BioRad分子生物学研究平台

1、分子生物学研究平台（整体解决方案) 本研究平台主要由两部分组成：蛋白转印系统与基因表达研究平台。各系统主要实验流程与配置如下：一、蛋白转印系统高灵敏度化学发光成像系统半干转印槽转印槽电泳仪电泳槽分析软件电泳成像与分析转印主要流程与配置（1）电泳槽：Mini-Protean Tetra CellMini Protean Tetra Cell凝胶规格：8.3×7.3cm运行数目：1-4块胶主要用于分离蛋白样品（2）通用电泳仪：PowerPac Universal电流0.01-2.5A，功率1-500W电源，对于高通电泳实验或转印实验，需要高电流电源，电流低实验时间拉长一倍（24cm大胶）

2、输出插孔都是4对并联，可同时对四个同类型的电泳槽进行电泳主要用于提供稳定电压以进行电泳与转印（3）转印槽：Mini Trans-Blot Cell一次能同时转印两块凝胶优点：散热效果好，转印彻底，条件容易控制主要用于长时间的蛋白样品转印（复杂样品）（4）半干转印槽：Mini Trans-Blot Cell优点：转印速度快，可进行不连续转印（适合10-100KD大小的蛋白）主要用于快速的蛋白样品转印（5）高灵敏度化学发光成像系统（ChemiDoc XRS）用途：ChemiDocXRS化学发光成像系统是当前该系列中最先进的化学发光检测系统：可进行Chemiluminescence (化学发光检测）

3、，Fluorescence （荧光检测），Colorimetric detection (光密度成像)，Gel documentation (凝胶成像)高灵敏度高分辨率化学发光荧光成像仪 CCD分辨率：1,392 x 1,040 (H x V) 冷CCD温度：-50 (足够低温，保证检测的灵敏度) 读出噪音：4.5 e-rms 10 MHZ， 4.5 e-rms 10 MHZ 暗电流：0.001 e/p/s 冷却CCD方式：peltier 像素深度：16位（65,535 灰度） 动态范围：>4 OD 动态平场技术： 5% CV （BIO-RAD 专利技术，图像平整，保证精确定量）Bio-

4、Rad图像产品从20042008年，连续5年获得美国Life Science Awards年度最佳图像类产品大奖详情请见：http:/www.the-二、基因表达研究平台核酸的定量与分析满足定量PCR、核酸制备或细胞转染样品的定量检测要求，提供吸收值、浓度和纯度值，确保下游研究工作的顺利开展核酸电泳采用普通琼脂糖凝胶电泳、SSCP、DGGE、CDGE、TTGE和脉冲场电泳等方法，对不同长度和序列的核酸进行鉴别和分离。基因表达研究平台核酸样本制备核酸纯化产品为大小规模的质粒、基因组DNA、RNA和PCR产物等的纯化提供更高效率和产量，同时具有产量和纯度的可重复性PCR扩增进行灵敏、高效的逆转录与

5、扩增，在大动态范围内获得完美的核酸扩增性能荧光定量PCR仪荧光定量PCR方法可以对基因的变化进行准确的定量分析图像分析对电泳凝胶进行成像与结果分析，如定量、条带分析，然后输出结果（1）、核酸蛋白测定仪（分光光度计）SmartSpec plus Spectrophotometerv 200800nM连续波长v 用于DNA,RNA,寡核苷酸和蛋白定量(Bradford, Lowry,BCA检测法)v 可存储10个自定用户名的标准曲线v 精致小巧的外观设计用途：用于样品浓度检测，以控制实验条件的一致（2）多功能梯度PCR仪C1000 和S1000 PCR仪具有以下突出的特点： 市场上最容易更换模块的

