牙髓干细胞研究进展综述

1、牙糙丁细胞研究进展综述牙髓干细胞1 1 牙髓干细胞概念牙髓组织位于牙齿内部的牙髓腔内,是牙体组织中唯一的软组织.2000年Gronthos1等通过对人牙髓细胞的研究,发现了一种与骨髓间充质干细胞有着极其相似的免疫表型及形成矿化结节水平的细胞,细胞中形态呈梭形,可自我更新和多向分化,有着较强的克隆水平.这些由牙髓组织中别离出的成纤维状细胞就称为牙髓干细胞(DentalPulpStemCells,DPSCs).现在普遍认为牙髓组织中具有形成细胞克隆水平和较强增殖水平的未分化间充质细胞即DPSCs2 2 牙源性干细胞至今,已从人类牙齿相关组织中别离和鉴定出7种干细胞：牙髓干细胞(dentalpulp

2、stemcelLDPSC)1*1,来自恒牙牙髓；张巍巍等以人牙髓干细胞为种子细胞与PLGA支架材料在体外进行复合培养,说明PLGA有利于于牙髓干细胞的粘附与增值.Lindroos等得到DPSC与其他间充质源性干细胞具有相似的外表标志物和骨相关性的标志物的结论,支持DPSC在硬组织再生方面的可能性.从成人第三磨牙牙髓中别离的DPSC在适宜的条件下可诱导分化为有功能活性的神经细胞,并在基因和蛋口水平表达神经组织专有的标志物,为治疗神经系统方面的疾病提供了新的途径.DPSCs不表达成牙本质细胞特征性蛋白DSP、DMP,那么说明DP-SCs尚处于未分化状态叫我国学者通过对根髓和冠髓进行比拟时发现：DP

3、SCs存在于全部牙髓之中)在根髓中的密度更高叫(2)人类脱落乳牙牙髓干细胞(stemcellfromthepulpofhumanexfoliateddeciduousteeth,SHED),来自儿童脱落乳牙的牙髓；Miura等山研究发现,正常脱落的乳牙牙髓中的细胞经培养会表现出成纤维细胞样生长,其增殖率和群体倍增数均比骨髓基质干细胞(BMMSC)、DPSCs高,于是首次提出了SHED的概念.ShenYY等发现SHED在体外培养过程中可以表达成骨细胞的标志,如RUNX-2.OCN、BSP,说明SHED在体外可以分化为成骨细胞；将SHED与人类牙齿切片复合后,在体外培养或是植入免疫缺陷小鼠皮下,均

4、表达成牙本质细胞分化的标志(DSPP,DMP-1,MEPE)l,01o一系列实验说明SHED在体内只能诱导宿主细胞分化为成骨细胞】,而其自身无法分化为成骨细胞,但在体外培养过程中却可以分化为成骨细胞.SHED可能还具有参与机体的免疫调节等功能P2o李丽文I囚等用不同密度接种培养DPSCs,计算细胞产量、倍增次数,观察细胞形态、检查克隆形成率和钙结节形成水平的方法得到,1.5? ?3cells/cm2低密度接种培养DPSCs有利于细胞快速扩增,扩增后的细胞保持较高的增殖和分化潜能.SHED的增殖能力、克隆形成效率和钙结节形成水平均优于DPSCso(3)根尖乳头干细胞(stemcellfromth

5、eapicalpapilla,SCAP)11411,来自牙根发育未完成的根尖乳头；Abe等I从人年轻第三磨牙根末端别离根尖周牙乳头,并采用幅消化法从中别离出细胞进行研究,结果发现这种细胞在低密度下培养时,1/14牙髓丁细胞研究进展综述能够像其他间充质干细胞一样形成贴壁生长的克隆原细胞聚集,并具有成骨、成牙本质和成脂等多向分化潜能,因而作者将这种细胞命名为SCAPoSCAP是牙根发育时成牙本质细胞的重要来源,在牙根的形成和发育中起着重要的作用,具有强于DPSCs的群体倍增水平以及增殖率、端粒幅活性和细胞迁移率,是一种极具潜力的成体干细胞Io张富强等I阖以笫1代猪牙乳头细胞作为干细胞与0-磷酸三钙

