产黄青霉生长曲线的测定(精)

1、产黄青霉生长曲线的测定一、实验目的1、掌握测定生长繁殖的基本原理与几种方法。2、掌握微生物的典型生长曲线。二、实验原理测定微生物生长繁殖的方法主要可分为两大类。 （一）测生 长量法，适用于一切微生物。1、直接法：包括测体积法、称干重 法等。2、间接法：包括比浊法、生理指标法。（二）计量繁殖数法，只适用于单细胞状态的微生物或丝状 微生物所产生的孢子。1、直接法：比例记数法、血球计数板法。2、间接法：液体稀释法、平板菌落计数法等。产黄青霉是工业上用于发酵生产青霉素的重要丝状真菌， 其 发酵产物在临床应用和医药工业中占有极其重要的地位。菌丝量是菌体细胞内部生长信息最直接的反映， 是微生物发 酵过程中

2、重要的生化参数。青霉素发酵过程中菌体量的测定，对 于其动力学研究和建模控制都具有很重要的意义。根据菌丝量可 以确定合适的补料量、供氧量和合适的生长环境， 以及合适的提 取时机， 从而有利于大量生产抗生素。当少量纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中后，在适宜的温度、通气等条件下，它们的群体就会有规律的生长起 来。如果以细胞数目的对数值作纵坐标，以培养时间为横坐标， 就可以画出一条有规律的曲线，这就是微生物的典型生长曲线根据微生物的生长速率常数，即每小时的分裂代数的不同哦，一般可把典型生长曲线粗分为延滞期、指数期、稳定期和衰亡期 等四个时期。三、实验材料1、菌种产黄青霉(Pencillium

3、 chrysogenum)。2、培养基发酵培养基各组分：乳糖22.5g,葡萄糖7.5g，醋酸铵3.0g, 乳酸铵5.0g，Na2SO4 0.5g，MgSO4?7H2O 0.25g，FeSO4?7H2O 0.1g，CuSO4?5H2O 0.005g，MnSO4?7H2O 0.02g，CaCl2?2H2O 0.05g，ZnSO4?7H2O 0.02g,苯乙酸1.0g,蒸馏水1000ml,pH 6.5,121C灭菌20min。注意：微量元素配成母液,按需要加入,苯乙酸用乙醇溶解 后再加入。3、器材 超净台,培养箱,天平,干燥箱玻璃漏斗,定量滤纸等。四实验方法与步骤1.离心法将待测培养液放入离心管中,

4、 用清水离心洗涤1-5次后(3000rpm,10min),进行干燥。干燥温度可采用100度，105度或红 外线烘干,也可在较低温度下(80或40度)真空干燥。然后称重。2.过滤法丝状真菌可采用滤纸过滤，而细菌可采用醋酸纤维素膜等滤膜过 滤。过滤后，细胞可用少量水洗涤，然后在40度下真空干燥，称量 干重。五. 实验内容1每个大组接种三个培养基，并设一个空白对照瓶。2.按照不同的培养时间，6h,12h,36h,72h,144h,168h从三角瓶中取样，称量发酵液菌丝量，并测量发酵液的PH值。六. 实验结果60.04655120.05915 :360.1077720.08251440.1059 :1680.12846123672144168七. 思考题次生代谢产物的大量积累发生在那个时期？根据微生物生长繁殖的 规律，采用哪些措施可使次生代谢产物积累更多？答：稳定期1.补加前体类似物2.加诱导物3.防止碳代谢阻遏或抑制