6、PCR 仪器； 唯一一款带有独立控制双加热模块的PCR 仪器； 唯一一款带有温度梯度功能的双加热模块PCR仪器 快速运行，升降温速度快，设定时间短 唯一一款带有全自动程序编写功能的仪器 创新的热盖设计，适用的反应管范围最广，支持低体积的PCR反应 唯一一款能通过USB 闪存传输扩增程序和登录文件的仪器 唯一一款能通过电脑编写扩增程序的仪器 最个性化的平台，能适配用户不同的反应耗材和检测通量需求，包括定量检测高亮显示，随时变化的步骤和区域，适合初学者编程使用预计运行的时间 热盖设定的温度 （3）水平电泳槽：Mini-Sub GT Cell凝胶盘: 带有荧光标尺的紫外线透光多种凝胶盘大小：7x10

7、、15 x 20、25x25 cm多种不同大小的手铺胶选择适合所有需要的电泳多通道移液器兼容电泳梳主要用于对PCR扩增产物进行电泳，然后检测（4）基础电泳仪：PowerPac Basic电流4-400mA，功率75W，电压：10-300V，输出插孔：4对并联，可同时对四个同类型的电泳槽进行电泳主要用于提供稳定电压以进行电泳（5）凝胶成像系统：ChemiDoc XRS 上面蛋白转印系统中的第（5）项高灵敏度化学发光成像系统，已包括普通凝胶成像的功能，所以只需配备一台成像系统即可。（6）梯度实时荧光定量PCR仪：CFX96CFX96 实时定量PCR仪的主要特点：n结果可靠光源和检测器采用一体化的光

8、梭，长寿命的LED和光敏二极管整合在一起，确保实验结果可靠；n快速得到实验结果光学系统出厂时即经过严格校正，仪器即插即用，能够在数分钟内完成安装，开始实验n缩短实验运行时间快速的升降温速度，能够在30分钟内完成定量PCR 实验n快速优化实验条件温度梯度功能能够在一次实验中既能找到最优化的实验条件n减少实验样品和试剂的消耗10 µl反应体系即能得到稳定可靠的实验结果n根据实验需要选择数据采集方法支持SYBR Green 快速扫描模式n随时随地分析实验结果软件能自动通过电子邮件将实验结果作为附件发送n提高检测通道一台电脑能够控制多大4台CFX96 实时定量PCR 仪 CFX96 实时定量

9、PCR仪的描述：CFX96 实时定量PCR仪是BIO-RAD 实时定量PCR仪的延续，融合了现有实时定量PCR仪的特点和优点。CFX96 实时定量PCR仪是在C1000 PCR仪的快速而灵活的基础上，增加CFX96 光学检测模块形成的。CFX96 实时定量PCR仪易于安装、检测灵敏度高，结果准确可靠，能够用于各种实时定量PCR 的应用, 包括绝对定量、基因变异分析和基因表达分析。快速升降温度 CFX96 实时定量PCR仪在运行过程中，能够保持很好的温度均一性。快速而准确的温度控制能够在30分钟内得到准确的定量结果。温度控制的关键指标：n5°C/秒的最大升降温速度n温度准确性：+/-0

10、.2°Cn温度均一性：+/-0.4°C （在10秒钟内达到）n温度范围：0 100°C PCR反应的整体运行时间取决于很多参数，包括扩增程序的设计（孵育时间、循环次数等）、PCR反应的生物学特性和温度控制的能力。要得到最优化的快速PCR 反应条件，必须综合考量以上所有的参数。CFX96 实时PCR 系统具有快速的升降温速度和很短的设定时间等特点。这些特点取决于仪器加热模块的特殊设计和先进的逻辑式温度控制方法。“蜂巢式” 反应模块CFX96 采用专利的“蜂巢式”加热模块，减少了加热模块的质量，使热量传导更快。在反应模块的反应孔之间以及反应孔的横向和纵向，都有小孔，这

11、样的设计使得反应模块的整体质量较少30% ，使得热量传导更快。专利的“蜂巢式”加热模块设计还保证了卓越的温度准确性和均一性。 CFX96 多个温度控制单元，使得仪器在运行，包括升温和降温过程中，每一个反应孔都保持很好的温度均一性。只有10秒的设定时间，能够快速到达设定温度，缩短了PCR反应的运行时间。检测15个孔的温度变化曲线温度梯度功能CFX96 实时定量PCR仪的温度梯度功能，是功能强大的优化工具，能够在一次实验中找到最合适的退火温度。温度梯度的范围是1-24°C ，每一行一个温度，由内向外温度逐渐降低（最里面一行温度最高）。CFX96 实时定量PCR 仪采用了“动态变温”的温度

