高效毛细管电泳技术测定肌苷口服液的含量

1、高效毛细管电泳技术测定肌苷口服液的含量杨迎迎孙发山王磊张玉奎(大连医科大学大连116027(中国科学院大连化学物理研究所大连116011提要介绍了应用高效毛细管电泳技术测定肌苷口服液含量的方法。实验是将肌苷口服液直接进样,以硼酸2硼酸盐为缓冲溶液。实验的回收率为9510%9918%,相关系数019985,精密度的变异系数小于5%。方法简便、快速、准确、灵敏度高。关键词高效毛细管电泳,肌苷,肌苷口服液分类号O658 R911前言肌苷是辅酶类药物,它能参与体内能量代谢及蛋白质的合成,具有提高各种酶(特别是辅酶A的活性及改善机体代谢作用。其含量的测定无论是在临床检验、药物分析还是在生产制备等方面都具

2、有重要意义,一般常用纸色谱2紫外法测定,此法重现性差,操作复杂。近几年,用高效液相色谱法1,2、反相离子对色谱法3等测定肌苷含量均有报道。本文参阅文献4,采用高效毛细管电泳技术将肌苷口服液直接注入毛细管中进行测定。实验结果表明,该法简便快捷,灵敏可靠。2实验方法211仪器与试剂21111仪器P A CE5010全自动毛细管电泳仪。Go ld软件控制仪器的操作和数据采集(美国Beck2 m an仪器公司。21112药品与试剂硼砂、硼酸(均为分析纯,二次蒸馏水,肌苷标准对照品(大连白玉山制药厂,肌苷口服液(大连白玉山制药厂,批号9501003,SD S。212电泳条件毛细管:75m×47

3、c m(有效长度40c m;缓冲液:80mmo l L硼酸2硼酸盐缓冲液加50mmo l L SD S,pH8.72;电压:20kV;电流:6813A;检测: 254nm;进样:315kPa×1s;柱清洗:每次进样前分别用011mo l L N aOH、二次蒸馏水、缓冲液各冲洗1m in。213标准对照品的配制精确称取肌苷标准对照品100m g,加入二次蒸馏水,制成浓度为10g L的对照品溶液。将此对照品溶液精确配制成浓度为011,012,0125,014,015g L 的标准系列。3结果与讨论311峰面积与浓度的线性关系按上述方法进行测定,回归方程Y=0.327X-0.1077,r

4、=0.9985,标准曲线见图1。在实验浓度范围内,浓度Y(g L与峰面积X(AU×m in呈良好的线性关系 。图1肌苷的标准曲线F ig11Calibration curve of i nosi nu m312精密度测定取标准系列中一种浓度(012g L的溶液,每天重复测定5次,连测5天,得到峰面积的日内及日间差异分别为312%,314%,变异系数均小于5%,说明本法具有良好的精密度。313回收率测定在上述条件下,在测得的样品中进行了回收实验,重复4个样品测定,数据列于表1中。表中X+S =9719+2137,说明本法具有较好的准确度。第15卷第1期色谱V o l.15N o.1 1

5、997年1月CH I N ESE JOU RNAL O F CHROM A TO GRA PH Y January1997本文收稿日期:1995209201,修回日期:1996201229表1回收率实验Table 1Recovery of the methodN o .加入量A dded( g L 测得量Found (g L 回收率R ecovery (%平均回收率A verage recovery(%0.5000.49999.897.9图2肌苷口服液HPCE 谱图F ig 12Separation of i nosi ne i n oral ton ic1.肌苷(ino sinum 。314

6、样品的测定取肌苷口服液5瓶,倾出内容物,混匀,稀释25倍进样,谱图见图2。肌苷口服液理论标示量10g L ,实验测得1014g L ,百分标示量103%。4结语本方法能快速、简便、准确地测定肌苷口服液的含量,测定结果重现性好,变异系数均小于5%。实验证明,方法可行。参考文献1Grune T il m an ,Siem s W erner G et a l .J Ch rom atogr ,1991;553(122:1932Gam berini G ,Feri o li V ,Zano li P et a l .Ch rom a 2tograph ia ,1992;34(11212:5633L

7、azzarino Giaseppe ,D i P iero Donato ,T avazzi Barbaraet a l .A nal B i ochem ,1991;197(1:1914M iyake M ,Sh ibukaw a A ,N akagaw a T .J H igh R eso 2lut Ch rom atogr ,1991;14:181D eterm i na tion of I nosi ne i n Ora l Ton ic by H igh Performance Cap illary ElectrophoresisYang Y ingying ,Sun Fashan

8、,W ang L ei 3and Zhang Yuku i3(D ep art m ent of Che m istry ,D alian M ed ical U niversity ,1160273(D alian Institu te of Che m ical P hy sics ,the Ch inese A cad e m y of S ciences ,D alian ,116011Abstract T h is paper describes a h igh perfo r m ance cap illary electropho resis m ethod fo r the a

9、ssay of ino sine in o ral tonic .T he m ethod emp loyed a bo ric acid 2bo rate buffer so luti on w ith SD S and UV detecti on at 254nm .T he cap illary w as 47c m ×75m i .d .Calibrati on curve show s good linearity .T he recovery of ino sine ranged from 95.0%299.8%w ith a coefficient of variati on (CV of 2.4%(n =4.T h is m ethod is si m p le