6、支架复合后将其接种于裸鼠皮下,结果成功地构建出牙髓牙本质复合体样结构.Ikeda等丽发现,人牙乳头间充质细胞经过培养、增殖和处理可分化为成骨组织,说明人牙乳头间充质细胞可用于骨组织再生.Shi等口oi还发现根尖牙乳头间充质细胞的牙再生能力强于DPSC,原因是牙乳头中所含的干细胞数量高于成熟的牙髓. 牙 周 膜 干 细 胞(periodontalligmentstemcell,PDLSC)或 牙 周 膜 祖 细 胞(periodontalligmentprogenitorcell,PDLPC)1211,均来自牙周膜；Byoung-Moo等耳用酶消化法将健康成年人的牙周膜组织制成单细胞悬液进行体外

7、培养,通过克隆筛选和磁珠别离得到了具有形成细胞克隆水平和高度增殖水平的细胞,从而提出了牙周膜干细胞(PDLSCs)的概念.正常情况下,牙周膜细胞可通过增殖和分化使其本身以及与之相连的牙骨质和牙槽骨处于不断更新和改建的状态.而当受到疾病或外界刺激时,那么可通过牙周膜中干细胞的不断增殖和分化使组织再生关于PDLSCs的细胞表型,免疫组化结果显示PDLSC表达间充质干细胞的标志物,而这些标记物是鉴定PDLSC的根底叫PDLSC和PDLP那么偏重牙周组织的重建.在临床上主要是利用干细胞的分化和再生潜力促进组织愈合和再生125261o(5)人类智齿牙滤泡祖胞(precusorcellfromhumand

8、entalfollicleofwisdomteeth.PC),或 称 为 牙 囊 干 细 胞(dentalfolliclestemcell,DFSC)1271,来 自 智 齿 牙 囊 ; 牙 八(dentalfollicle,DF)是包绕发育牙齿的疏松结缔组织.Honda等绚从小牛牙根形成阶段的恒切牙牙胚中别离出牛DF细胞,进行了一系列试验,证实DF细胞中含有牙周膜细胞及牙骨质细胞的前体细胞；U询研究发现在口腔的不同组织中均别离出干细胞.(6)牙槽骨干细胞(alveolarboneproperderivedstemcell,ABPSC尸,来自牙槽骨骨髓.(7)牙龈/口腔黏膜干细胞(gingin

9、val/oralmucosastemcelLOMSC)1来自牙龈黏膜下结缔组织或来自牙胚的问充质干细胞(mesenchymalstemcellfromtoothgerm)1521,其来源属于牙髓干细胞：刃外还有根尖牙囊干细胞(periapicalfolliclestemcell,PAFSC)阿,属于上述的SCAPo牙源性干细胞具有间充质干细胞的功能特性和多向分化水平,并表达间充质干细胞的外表标志物如CD44、CD73、CD105,但不表达CD34和CD45W不同来源的牙源干细胞如图1所示.牙髓丁细胞研究进展综述OMSCABPSCDPSCSHED牙髓丁细胞研究进展综述OMSC讶龈/口腔黏膜干细胞

10、；ABPSC:牙槽计干细胞；DPSC:牙僦干细胞；SHED:人类脱落乳牙牙髓下细胞：DFSC:牙囊干细胞：SCAP:根尖乳头干细胞；PDLSC:牙周膜干细胞.图1不同牙源干细胞的来源组织部位3 3 牙髓干细胞的别离培养3.3.1 1 仪器和材料仪器：超净工作台.倒置相差显微镜及照相系统,流式细胞分析仪,细胞筛网,JEM-2000EX透射电镜.平底24孔、96孔塑料培养板.二氧化碳恒温培养箱,细胞培养瓶及培养板,高速离心机,细胞记数板,可见光分光光度计,酶联免疫检测仪.材料： 现在国内实验中采用的普遍的牙髓细胞来源于临床上因阻生而完整拔除的下颌第三磨牙获得患者许可,要求牙齿健康,无牙体牙周疾病,