12、梯度形成方式，确保每一行的温度同时到达设定的温度，因此不同温度条件下的所有样品维持相同的孵育时间。没有温度梯度功能，必须运行几次实验，来优化最好的实验条件。67oC62oC56oCEfficiency = 68%Efficiency = 99%Efficiency = 98%使用温度梯度功能，优化退火温度。10倍(106 10 拷贝)稀释的含有GAPDH 的质粒为模板，在55 到 68oC 退火温度条件下，以SYBR Green染料扩增。 上图为3个温度条件下的结果，显示出62oC是最合适的退火条件Ct值小，标准曲线的扩增效率最高。光学检测器CFX96 实时定量PCR 仪采用一体化扫描式的光梭

13、为检测器，能够精确定量和区分目标基因。光梭由6个用于激发不同波长荧光的、带有滤光片的LED和相对应的用于检测荧光的带滤光片的光敏二极管所组成。每一组激发和发射滤光片对于特定波长的荧光染料来说，都是最合适的。LED 光源非常稳定，在使用过程中无需校正。CFX96 实时定量PCR 仪的光学结构检测通道激发波长 (nm)检测波长 (nm)校正过的荧光素1450-490515-530FAM, SYBR Green I2515-535560-580VIC®, HEX, TET, Cal Gold 5403560-590610-650ROX, TEXAS RED®, Cal Red 6

14、104620-650675-690CY5, Quasar 6705672-684705-730Quasar 7056450-490560-580None (和FRET 探针匹配)CFX96 实时定量PCR仪的滤光片和出厂前校正过的荧光素CFX96 实时荧光定量PCR 仪的扫描模式采用X 轴方向，即沿着样品板的每一行扫描。这种扫描方式减少了移动部件的磨损，数据采集时更安静、稳定。移动部件采用了专利的技术，确保在每一次扫描前，光梭都回到起始位置，偏差控制在3微米之内。在样品板的任意位置，每一次扫描，光梭都紧贴样品板，聚焦在样品孔的中心位置，重复性很好。对于任意一个样品孔位置， 都具有最佳的光程，无

15、荧光之间的交叉干扰，因此不需要空间因子的校正或有单独的通道，采集阳性的染料，如ROX等的信号，来校正光程差。CFX96 实时定量PCR 的光梭，紧贴样品板进行扫描CFX96实时定量PCR仪具有多通道检测能力，可以同时检测不同的荧光信号。在多通道扫描模式下，系统在通道1-5 检测不同的荧光信号，扫描完一块96孔板只需要12秒钟的时间，因此能在一个反应管中同时检测5种不同的靶基因。 如果仅使用SYBR Green I 或FAM标记的探针检测方法，可以使用快速扫描模式，在通道1采集信号，扫描完一块96孔板仅需要3秒钟。CFX96 实时定量PCR仪还能有一个单独的通道，用于能量共振转移探针的检测（FR

16、ET 探针），以FAM 的波长为激发光，检测HEX波长的发射光，给使用者的实验多了一种方法的选择。12345FamHexTxRedCy5Q7050100002000030000400005000060000ChannelSignalFluorophore在CFX96 实时定量PCR仪上用通道1-5检测常用的荧光染料得到的原始数据，显示出不同的通道之间几乎没有荧光信号的交叉干扰操作软件实验设定CFX Manager 软件带有的启动向导界面，使得开始定量PCR 实验显得非常简单。在实验设置界面（Experiment Setup），使用快速上载（Express loading）功能，能快速打开文件，包括软件预设的扩增程序、反应板设置文件等。你还可以快速运行程序，在实验运行过程中，或运行以后在编辑反应板设置，节约实验的时间。结果分析CFX Manager 软件在实验运行结束后，能将实验结果文件做为附件用电子邮件发送到电子信箱，你可以随时随地分析实验结果。 你可以根据需要分析数据和显示数据，一步就能将任何曲线图、