凝集反应(肥达反应、血型鉴定)

1、凝集反应凝集反应实验目的n掌握凝集反应原理n熟悉肥达试验的方法、凝集效价的判定及临床意义n抗原与相应抗体特异性结合，在电解质参与下形成肉眼可抗原与相应抗体特异性结合，在电解质参与下形成肉眼可见的凝集物，称之为凝集反应。见的凝集物，称之为凝集反应。n直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象。凝集现象。n 间接凝集反应：将可溶性抗原吸附于载体颗粒间接凝集反应：将可溶性抗原吸附于载体颗粒(如乳胶颗如乳胶颗粒、红细胞等粒、红细胞等)的表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与的表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合，即可出现凝集现象。

2、相应抗体结合，即可出现凝集现象。 直接凝集反应直接凝集反应n颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象。颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象。间接凝集反应间接凝集反应n将可溶性抗原吸附于载体颗粒将可溶性抗原吸附于载体颗粒(如乳胶颗粒、红细胞等如乳胶颗粒、红细胞等)的的表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合，即表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合，即可出现凝集现象。可出现凝集现象。协同凝集实验协同凝集实验n金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白蛋白(SPA)能与人及多能与人及多种哺乳动物种哺乳动物IgG类抗体的类抗体的Fc段结合。段结合。IgG

3、的的Fc段与段与SPA结结合后，两个合后，两个Fab段暴露在葡萄球菌表面，仍保持其抗体活段暴露在葡萄球菌表面，仍保持其抗体活性和特异性，当其与特异性抗原相遇时，出现凝集现象。性和特异性，当其与特异性抗原相遇时，出现凝集现象。称为协同凝集反应。称为协同凝集反应。金黄色葡萄金黄色葡萄球菌球菌可溶性抗原可溶性抗原凝集凝集抗体抗体直接凝集反应直接凝集反应n试管凝集试验试管凝集试验肥达反应肥达反应n玻片凝集试验玻片凝集试验ABO血型鉴定血型鉴定n肥达反应肥达反应(widal reaction)是用已知的伤寒沙门菌的是用已知的伤寒沙门菌的H抗原抗原(鞭毛鞭毛)和和O抗原抗原(菌体菌体)以及甲型副伤寒沙门菌

4、、肖氏沙门菌以及甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌和希氏沙门菌的和希氏沙门菌的H抗原的诊断菌液与病人血清做凝集试验，抗原的诊断菌液与病人血清做凝集试验，测定受检血清中有无相应的抗体以及抗体的效价，用于伤测定受检血清中有无相应的抗体以及抗体的效价，用于伤寒副伤寒的辅助诊断或流行病学调查。寒副伤寒的辅助诊断或流行病学调查。肥达反应肥达反应材料材料n伤寒沙门菌伤寒沙门菌O、H菌液，甲型副伤寒沙门菌菌液，甲型副伤寒沙门菌H菌液和肖氏菌液和肖氏沙门菌沙门菌H菌液。菌液。n生理盐水和患者血清（生理盐水和患者血清（10倍稀释），试管，倍稀释），试管，1ml吸管，试吸管，试管架，管架，52水浴箱水浴箱方法方法n取洁

5、净试管取洁净试管28支，分成支，分成4排，每排排，每排7支，依次编号。支，依次编号。n于每个试管内加入生理盐水于每个试管内加入生理盐水0.5ml。n在每排第一管各加患者血清在每排第一管各加患者血清0.5ml，进行，进行倍比稀释倍比稀释。ml1234567阴性对照阴性对照生理盐水生理盐水0.50.50.50.50.50.50.5受检血清受检血清0.50.50.50.50.50.5稀释度稀释度1:21:41:81:161:321:64诊断菌液诊断菌液0.50.50.50.50.50.50.5稀释度稀释度1:41:81:161:321:641:128血清最终血清最终稀释度稀释度1:401:801:1

6、601:3201:6401:1280弃去弃去0.5ml结果结果n凝集程度：以凝集程度：以“+”多少表示多少表示 。（+）上清液澄清，细菌全部凝集沉淀于管底。）上清液澄清，细菌全部凝集沉淀于管底。（+） 上清液轻度混浊，细菌大部分凝集沉淀于管底。上清液轻度混浊，细菌大部分凝集沉淀于管底。（+） 上液半混浊，细菌部分凝集。上液半混浊，细菌部分凝集。（+） 上清液混浊，仅有小部分细菌凝集。上清液混浊，仅有小部分细菌凝集。（-） 不凝集，液体呈乳状与对照管相同。不凝集，液体呈乳状与对照管相同。n效价判定：以能出现效价判定：以能出现“+”凝集现象的凝集现象的血清最高稀释度血清最高稀释度为为该血清的凝集效

7、价。该血清的凝集效价。n血清的凝集效价（滴度）：血清的凝集效价（滴度）：指能与一定量的抗原发生肉眼指能与一定量的抗原发生肉眼可见的明显凝集（即可见的明显凝集（即“+”+”凝集）的血清最高稀释倍数。凝集）的血清最高稀释倍数。血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗体的量愈多。一般认为，伤寒沙门菌体的量愈多。一般认为，伤寒沙门菌“O”O”抗体凝集效价抗体凝集效价在在1:801:80以上，以上，“H”H”抗体凝集效价在抗体凝集效价在1:1601:160以上，引起副伤以上，引起副伤寒的沙门菌寒的沙门菌H H凝集效价在凝集效价在1:801:80

8、以上才有诊断价值。以上才有诊断价值。O与与H抗体的诊断意义抗体的诊断意义nO抗体：抗体：IgMnH抗体：抗体：IgGO抗体抗体H抗体抗体诊断诊断肠热症肠热症感染早期或与伤寒沙门菌感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交抗原有交叉反应的其他沙门菌感染叉反应的其他沙门菌感染预防接种或非特异性回忆反应预防接种或非特异性回忆反应患病可能性小患病可能性小ABO血型鉴定血型鉴定n根据红细胞膜表面有无根据红细胞膜表面有无A抗原和（或）抗原和（或）B抗原，将血型分抗原，将血型分为为A，B，AB，O型型4种。种。实验材料实验材料n载玻片、刺血针、消毒牙签、载玻片、刺血针、消毒牙签、A型和型和B型标准型标准血清、生理盐水、酒精棉球。血清、生理盐水、酒精棉球。实验步骤实验步骤n1取一块清洁玻片，在其左右端分别用取一块清洁玻片，在其左右端分别用A、B做好标记。做好标记。n2在玻片一端滴加抗在玻片一端滴加抗A型标准血清一滴，在另一端滴加抗型标准血清一滴，在另一端滴加抗B型标准血型标准血清清.n3穿刺手指取血，玻片的两端标准血清各加一小滴血，用牙签搅拌，穿刺手指取血，玻片的两端标准血清各加一小滴血，用牙签搅拌，使每侧抗血清和血液混和。每边用一支牙签，切勿混用。使每侧抗血清和血液混和。每边用一支牙签，切勿混用。n室温下静置，观察有无凝集现象，室温下静