点位分离为400mv、660mv