11、患者年龄12-25岁属1.人源乳牙：610岁健康儿童无牙体牙髓疾病的滞留乳牙； 鼠源性牙髓细胞：5周龄大鼠,雄性.5周龄裸鼠,雌性；犬源性牙髓细胞：56个月龄的比格犬的健康年轻恒牙；46月龄小型猪乳下切牙等牙齿.3.3.2 2 细胞别离培养培养牙髓干细胞方法有酶联合消化法、组织块培养法和组织块酶消化法.分离牙髓干细胞方法有三维悬滴法和免疫磁珠分选法.3.2.1幅联合消化法以2000年,按Gronthos等的幅联合消化方法,将人乳牙牙髓组织在完全培养液浸润下剪碎,3g/LcollagenasetypeI4g/Ldispase按1:1比例混合,于37C水浴中消化乳牙牙髓组织1h,离心弃上清液,沉淀

12、用培养液充分混匀,反复吹打离散细胞团块,经70冲】的细胞筛网过滤获得单细胞悬浮液,参加含体积分数4/14牙髓丁细胞研究进展综述15%胎牛血清的DMEM培养液,置入3.5cm培养皿内37C恒温培养箱标准条件下培养.别利克孜?卡德尔I等人在2022年对幅联合消化法进行了改进.将人乳牙牙髓组织标本块浸入同样的消化液中,仅在37水浴中消化15min左右,待组织块呈絮状参加完全生长液终止消化,300g离心力离心5min,充去上清液,将组织团块均匀铺入3.5cm的培养皿中,在各组织块处分别滴加50-100pL完全生长液,置入37.C、体积分数5%CO2培养箱中孵育,两三天更换完全生长液,待组织周边有较多的

13、细胞爬出后,挑弃组织块,补足完全生长液继续孵育.当大多数克隆的细胞集合至80%-90%时,吸充培养液,进行传代扩增培养.3.2.2组织块培养法新鲜采集的牙髓,在生物平安框中用PBS洗3遍,置于6cm培养皿中,力口入少量完全DMEM/F12培养基(其中含20%FBS、1%L-Glutamine八1%NEAA及1%双抗)浸润牙髓组织,用无菌手术剪将其剪碎,盖玻片将组织块固定在培养皿中,37C、5%CO2培养.48h换液,此后每3、4d更换1次培养基.培养约1014d会有细胞从组织块中爬出,细胞到达80%-90%集合后,用TrypLE在37C消化,按1:3比例传代网.3.2.3组织块幅消化法(1)牙

14、拔除后用75%酒精擦拭牙体外表消毒,再用含青霉素、链霉素的PBS浸洗牙2次备用；(2)原代细胞培养：无菌条件下劈开牙齿,取出牙髓,切除根尖部约2mm牙髓组织,剪成大小约Immxlmmxlmm的组织块,用4%I型胶原幅消化45min,终止消化,1000r/min离心5min,充上清,所得组织用含20%胎牛血清的a-MEM培养液重悬后接种于35mm培养皿,于37C、5%CCh恒温孵箱内培养,待细胞长至80%集合率时,胰酶消化传代.(3)有限稀释法克隆纯化人牙髓干细胞：取对数生长期的原代细胞,调整细胞密度,把细胞稀释到10个/mL,以100P1/孔接种于96孔培养板内,培养24h后镜检,挑出单个细胞

15、的孔,继续培养； 待单克隆面积至孔底50%以上时,取多个克隆培养细胞混合扩大培养I洞.3.2.4三维培养法参考并改进Gronthos的方法,从健康人体的第三前磨牙中获取牙髓,用幅消化法和幅解组织块法进行原代DPSCs培养并常规传代.人DPSCs的三维培养法：将处理好的0.25gCytodex3微载体与50ml含Ixl05/ml第四代DPSCs的新鲜DMEM/F12(含15%FBS)混合均匀,载入经高压灭菌的HARV中,此时,培养基充满整个容器,无气泡,调整转速,使微载体不与器壁碰撞,不在中央聚集.整个装置放入37C,5%CO2的培养箱中.常规换液叽5/14牙髓干细胞研究进展综述免

