近三年某院分离肺炎链球菌的耐药性监测

1、近三年某院分离肺炎链球菌的耐药性监测肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae) 是一种球状的革兰氏阳性菌， 是链球菌属下的一种细菌。 作为一种重要的人类致 病菌，肺炎链球菌于 1880 年已被发现能引起肺炎，亦是体液免 疫研究的对象。 肺炎链球菌最初名字是肺炎双球菌， 因它在革兰 氏染色中的特征 1 。1974 年，研究发现它在液体媒介中呈链状 的生长，而被重新命名为肺炎链球菌。因它是肺炎的致病因子， 一般都会称它为肺炎球菌。肺炎链球菌亦会导致不同种类的疾 病，包括有急性鼻窦炎、中耳炎、脑膜炎、骨髓炎、脓毒性关节 炎、心内膜炎、腹膜炎、心囊炎、蜂窝组织炎及脑脓肿。近年来随着

2、青霉素耐药肺炎链球菌及多重耐药菌株的增加 2-4 ，给临床治疗带来一定的困难 5 。为更好的指导临床用药， 为临床经验用药提供实验室依据， 了解该菌在我院的分布及耐药 情况，对2010年1月一一2012年12月临床送检标本分离的肺 炎链球菌药敏结果进行回顾性分析。1 材料与方法1.1 菌株来源及培养方法 81 株肺炎链球菌均自本院 2010 年1 月2012 年 12 月住院患者及门急诊患者。 包括痰液、 血液、 脑脊液等。标本接种血平板和巧克力平板，放入5%C0培养箱，35C, 24h培养。对于疑似肺炎链球菌的菌株，转血平板，加奥 普脱欣纸片筛选，敏感的菌株进一步做鉴定和药敏试验。1.2 仪

3、器与试剂标本送到实验室后，按全国临床检验操作 规程（第 3 版）要求处理， 经培养获得单个菌落后， 经初筛后， 疑似肺炎链球菌的菌落增菌后， 用 Vitek-2 全自动细菌鉴定仪及 其配套的鉴定卡和药敏卡进行鉴定及药敏试验， 结果判定按照美 国临床实验室标准化委员会（NCCLS推荐的方案和标准，以敏 感（S）、中介（I ）、耐药（R）报告结果。抗菌药物包括阿莫 西林 /克拉维酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉宁、万古霉素、 左氧氟沙星、氧氟沙星、氨苄西林 / 舒巴坦、泰利霉素、头孢曲 松氯霉素、厄他培南、头孢呋辛钠、亚胺培南、喹努普汀/ 达福普汀、头抱噻肟、美罗培南、青霉素 G复方新诺明、红霉素、

4、 四环素。1.3 统计软件药敏结果的导出采用东方旗云软件，药敏结果 分析采用 Excel2003 软件。2结果2.1 肺炎链球菌临床菌株的分布 81 株肺炎链球菌分别来自 呼吸道、分泌物、脓液、血液等标本，其中以痰液标本检出率最 高，其次为分泌物，见表 1。2.2 药敏结果本次试验分离出的 81 株肺炎链球菌对抗菌药 物的敏感率最高的是阿莫西林 / 克拉维酸、 利奈唑胺、 莫西沙星、 替考拉宁、万古霉素的敏感率均为 100%；左氧氟沙星、氧氟沙 星、氨苄西林 / 舒巴坦、泰利霉素、头抱曲松、氯霉素、厄他培 南替、敏感率均大于 90%.头抱呋辛钠、亚胺培南、喹努普汀 / 达 福普汀、头孢噻肟的敏

5、感率在 80%-90%之间；美罗培南的敏感率 为 61.54%；青霉素的敏感率为 55.56%；复方新诺明的敏感率为 40.00%；红霉素的敏感率为 23.68%；四环素的敏感率为 21.74%。 具体药敏检测结果，见表 2。3 讨论 肺炎链球菌是一种普遍导致成人感染细菌性脑膜炎的病菌， 亦是首两种在中耳炎发现的分离株。 由肺炎链球菌引致的肺炎是 在年幼或年长的人中最经常出现。肺炎链球菌与同是 Y溶血性 的草绿色链球菌是有所分别，因肺炎链球菌是对奥普托欣较敏 感，所以能透过奥普托辛测试验出它们的分别。 肺炎链球菌的粒 状体是有荚膜包裹及呈革兰氏阳性， 与草绿色链球菌在革兰氏染 色有型态上的不同

6、（肺炎链球菌染色型态的是呈针刺状）。它有 着一个多糖荚膜，是一种重要的致病因子 6 。本次试验分离出的 81 株肺炎链球菌对抗菌药物的敏感率最 高的是阿莫西林 / 克拉维酸、利奈唑胺、莫西沙星、替考拉宁、 万古霉素的敏感率均为 100%；左氧氟沙星、氧氟沙星、氨苄西 林 / 舒巴坦、泰利霉素、头孢曲松、氯霉素、厄他培南替敏感率 均大于 90%.头孢呋辛钠、亚胺培南、喹努普汀 / 达福普汀、头孢 噻肟的敏感率在80%-90%之间；美罗培南 G的敏感率为61.54%; 青霉素的敏感率为 55.56%；复方新诺明的敏感率为 40.00%；红 霉素的敏感率为 23.68%；四环素的敏感率为 21.74

7、%。根据药敏结果，对于肺炎链球菌的感染首选阿莫西林 / 克拉 维酸和莫西沙星，虽然利奈唑胺、替考拉宁、万古霉素的敏感率 也为 100%，但是其价格昂贵，而且为以后其他细菌的感染以及 多重耐药菌的感染用药留下余地。次选左氧氟沙星、氧氟沙星、 氨苄西林 / 舒巴坦、头孢曲松、厄他培南替等。肺炎链球菌的常规检测费时费力， 目前快速检测的方向之一 就是分子诊断。 肺炎链球菌的检测技术很多， 分为基于核酸水平 的检测技术、 基因芯片技术以及其他检测技术。 而基因芯片这一 类检测技术尚处研究阶段并不成熟 7 。因此，应用最广的为基 于核酸水平的PCF定性检测技术。当前我国对细菌DNA的检测，主要是通过提取

8、DNA再进行PCR礙胶电泳（初筛），对于阳性 结果采用实时荧光 PCR、Southern 杂交或测序方法进行确证， 或 对提取的DNA直接采用实时荧光PCR方法检测。这些常见检测基 因的分子生物学方法目前比较成熟，但不可避免具有消耗昂贵， 方法耗时较长等缺点。随着分子生物学理论和技术的快速发展， 以聚合酶链式反应（PCR技术为基础的新型鉴定技术已日益得 到广泛应用。恒温基因扩增方法（ LAMP， Loop-mediated Isothermal Amplification ）是在PCR基础上创建的一种较理想 的手段，其特点是：只需一恒定温度就能扩增反应，不需要特 殊试剂，不需要预先进行双链 DNA勺变性；高特异性：采用六 个区段，四条引物，扩增特异性高，可以根据是否扩增来判断目 标基因的存在与否；快速、高效扩增：扩增在不到1h即可完成，且产率高；灵敏度高：扩增模板可达10拷贝或更少；鉴定简便：在核酸大量合成时，从 dNTP析出的焦磷酸根离子与 反应溶液中的Mg2+吉合，产生副产物-焦磷酸镁沉淀，可用肉眼 观察判断扩增与否；总体而言，LAMFfe是一种简便、快速、高特异的基因扩增法 8-10 。而实时荧光LAMP是在在LAMP基础