提取分离鉴定的方法和技术3剖析

1、商洛职业技术学院教案课程名称天然药物化学专业班级06药学授课教师顾晓燕授课类型讲授学时2章节题目第二节 天然药物化学成分分离、精制、鉴定的方法与技术（二）目的 与 要求掌握吸附色谱法、分配色谱法的分离原理、操作技术及在天然药物化学中的应用重点与难点重点：原理难点:操作方法方法与手段讲授使用教材及参考书天然药物化学主编:吴剑锋 出版社:人民卫生出版社天然药物化学学习指导主编:吴剑锋 出版社:人民卫生出版社教案续页教学 内 容辅助手段 时间分配第二节天然药物化学成分分离、精制、鉴定的方法与技术（二）五、色谱法（一）吸附色谱法以固一液吸附用的最多，并有物理吸附（硅胶、氧化铝、活性炭为吸附剂进行的吸附

2、色谱）、化学吸附（黄酮等酚酸性物质被氧化铝吸附、生物碱被酸性硅胶吸附等）及半化学吸附（聚酰胺与黄酮类、醌类等酚性化合物之间的氢键吸附，吸附力较弱，介于物理吸附与化学吸附之间）之分。1、基本原理物理吸附过程一般无选择性，但吸附强弱大体遵循“相似者易于吸附”的经验规律。被分离的物质与吸附剂、洗脱剂共同构成吸附层析的三要素，彼此紧密相连。适用于中等分子量的脂溶性物质的分离。2、常用的极性吸附剂：（1）硅胶：显微酸性，适于分离酸性和中性化合物，分离生物碱时需在流动相中加入适量的有机碱；（2）氧化铝：有三种类型，碱性中性酸性，适于分离碱性或中性的亲脂性成分，尤其对生物碱的分离应用的最多。 不且用于分离有

3、机酸、酚性等酸性成分。（3）聚酰胺：一般认为系通过分子中的酰胺基与酚类、黄酮类化合物的酚羟基，或酰胺键上的游离胺基与醌类、脂肪酸上的羰基形成氢键缔合而产生吸附。吸附强弱取决于各种化合物与之形成氢键缔合的能力。吸附能力的强弱，通常化合物在水溶剂中大致有以下规律：形成氢键的基团数目越多，则能力越强。成键位置对吸附能力也有影响。易形成分子内氢键者，其在聚酰胺上的吸附响应减弱。分子中芳香化程度高这，贝帔附性增强；反之，贝U减弱。一般情况下，各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱致强的大致顺序如下： 水一甲醇一乙醇一氢氧化钠水溶液一甲酰胺一二甲基甲酰胺一尿素水溶液其中，最常应用的洗脱系统是：乙醇一水应用于特

4、别适合于酚类、黄酮类化合物的制备和分离。 脱鞣质处理对 生物碱、萜类、甾类、糖类、氨基酸等其他极性与非极性化合物的分离也有着 广泛的用途。以上均为极性吸附剂，故有以下特点： 被分离物质极性越强，吸附力越强。强极性溶质将优先被吸附。 溶剂极性越弱，则吸附剂对溶质的吸附能力越强。随溶剂极性的增强，则吸附剂对溶质的吸附力将减弱。 当加入极性较强的溶剂后，先前被硅胶或氧化铝所吸附的溶质可被置换而洗 脱出来。常用的非极性吸附剂：活性炭。对非极性物质具有较强的亲和力， 在水中对溶质表现出强的吸附能力。从活性炭上洗脱被吸附的物质时，溶剂的极性越小， 洗脱能力越强。（4）活性炭：为一种非极性吸附剂，具有较强的

5、吸附能力，在水中吸附能力最强，在有机溶剂中吸附能力较弱。对极性基团多的吸附力强于极性基团少的化合物，对芳香族化合物吸附力大于脂肪族化合物；对分子量大的化合物吸附力大于分子 量小的化合物。适用于分离水溶性成分如氨基酸、糖类即某些苷类等。3、 溶剂 溶剂的极性可大体根据介电常数的大小来判断。 介电常数越大，则 极性越大。一般溶剂的介电常数按下列顺序增大： 环己烷（1.88 ），苯（2.29）， 无水乙醚（4.47 ），氯仿（5.20），乙酸乙酯（6.11），乙醇（26.0），甲醇（31.2）， 水（81.0）4、被分离物质一般化合物的极性按下列官能团的顺序增强：CH2- CH, CH2=CH， O

