抗氧化实验方法

1、 1 / 5 2.2.3xxxx挥发油抗氧化活性的检测 2.2.3.1有机自由基DPPH·清除能力的测定 （1）实验试剂的配制 DPPH·无水乙醇溶液： 称取19.72mgDPPH，用无水乙醇定容至500ml，得到浓度为0.1mmol/L的DPPH溶液。 样品： 吸取30l的挥发油，加入3.56ml无水乙醇溶解挥发油；再将此溶液按照2倍梯度稀释至28 倍。 （2）有机自由基DPPH·清除能力的测定 向100l DPPH·乙醇溶液中加入不同浓度的香青兰挥发油及无水乙醇使总体积达到200l。振荡器混匀后，室温，避光放置30min后，在518nm处测定吸光度，

2、平行测定3次，计算清除率。 清除率A 0(A 1A 2)A0100% 式中：A0-DPPH·溶液100l +无水乙醇100l的吸光度A1-DPPH·溶液100l +样品溶液100l的吸光度A2-样品溶液100l +无水乙醇100l的吸光度 公式中引入A 2是为了消除样品溶液本身颜色对实验测定的干扰。 2 / 5 2.2.3.2超氧阴离子O 2- ·清除能力测定 （1）实验试剂的配制 Tris-HCl缓冲液： 量取2.1ml浓HCl，加蒸馏水定容到250ml，得到0.1mol/LHCl溶液；称取三羟甲基氨基甲烷3.0285g，加蒸馏水溶解，再加入114.5ml 0.

3、1mol/LHCl溶液，用蒸馏水定容至500ml得pH=8.2浓度为50mmol/L的Tris-HCl缓冲液液。 邻苯三酚溶液： 称取37.833mg邻苯三酚，用0.01mol/LHCl溶液溶解定容至500ml，得浓度为0.3mmol/L的邻苯三酚溶液。 样品： 吸取挥发油100l，加3.0ml无水乙醇稀释，再将此溶液按2倍梯度稀释25 倍。 （2）清除超氧阴离子O 2- ·能力测定 邻苯三酚自氧化速率V 0的测定： 在试管中加入5ml pH值为8.2的Tris-HCl缓冲液，加入2ml蒸馏水，于25恒温水浴中放置20分钟，再加入0.5ml邻苯三酚溶液，立即混匀倒入比色 3 / 5

4、杯中，用紫外分光光度计在325nm处测定A值，每反应30s记录一组，共反应5min。将记录的数据以时间为横坐标，吸光值为纵坐标，作直线回归得到的斜率表示邻苯三酚自氧化速率V 0。 挥发油清除超氧阴离子速率V 1的测定： 在试管中加入5mlpH值为8.2的Tris-HCl缓冲液，加入1.8ml蒸馏水，0.2ml不同浓度的挥发油于25恒温水浴中放置20分钟，再加入0.5ml邻苯三酚溶液，立即混匀倒入比色杯中，用紫外分光光度计在325nm处测定A值，每反应30s记录一组，共反应5min。将记录的数据以时间为横坐标，吸光值为纵坐标，做直线回归得到的斜率表示挥发油清除速率超氧阴离子的速率V 1。清除率计

5、算公式为： 清除率=V 1V0V 0100% 2.2.2.3羟自由基·OH清除能力测定 （1）实验试剂的配制 pH=7.4的磷酸盐缓冲液： 称取13.609g KH 2PO 4，加蒸馏水溶解定容至250ml，为A液；称取45.644gK 2HPO 4，加水定容至500ml，为B液。以体积比A液： 4 / 5 B液=19：81的比例配置，得到pH=7.4，0.2mol/L的磷酸缓冲溶液。 5mmol/L邻菲罗啉水溶液： 称取邻菲罗啉0.2478g，用蒸馏水溶解定容至250ml，得到浓度为2.5mmol/L的溶液。 7.5mmol/LFeSO 4溶液： 称取1.0428gFeSO 4&#

6、183;7H 2O，用蒸馏水溶解定容至500ml，得到浓度为7.5mmol/L的溶液。 1%H 2O 2溶液： 用30%的过氧化氢溶液稀释30倍即得1%过氧化氢溶液。 样品： 吸取挥发油100l，加3.0ml无水乙醇稀释，再将此溶液按2倍梯度稀释25 倍。 （2）清除羟自由基·OH能力测定 在试管中分别加入2ml pH=7.4的磷酸盐缓冲液，0.3ml 5mmol/L邻菲罗啉溶液，充分混匀后，加入0.2ml 7.5mmol/L FeS0 4溶液，每加一管后立即混匀。然后向其中加入提取溶液，混匀，再加入1%的H 2O 5 / 5 21ml，最后补充体积至8ml。另再做损伤管和未损伤管，其中损伤管中加入1%的H 2O 21ml，未损伤管不加H 2O 2，最后补充