16、疫磁珠分选法原代细胞收集方法：根据Gronthosl的方法,在体外进行原代培养,获得细胞放入37C,5%CO2培养箱中培养3d后充去未贴壁细胞,PBS清洗每3d换液一次.细胞生长达80%融合时1:3传代.取生长状态良好的第3代乳牙牙髓细胞1x10*,以含1%胎牛血清的PBS重悬,参加STRO-1抗体,4c孵育60min,每隔lOmin轻振,预防细胞沉淀.然后用含1%的胎牛血清的PBS清洗3次,去除残留抗体； 细胞再次重悬通过30Pm的滤网获得单细胞悬液,按说明参加相应剂量的磁珠混匀,4C孵育15min,加入10ml缓冲液以300g离心力离心lOmin,完全去除上清；加500八1缓冲液混匀细胞团

17、；将分选柱置磁力架上,用500P1缓冲液预先润湿分选柱,缓冲液快要滴完时将细胞悬液参加到分选柱内不要产生气泡,待细胞悬液将要滴完时参加500八1缓冲液重复3次,收集从分选柱流出的乳牙牙髓细胞： 从分选器上取下分选柱加入1ml缓冲液用分选柱配套的推子快速推下,将收集到的SHED再次经过分选柱重复筛选一次.参加含15%的胎牛血清的全培4ml置37c5%CO?培养箱中培养刚.4 4 牙髓干细胞在口腔科学的用途4.4.1 1 牙本质/牙髓组织的修复和再生Couble等I培养发育早期的牙髓,发现可分化形成成牙本质细胞.研究可以得出结论牙髓干细胞在成牙本质细胞遭受损失后,会分化为成牙本质细胞,成牙本质细胞

18、分泌牙本质以维持牙本质的完整.DPSC、SHED和SCAP者口具有一定多向分化潜能,其中包括形成牙本质/牙髓样复合体2铁U前牙本质/牙髓组织修复和再生方法主要有以下儿种.(1)将牙髓干细胞直接植入牙髓腔.(2)将牙髓干细胞与支架结合植入牙髓腔.(3)将牙髓干细胞和支架材料先植入动物体内,再取出植入人体牙髓腔.(4)将牙髓干细胞和支架材料种植在人类牙齿组织块上,再植入动物体内.4.4.2 2 牙体牙冠的再生Yu等El将DPSC和成年鼠的根尖牙雷细胞(apicalbudcells)结合,在植入活体后形成典型的牙冠样结构,其中包括成釉细胞层、牙釉质、牙本质、前期牙本质和成牙本质的细胞层,Ikeda等

19、小1报导从小鼠牙齿发育的杯状期别离出成牙上皮细胞,将其与DPSC结合在胶原凝胶上进行体外培养,形成的牙胚植入小鼠颌骨内,结果发现此生物合成牙与牙槽骨结合良好,并具有天然牙齿的功能.DPSCs的回植的研究,Zhang等中】将体外培养的人第三磨牙DPSCs与海绵胶原、多孔陶瓷和纤维钛网3种三维支架复合,并分为2组,第1组在诱导成骨的培养基中培养4周,第2组植入裸鼠皮下6周.结果说明,在第1组的3种支架材料中均可见富的细胞外基质矿化沉积,并有DSPP的表达,第2组均可见6/14牙髓丁细胞研究进展综述DSPP阳性的组织形成,但是此种组织与牙本质不同,更像结缔组织,而且仅在多孔陶瓷材料上有细胞外基质矿化

