洋葱根尖染色体观察

1、洋葱根尖染色体有丝分裂观察与多倍体诱导一、实验目的1、掌握洋葱培养的方法，掌握利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。2、掌握洋葱根尖制片的方法，复习染色、压片的基本操作。3、通过对于有丝分裂相的观察，统计洋葱染色体数目，加深对于细胞 有丝分裂过程的理解。4、对比进行多倍体诱导前后的洋葱根尖，理解四倍体与二倍体的区 别。二、实验原理（一）有丝分裂前期）、S期（合成期）、G2期 中G1期、S期和 G2期合称间期, 准备，而 M 期又可以分为前期、 方便，木实验采用后一种分法。观察有丝分裂，重点在于观察染色体的形态。在细胞分裂前期，细 胞核解体，染色质凝聚显现出染色体的形态；在前中期，染色体散乱 地分布

2、于细胞的中部；在中期，纺锤体形成，染色体受到微管的牵 引，着丝粒成行排列于赤道板上；在后期，染色体受到动粒微管的牵完整的有丝分裂相包括 G1期（合成（合成后期）和 M期（分裂期），其 细胞完成 DNA的复制以及有丝分裂的 中期、后期和末期，为了形态观察的皮层维管柱画细麹了引，向细胞两级运动；在末期，染色体重新解螺旋，细胞核重新形 成。（二）洋葱的根尖洋葱根尖的整体结构如右图，其中只有分生区的初生分生组织由于 细胞始终处于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象，其 余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。（三）多倍体的诱导多倍体的诱导使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合， 从而

3、使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成，但是姐妹染色单体照常想 成，只是没有被拉向两级，于是染色体数目加倍。（四）各步骤的作用1. 固定液可以迅速杀死细胞，保持细胞形态在有丝分裂相。2. 解离可以破坏细胞的胞间层（果胶），使细胞之间的联系变松 散，有利于压片和染色。3. 漂洗可以洗去过量的盐酸，防止解离过度破坏细胞结构或影响染 色效果（盐酸是酸性，而醋酸洋红是碱性染料）。三、实验材料新鲜、健康的洋葱鳞茎一个；0.02%秋水仙素、IM HC1、醋酸洋红染液、卡诺氏固定液实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、试管、烧杯、小塑料管、滤 纸、刀片、解剖针等四、实验步骤（一）材料的培养1. 选择新鲜、健康、根原基

4、发育较为完整的洋葱鳞茎，用刀片适当 削去根部的木栓组织， 置于清水中培养 （水的高度要求与洋葱底部正 好接触） ，每天换一次水，保证水的清洁2. 待根尖长度达到1.5-2.Ocm时， 若要观察二倍体， 则直接于正午 12:00左右剪下根尖投入固定液中，之后换 0.02%秋水仙素，继续培养 约 24h3. 秋水仙素培养完成，根尖部位胀大后，与正午 12:00左右剪下洋 葱根尖，投入固定液中固定 2-72h（二）装片的制作与观察4. 从固定液中取出洋葱根尖，清水冲洗干净，取一支试管，加入适 量IM HC1,投入根尖，在 60C 恒温水浴下解离 5-10min,此时根尖整 体应呈半透明状，仅分生区部

5、分为白色。5. 解离完成后，转移根尖至盛有清水的小烧杯中，漂洗 23 次。6. 将根尖置于载玻片上，只留分生组织，去除其余部分，滴加醋酸 洋红染液染色 lOmin,同时用刀片将根尖尽量切碎。7. 盖上盖玻片（若切得足够碎此时盖玻片应能轻松盖上），用滤纸 吸去多余的染液，在有滤纸覆盖的情况下，用大拇指按压进行压片， 也可以用解剖针柄轻轻敲打相应部位进行辅助。8. 将装片置于显微镜下进行观察，比较二倍体与四倍体细胞的不 同，寻找合适的有丝分裂相，统计染色体数目。五、实验记录1.多倍体2.二倍体六、注意事项（1）培养洋葱根尖时，水不可放多，待根尖长出后，使根尖分生 区接触到水而即可；水至少一天一换，若有浑浊，立即更换。（2）剪下洋葱根尖时注意时间，正午时分最合适，因为此时洋葱 根尖分生区有丝分裂最为活跃，此时固定，可以观察到最多的分裂 相。（3）解离时间要控制好，时间太短，效果不够；时间太长，解离 过度破坏细胞。（4） 漂洗不能少， 染色时间要足够，