6、CH3 COOR>C=O CHQ NH2 OHCOOH5、操作方式（1）薄层色谱法：具体操作步骤如下： 制板 点样 展开 显色 测定比移值（2）柱色谱法具体操作如下： 装柱 加样 洗脱吸附柱色谱法用于物质的分离，以硅胶或氧化铝为吸附剂进行柱色谱分离 时应注意：（1）尽可能选用极性小的溶剂装柱和溶解样品，或用极性稍大的溶剂溶解样品后，以少量吸附剂拌匀挥干，上柱。（2）一般以TLC展开时使组分Rf值达到0.20.3的溶剂系统作为 最佳溶剂系统进行洗脱。实践中多用混合的有机溶剂系统。（3）为避免化学吸附，酸性物质宜用硅胶、碱性物质宜用氧化铝作 为吸附剂进行分离。通常在分离酸性（或碱性）物质时，

7、洗脱溶剂中常加入适 量的醋酸（或氨、吡啶、二乙胺），以防止拖尾、使斑点集中。（二）分配色谱法利用混合物中各成分在互不相溶的两相溶剂中分配系数的不同来达到分离 的色谱分离方法。1、基本原理混合物中各成分在互不相溶的两相溶剂中分配系数的不同来达到分离2、支持剂常用的有硅胶、硅藻土、纤维素粉和滤纸等3、溶剂系统一般为复合溶剂4、被分离物质一般在正相分配色谱中，因移动相极性较固定相极性小，故被分离物质中极性小的成分随移动相迁移速度较快。5、操作方式（1）纸色谱（PPC：纸色谱的原理与液一液萃取法基本相同。原理：分配原理支持剂：纤维素固定相：水流动相：水饱和的有机溶剂 Rf值：化合物极性 越小，Rf值越

8、大；反之，化合物极性越大，Rf值越小。应用：用作微量分析， 特别适合于亲水性较强的成分，其层析效果往往比吸附薄层色谱效果好。但纸 层析一般需要较长的时间。具体操作步骤如下： 点样 展开 显色 测定比移值（2）液一液分配薄层色谱法：液一液分配色谱法也可在硅胶薄层色谱上进行。因此，液一液分配柱色谱 的最佳分离条件可以根据相应的薄层色谱结果（正相柱用正相薄层色谱，反相 柱用反相薄层色谱）进行选定。（3）液一液分配柱色谱：原理：分配原理支持剂：硅胶、硅藻土、纤维素粉等正相分配色谱： 固定相：水、缓冲溶液流动相：固定相饱和的氯仿、乙酸乙酯、丁醇等弱极性有机溶剂洗脱顺序：化合物极性越小，越先出柱；反之，化

9、合物极性越大，越后 出柱。应用：通常用于分离水溶性或极性较大的成分， 如生物碱、苷类、糖类、 有机酸等化合物。反相分配色谱： 固定相：石蜡油、化学键合固定相流动相：固定相饱和的水或甲醇等强极性有机溶剂洗脱顺序：化合物极性越大，越先出柱；反之，化合物极性越小，越后 出柱。应用：适合于分离脂溶性化合物，如高级脂肪酸、油脂、游离甾体等。 常用反相硅胶薄层色谱及柱色谱的填料是普通硅胶经下列方式进行化学修饰， 键合上长度不同的烃基（R）、形成亲油表面而成。其中以硅烷化键合型最为常 用，其根据烃基（R）长度（一C2H5 C8H17 C18H37）分别命名为：RF 2、 RF & RF18。三者亲脂

10、性强弱顺序如下： RF18> RP 8> RP 2。键合固定相的作用并非只是分配，也有一定的吸附作用。教案末页教学小结通过教学学生很好的掌握了吸附色谱法、 分配色谱法的分离原理、操作技术及在天然药物化学中的应用思考题 或作业题1色谱法的基本原理是什么？2聚酰胺吸附力与哪些因素有关。3、硅胶吸附柱色谱常用的洗脱剂类型是A以水为主B酸水C碱水D以醇为主E以亲脂性溶剂为主4、硅胶CMC!层色谱中CM（是指A指示剂B显色剂C络合剂D吸附剂E粘合剂5、卜夕列基团极性最大的是A醛基B酮基C酯基D酚羟基E甲氧基6、聚酰胺在何种溶剂中对黄酮类化合物吸附最强A水B丙酮C乙醇D氢氧化钠水溶液E甲醇7、正相分配色谱常用的固定相为A氯仿B甲醇C水D正丁醇E乙醇8影响硅胶吸附能力的因素有A硅胶的含水量B洗脱剂的极性大小C被分离成分的极性大小 D洗脱 剂的酸碱性大小E被分离成分的酸碱性大小9、硅胶薄板活化最适宜的温度和时间是A100 C 60min B100-150 C 60min C 100-110 C 30min D 110