20、.在口腔医学上,有望填补缺损的牙齿.4.4. 4 4 颅骨、颌骨及面骨的损伤修复研究2022年,d八Aquiiio等问用DPSC成功培养出骨组织碎片,将此碎片植入动物可产生有血管供给的板状骨.他们还报道了用DPSC治疗下颌骨缺损的临床研究结果.他们先拔取患者的上颌智齿,别离培养自体DPSC,再将其植入明胶载体产生DPSC复合体.然后拔除双侧下颌智齿,一侧置入DPSC复合体,另侧作对照.结果发现,术后60天,实验侧第二磨牙皮质骨垂直增生至牙釉与本骨质交界.术后3个月,新生骨组织、细胞因子、BMP-2和血管内皮生长因子(VEGF)的表达在实验侧显著高于对侧.术后1年,实验侧完全稳定骨化,到达笫二磨

21、牙骨质再生的目的.4.54.5 口腔科学其他方面应用的研究(1)牙髓干细胞与钛合金种植牙结合,Mangano等购对DPSC与钛合金外表的结合部位进行基因表达的研究,结果发现,DPSC能很快分化为成骨细胞和内皮细胞沿合金外表形成骨组织,并表达相应的特异蛋白标志物.(2)牙源干细胞与透明质酸HA涂面的种植牙结合,Yamada等 【切报道,当DPSC或SHED与PRP合用,所形成的骨质能与涂有透明质酸(hyaluronicacid,HA)的种植牙根更好地结合.5 5 牙髓干细胞在其他疾病中的用途5.5. 1 1 牙髓干细胞用于脑血管意外损伤的修复研究Yang等皿别离培养了人类第三磨牙的DPSC,并诱

22、导其转化为神经干细胞(NSC)o将此NSC细胞移植到大脑中动脉栓塞大鼠模型,结果发现,治疗组的神经性隙碍明显改善.Sugiyama等刚从猪牙髓衍生取得DPSC细胞(CD317CD146)将Sprague-Dawley大鼠进行大脑中动脉栓塞,24小时后将DPSC细胞(CD31一/CD146-)注入大脑.结果发现,DPSC细胞体内分化为NSC及神经细胞,表达doublecortin的神经细胞数上升2倍；表达NeuN的神经细胞增长8倍；在缺血的脑部VEGF的水平比正常大脑提升28倍.此结果说明,来自牙髓的DPSC细胞(CD317CD146-)能够促进移植的和内源性的神经干细胞分化.5.5. 2 2

23、牙髓干细胞用于脊髓损伤的修复研究Nosrat等【刚研究说明,神经元可以从牙髓的干细胞诱导分化产生.随后,许多研究进一步说明,DPSC具有转化为神经元的水平oHuang等喊功地将DPSC移植到小鼠海马区,并在体内分化为神经细胞,为牙源性干细胞修复中枢神经系统疾病提供了证据.Sakai等1口移植DPSC和SHED到脊髓全断大鼠,结果发现DPSC和SHED的外表标志、基因表达和分泌的细胞因子发生明显改变.移植7/14牙髓丁细胞研究进展综述DPSC和SHED后,脊髓全断大鼠后肢的运动功能明显恢复,神经轴突明显再生.DPSC可能通过三个方面促进脊髓损伤修复：1抑制损伤导致的神经元、星形胶质细胞和少突胶质

24、细胞的凋亡；2直接抑制多种阻碍轴突生长的抑制因子如硫酸软骨素、蛋口聚糖和髓磷脂等相关糖蛋口；3分化为成熟的少突胶质细胞促进神经轴索生长5.35.3 牙髓干细胞用于帕金森氏病的修复研究Nesti等刚将DPSC与中脑神经组织细胞联合培养后移植到体外帕金森氏病Parkinson八disease模型上,发现DPSC能提升大脑神经细胞对MPP+或鱼藤酮所导致神经毒性的保护作用Ibarratxe等I洌报道了牙髓干细胞用于帕金森氏病修复治疗具有许多优越性：牙源性干细胞比拟容易得到自体细胞,可预防免疫排斥和炎症反响；DPSC本身具有神经细胞及胶质细胞标记物的表达；DPSC具有类似神经元的电活动如表达神经细胞的

