骨髓间充质干细胞的鉴定

1、骨髓间充质干细胞的鉴定 因为缺少特异性表型标记物，骨髓间充质干细胞的鉴定主要是综合鉴定，包括在显微镜下的贴壁细胞形态、增殖能力及多向分化潜能。间充质干细胞的细胞表面抗原cd44, cd54表达阳性，而cd44,cd54属于细胞间黏附分子，主要介导细胞间和细胞与胞外基质间互相作用，使bmscs与周围基质结合，而造血干细胞表面的特异性标记物cd45, cd34 , cd14均表达为阴性等。 骨髓间充质干细胞的鉴定指标如下： 1形态学特征细胞贴壁生长，成纤维细胞状，培养1014天，细胞呈平行状或旋涡状排布。 2表面标记鉴定因为msc缺少特异性的细胞标记分子，应用流式细胞仪检测mscs表面标记,cd1

2、05,cd73,cd44,cd90,cd71阳性，造血干细胞祖细胞的表型阴性，如cd45,cd34,cd14,cd11,cd80,cd86,cd40,cd31,cd18,cd56等。 3分化特性骨髓间充质干细胞可以向骨，软骨和脂肪细胞方向分化。 已有试验证实在细胞因子作用下，间充质干细胞可分化为软骨、骨、脂肪细胞、心肌细胞、内皮细胞和神经细胞，在体内参加组织更新、损伤的修复和重建。下面就分离予以讲述。 三、骨髓间充质干细胞诱导分化为软骨细胞 骨髓间充质干细胞（mscs）具有向软骨方向分化的能力，但影响因素无数，培养基条件、血清浓度、培养方式、细胞传代次数、接种密度、氧气浓度及细胞因子的添加等都

3、会定向分化产生影响，惟独优化这些影响因素，才干提高bmscs分化成软骨细胞的效率。 【材料】 1组织来源第3代对数生长久骨髓间充质干细胞。 2培养基配方和制备 (1）骨髓间充质干细胞培养基：l-dmem含有10% fbs,100u/ml和100ug/ml。 (2）骨髓间充质干细胞成软骨诱导液：l-dmem培养液含有2mg/l、3mg/l、1 mmol/l、100nmol/l和10 ug/l转化生长因子1。 【办法】 1取材 第3代对数生长久骨髓间充质干细胞弃去培养液，pbs洗涤两次。 2消化 用0.25%胰酶消化10分钟，加入10% fbs的dmem培养基终止消化，1500r/min离心5分钟

4、。 3诱导l-dmem培养基，待细胞80融合后更换培养液。试验组加骨髓间充质干细胞成软骨诱导液，对比组加骨髓间充质干细胞培养基，每34天换液。 【结果】 培养7天后细胞大多呈椭圆形，部分细胞伸出触角样突起，培养14天细胞形态变幻显然，罗列较为紧密，细胞突起多见，突起间相连，呈较显然软骨细胞形态特征。 【注重事项】 1添加胰岛素、转铁蛋白、丙酮酸、地塞米松和转化生长因子1的复合因子的骨髓间诱导液可诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。 2骨髓间充质干细胞诱导为软骨细胞的时光为7天左右。 四、骨髓间充质干细胞诱导分化为成骨细胞 骨髓间充质干细胞具有取材简单且对机体损伤小、增殖力强及体外培养条件下添加

5、细胞因子可向成骨细胞方向分化等优点，因此作为骨组织工程的种子细胞，参加骨的重建。 【材料】 1组织来源第3代对数生长久骨髓间充质干细胞。 2培养用试剂0.25胰酶。 3培养基配方和制备 (1)骨髓间充质干细胞培养基：l-dmem含有10% fbs,100u/ml和100 ug/ml。 (2）骨髓间充质干细胞成骨诱导液：l-dmem含有10% fbs,10mmol/l -、10-8 mmol/l、50mg/l ,100u/ml和100ug/ml。 【办法】 1取材第3代对数生长久骨髓间充质干细胞弃去培养液，pbs洗涤2次。 2消化 用0.25%胰酶消化10分钟，加入10% fbs的dmem培养基

6、终止消化，1500r/min离心10分钟。 3诱导 l-dmem培养基，待细胞80融合后更换培养液。试验组加骨髓间充质干细胞成骨诱导液，对比组加入常规骨髓间充质干细胞培养基，每34天换液。 【结果】 骨髓间充质干细胞大部分呈长梭形，经向成骨细胞诱导分化35天后，细胞形态变为胞体较小的立方形，继续诱导2天，细胞为多边形，胞体越发饱满，似鱼群样罗列整齐，诱导分化1012天后，碱性磷酸酶(alp）染色展现阳性。 【注重事项】 1添加-甘油磷酸钠、地塞米松、维生素c的骨髓间充质干细胞成骨诱导液可胜利诱导骨髓间充质干细胞向骨细胞方向分化。 2骨髓间充质干细胞诱导为骨细胞的时光为1012天左右。 3低浓度的