二苯胺试剂鉴定DNA

1、本文格式为word版，下载可任意编辑二苯胺试剂鉴定dna 二苯胺试剂：鉴定 da。 二苯胺试剂得配制 a 液：1。 g 二苯胺溶于 1 ml 冰醋酸中,再加 1 ml 浓硫酸，用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态，则需加温后待其熔化，再使用。 b 液：乙醛得体积分数为 0、2得溶液. 配制：将 0、1 m b 液加入到 10 l a 液中，现配现用. da 得粗提取与鉴定 试验原理 1、 da 在cl 溶液中得溶解度,就是随着 ncl 得浓度得变化而转变得。 当al 得物质得量浓度为、14 oll 时，dna 得溶解度最低.利用这一原理,可以使溶解在al 溶液中得a 析出。 2、na 不溶于酒精溶

2、液,但就是细胞中得某些物质则可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少得 dn。 3、da 遇二苯胺(沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定 dna 得试剂。 留意事项 1、步骤 3 析出含 da 得黏稠物中,蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入,不能一次快速倒入。 2、试验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但就是在不同得步骤中玻璃棒得用法不同。 试验用具 鸡血细胞液（1 ml）;体积分数为 95%得冷酒精,蒸馏水，质量浓度为、 g/m得柠檬酸钠溶液，物质得量浓度分别为 2 mol/l 与.015 moll 得 nacl 溶液,二苯胺试剂；烧杯(10 ml，1 个, l， 0 ml

3、，各 2 个)，漏斗，试管（0 l,个），玻璃棒,滴管,量筒（10 l，1 个），纱布，镊子，滤纸，铁架台,铁环，三角架，酒精灯,石棉网,载玻片，试管夹。 试验原理: 1、析出溶解在 nac溶液中得 da。 、用冷酒精提取出含杂质较少得na. 、dna 在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。 方法步骤: 提取细胞核物质:顺时针方向搅拌，稍快,稍重. 5 in 2.溶解 da: 3。析出含 dna 得黏稠物：蒸馏水m,逆时针方向搅拌，缓慢 4。过滤：取黏稠物 。再溶解:顺时针方向搅拌，较慢。 in 6。过滤:取滤液。 7提取出含杂质较少得 dna,逆时针方向搅拌，稍慢.5 min dna 得鉴定:沸水浴m

4、in 【试验十二】dna 得粗提取与鉴定 试验原理 dna 在氯化钠溶液中得溶解度,就是随着氧化钠得浓度得变化而转变得。当氯化钠得物质得量浓度为 2 mol/l 时，dn得溶解度最大，浓度为 0.4 mol/l 时,na 得溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中得 dna 析出. dna 不溶于5得酒精溶液,但就是细胞中得某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少得 dna。 dna 中含有脱氧核糖,能与二苯胺(沸水浴)反应生成蓝色物质，因此,二苯胺可以作为鉴定 dna 得试剂。 目得要求 1、 学会 dna 得粗提取与鉴定得方法。 、 观看提取出来得 d

5、na 物质得颜色与外形。 材料用具 材料：活鸡或鲜血鸡血。 仪器:离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100 ml,个),烧杯（10 ml，l 个,50 ml、50 ml 各 个)，试管（0 ml,2 个）,漏斗,试管夹,纱布. 试剂:酒精得体积分数为 95%得溶液（试验前置于冰箱内冷却 24 h),蒸馏水,柠檬酸钠得质量浓度为 0。1g/m得溶液,氯化钠得物质得量浓度分别为 2 mol/l 与 0015 mol/l 得溶液，二苯胺试剂。 方法步骤 试验前需要制备鸡血细胞液(由老师完成)，制备得方法就是：取柠檬酸钠得质量浓度为 0。1 g/得溶液（抗凝剂)10 m,置于500

6、 ml烧杯中.将宰杀活鸡流出得鸡血（约80 ml)注入烧杯中,同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合,以免凝血.然后,将血液倒入离心管内，用 000 /min 得离心机离。i,此时血细胞沉淀于离心管底部。试验时,用吸管除去离。心管上部得澄清液,就可以得到鸡血细胞液. 提取鸡血细胞得细胞核物质 将制备好得鸡血细胞液 5 ml0，注入到 50 l 烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水 20 ml,同时用玻璃棒充分搅拌 5 min,使血细胞加速裂开。然后，用放有纱布得漏斗将血细胞液过滤至00ml.取其滤液。 溶解细胞核内得na 将氯化钠得物质得量浓度为 2 m得溶液 40加入到滤液中,并摇动烧杯,使其

7、混合匀称,这时 dn在溶液中呈溶解状态。 析出含 dna 得粘稠物 沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物消失，留意观看丝状物呈什么颜色。连续加入蒸馏水，溶液中消失得粘稠物会越来越多.当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水(这时溶液中氯化钠得物质得量浓度相当于、1 mo/）。 4。滤取含 dn得粘稠物 用放有多层纱布得漏斗，过滤步骤 3 中得溶液至 500l 得烧杯中,含 dna 得粘稠物被留在纱布上。 5.将a 得粘稠物再溶解 取 个 5 ml 烧杯,向烧杯内注入氯化钠得物质得量浓度为 2 moll 得溶液 0l。用钝头镊子将纱布上得粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃

8、择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。 。过滤含有 dna 得氯化钠溶液 取个00 ml 烧杯，用放有两层纱布得漏斗过滤步骤 5 中得溶液。取其滤液,d溶于滤液中。 提取含杂质较少得 dn 在上述滤过得溶液中，加入冷却得、酒精得体积分数为 得溶液 50(使用冷却得酒精，对 dna 得凝集效果较佳）,并用玻璃棒搅拌，溶液中会消失含杂质较少得丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面得水分。这种丝状物得主要成分就就是dna 。留意观看丝状物就是什么颜色得. 8.na 得鉴定 取两支20 ml得试管，各加入氯化钠得物质得量浓度为0.01 l/l得溶液5 l，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解.然后,向两支试管中各加入4ml 得二苯胺试剂。混合匀称后，将试管置于沸水中加热 in，待试管冷却后,观看并且比较两支试管中溶液颜色得变化。将观看得结果填写在试验报告册上。 结论 步骤得 2 支试管中溶液颜色得变化说明白什么？将得出得结论填写在试验报告册上.