25、受体,并产生动作电位；DPSC可在宿主的神经组织内生长存活.5.5.4 4 牙髓干细胞用于心肌梗死、糖尿病和免疫缺陷性疾病的修复研究Gandia等卜？用冠状动脉结扎法在大鼠裸鼠造成急性心肌梗死的模型,并将DPSC注入心肌内.4周之后显示心肌功能改善,梗死区缩小,新血管形成增加.他们认为,DPSC可以作为急性心肌梗死细胞疗法的干细胞来源.Govindasamy等I报道将DPSC分化为胰岛样细胞聚集体islet-likecellaggregates,ICA,#发现其表达相应的转录因子如CPP、Pdxl、Pdx4、Pdx6、Ngn和Isll等,从而起到调节血糖治疗糖尿病的作用.研究说明,MSC对很多

26、自身免疫疾病系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、多发性硬化症等有一定的疗效,可能是通过免疫调节发挥作用心.6 6 牙髓干细胞的研究进展6.6.1 1 国外牙髓干细胞研究进展1999年,Harada等阿】 发现在小鼠切牙颈环星网状层中央的上皮细胞层存在干细胞,维持小鼠切牙终生不断萌出.2000年,GronthosS等山人发现人牙髓组织中同样存在成体干细胞,首先牙髓干细胞提出的概念.2022年,Young等61别离猪第三磨牙牙胚,制备单细胞悬液,并接种到可降解的聚合物支架上,植入大鼠肠系膜内生长2030周,可成功地构建出牙齿结构,包括含成熟牙釉质的釉器官、 牙本质、成牙本质细胞、髓室、上皮根鞘和成牙骨质

27、细胞,证实在猪第三磨牙有上皮和间充质干细胞的存在.Miura等 【7】 从人脱落乳牙中别离到干细胞,其具有较DPSCs和BMSCs更高的增生水平和克隆形成水平,并可以分化成神经细胞、 脂肪细胞和成牙本质细胞,回植小鼠体内后可形成骨和牙本质,注射入小鼠脑内生存可超10d,并可表达神经标记物神经微丝neurofilament,NFMo他们把这种干细胞命名为脱落乳牙干细胞stemcellsfromhumanexfoliateddeciduous8/14牙糙丁细胞研究进展综述teeth,SHEDo2022年,Norsat等卜刁发现牙髓细胞能产生多种神经营养因子,并为多巴胺能神经元提供营养支持与三义神经

28、元复合培养可刺激轴突生长而且DPSCs可以在体外分化为神经元,证实DPSCs具有多相分化潜能.2022年,loharaK等发现DPSCs表达STRO-1、CD146、CD34以及c-kit这儿种间充质干细胞外表抗原.在成人牙髓组织中,STRO-1主要定位于血管壁和神经束膜,CD146定位于牙髓的微血管,而STRO-1和CD146的共表达仅限于血管外壁,因此推测DPSCs来源于血管局的微环境.2022年,ProsperF等丽表示应用DPSCs于各种组织的修复和疾病治疗中已成为可能.2022年,Monterio等人发现牙髓干细胞向中胚层细胞分化,诱导分化为成牙本质细胞、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞

29、和肌细胞等并在适当条件下具有向内胚层细胞分化的潜力.2022年,Sakai等人H2I发现DPSC和SCAP可生成牙本质-牙髓复合体,而SHED生成矿化组织而非牙本质-牙髓复合体.将SHED接种到牙片支架上并将其植入免疫缺陷小鼠皮下培养,经四环素染色和显微镜观察发现,SHED生成带小管的牙本质组织.2022年,研究人员发现牙本质再生需要有活性的牙髓组织,牙髓组织的再生需要有血液的供养皿1.利用干细胞进行组织再生那么需要生成有效的血管网络,为移植的细胞提供氧气和营养,保证细胞在参与组织再生时的需要1呦.在血管生成和血管再造的过程中,在明胶微球支架中参加VEGF并将其接种DPSC后将其植入到空的根管

