胰蛋白酶的活力的测定 ppt课件

1、胰蛋白酶的活力的测定胰蛋白酶的活力的测定一、酶的化学本质一、酶的化学本质 概念概念 是一类生物催化剂。是一类生物催化剂。化学本质化学本质 绝大多数酶是蛋白质，某些绝大多数酶是蛋白质，某些RNARNA或或DNADNA也具也具有催化活性。有催化活性。二、酶的化学组成二、酶的化学组成蛋白质的酶单纯蛋白质的酶全酶酶蛋白apoenzyme辅助因子cofactor辅助因子辅助因子 辅基辅基/辅酶辅酶小分子有机化合物、金属离子，直接参小分子有机化合物、金属离子，直接参与反响。直接对电子、原子或某些化学集团起传送作用。与反响。直接对电子、原子或某些化学集团起传送作用。酶蛋白酶蛋白 决议反响特异性专注性。决议反

2、响特异性专注性。 一种辅助因子可与多种酶蛋白结合；一种酶蛋白只能与一一种辅助因子可与多种酶蛋白结合；一种酶蛋白只能与一种辅助因子结合。种辅助因子结合。三、酶的活性中心三、酶的活性中心 必需基团必需基团 酶分子中与催化作用直接相关、不可酶分子中与催化作用直接相关、不可短少的化学基团。短少的化学基团。 活性中心活性中心 酶分子中必需基团相对集中，构成一酶分子中必需基团相对集中，构成一定空间构造区域，与催化作用直接相关。定空间构造区域，与催化作用直接相关。 活性中心结合部位 底物催化部位底物的键在此处被打断或构成新的键用于判别和确定酶活型中心的主要方法：用于判别和确定酶活型中心的主要方法：1、专注性

3、研讨、专注性研讨 经过研讨酶的专注性底物的构造特点，经过研讨酶的专注性底物的构造特点，来判别来判别 和确定活性中心的构造特点。和确定活性中心的构造特点。2、酶侧链基团的化学修饰法、酶侧链基团的化学修饰法 酶分子中可以被化学修酶分子中可以被化学修饰的基团饰的基团 很多，如巯基、羟基、咪唑基、氨基很多，如巯基、羟基、咪唑基、氨基及羧基及羧基 等。等。四、酶的命名与分类四、酶的命名与分类 习惯命名法习惯命名法 按催化反响类型分类按催化反响类型分类 脱氢酶、脱羧酶、衔接酶、脱氢酶、脱羧酶、衔接酶、聚合酶等。聚合酶等。 按组织来源及性质分类按组织来源及性质分类 胃蛋白酶胃蛋白酶/胰蛋白酶，酸胰蛋白酶，酸

4、性性/碱性磷酸酶等。碱性磷酸酶等。 国际系统分类国际系统分类 酶原与酶原激活酶原与酶原激活 无活性的酶前身物称酶原。由无活性酶原无活性的酶前身物称酶原。由无活性酶原转变为有活性酶的过程称酶原激活。转变为有活性酶的过程称酶原激活。 同工酶同工酶 分子构造不同、理化性质也不同，但催化同一化分子构造不同、理化性质也不同，但催化同一化学反响的一组酶，如乳酸脱氢酶学反响的一组酶，如乳酸脱氢酶LDHLDH。 别位酶别位酶 多亚基组成，其中有催化亚基、有调理亚基，小多亚基组成，其中有催化亚基、有调理亚基，小分子化合物结合调理亚基后分子构象改动，引起催化活性改动。分子化合物结合调理亚基后分子构象改动，引起催化

5、活性改动。五、酶的活力测定五、酶的活力测定 酶活力enzyme activity，是指酶催化一定化学反响的才干。 酶活力单位国际单位 规范形状下，每分钟使一微克分子作用物发生转变的酶量。人们普遍 采用是习惯用法，如a-淀粉酶，可用每小时催化1克可溶性淀粉所需求的酶量来表示。 胰蛋白酶活力单位的定义规定为：以胰蛋白酶活力单位的定义规定为：以BAEE为底物反响液为底物反响液pH8.0，25，反响体积，反响体积3.0ml，光径，光径1厘米的条件下，测定厘米的条件下，测定 A253，每分，每分钟使钟使 A253添加添加0.001，反响液中所参与的酶量为一，反响液中所参与的酶量为一BAEE单位。单位。

6、初速度初速度 研讨酶反响的动力学以酶促反响的初速度为研讨酶反响的动力学以酶促反响的初速度为准准酶活力与酶反响速度 时间02468101214161805101520时间产物量系列1以N-苯甲酰-L精氨酸乙酯为底物，用紫外吸收法进展测定的原理是：N苯甲酰L精氨酸乙酯英文缩写为BAEE在波长253nm下的紫外吸收远远弱于苯甲酰L精氨酸英文缩写为BA。在胰蛋白酶的催化下，随着酯键的水解，苯甲酰L精氨酸逐渐增多，反响体系的紫外吸收宜随之相应添加。操作方法操作方法 取取2 2个光程为个光程为1 1厘米的带盖石英比色杯，厘米的带盖石英比色杯，分别参与分别参与2525予热过的予热过的2.8ml2.8ml底物溶液。向一只比底物溶液。向一只比色杯中参与色杯中参与0.2ml 0.001mol/L HCl0.2ml 0.001mol/L HCl，作为空白，校，作为空白，校正仪器的正仪器的253nm253nm处光吸收零点。再在另一比色杯中处光吸收零点。再在另一比色杯中参与参与0.2ml0.2ml待测酶液，立刻混匀并记时，每半分钟待测酶液，立刻混匀并记时，每半分钟读数一次，共读读数一次，共读3434分钟。分钟。 绘制酶促反响动力学曲线，从曲线上求出绘制酶促反响动力学曲线，从曲线上求出反响起始点吸