30、内,再将其植入到切除根尖的小鼠牙槽根管中培养4?8周,空的根管内形成了带血管的牙髓组织何Io2022年,MeadB等口引人有证据说明牙髓干细胞可能是一个更适宜的细胞类型比视网膜治疗骨髓间充质干细胞.雪旺细胞在维持外周神经功能程中发挥重要作用.2022年,Martens等同发现损伤后神经再生修复过,人DPSCs经诱导分化,可以分化为雪旺细胞.具有髓鞘形成能力.6.6. 2 2 国内牙髓干细胞的研究进展1998年,田卫东等人I测应用完整的胚胎上皮和别离的牙间充质细胞或其他组织的MSC构建的再生牙有正常的牙冠形态,这一点要优于应用成体牙细胞.2022年,贺慧霞等人刚透射电镜下,DPSCs的核呈卵圆形

31、,约占胞体体积的80%90%,核仁大而明显,常染色质居中,异染色质少,分布于核周.胞浆很少,核浆比例大.细胞器较少,核糖体富.这些形态特征表达了DPSCs的未分化或低分化状态.2022年,杨雪超等人I小成功国内学者也成功的诱导了DPSCs向成牙本质细胞、肌管样细胞以及脂肪细胞的分化.2022年,刘彩霞等人氏I将其与疑磷灰石-磷酸三钙支架复合并将其植入免疫缺陷小鼠体内,形成了牙骨质和牙周膜样的新生组织.2022年,张富强等人I以第1代猪牙乳头细胞作为干细胞与口-磷酸三钙支架复合后将其接种于裸鼠皮下,8周后行组织学、牙本质涎蛋口免疫组化和透射电镜检测,结果成功地构建出牙髓牙本质复合体样结构.9/1

32、4牙髓丁细胞研究进展综述2022年,在成骨诱导分化实验显示：体外矿化诱导DPSCs40d后,骨涎蛋白(bonesialoprotein,BSP而骨钙素(osteocalcin,OCN)免疫荧光染色阳性,可见骨小梁结构；随后将此骨样组织回植入免疫缺陷小鼠背部皮下,4周后形成发育良好的板状骨,说明DPSCs在特定矿化条件下有成骨水平1即.口前最常用的培养骨髓间充质干细胞的方法是密度梯度离心法.此方法培养的骨髓间充质干细胞纯度较高,培养周期短,采用此法别离培养骨髓间充质干细胞.牙髓干细胞常用的培养方法是免疫磁珠分选法J J2022年,霍永标的文章看出台湾地区在内的多家牙齿细胞库的建立更是使得牙髓干细

33、胞的研究从实验室研究走向临床应用1歹限2022年,赵珊梅的实验结果证实了丙I报道中经过抗生素处理的炎症牙髓干细胞的原代培养成功率(80%)显著高于未经过抗生素处理组的成功率(30%).因此,多种预防细菌污染的举措被应用到口内直接拔髓及原代培养操作过程中.在成脂分化中,多采用成脂诱导液进行诱导,观察脂滴的形成情况,也可检测成脂肪向分化相关基因,如：过氧化物幅增殖物激活受体丫2、脂肪幅结合蛋白aP2和脂蛋口脂幅等口叭多向分化潜能是DPSCs主要的生物学特性之一,常用的鉴定方法有矿化诱导、成脂分化诱导及成神经分化诱导等.在矿化诱导中,多采用矿化诱导液进行诱导,观察矿化结节的形成情况,同时可进行相关矿

34、化基因的检测,LI前常用于鉴定的细胞标记物主要包括：1型胶原、碱性磷酸幅、牙本质涎磷蛋白等囚1.2022,王娟等人呢1的实验说明低浓度他莫昔芬对牙髓干细胞增殖无明显影响,一定浓度的他莫昔芬对hDPSCs成骨/成牙分化具有促进作用.7 7 总结牙髓干细胞自1998年被实验发现,2000年被确认.国内外学者对人源、鼠源和猪源性牙髓干细胞进行了研究实验.发现DPSCs能促进牙髓组织再生和生成牙本质细胞来修复牙本质,为牙体牙髓疾病提供了新的一种治疗途径.现在DPSCs已经被证实具有多向分化水平.DPSCs分化为成骨细胞和血管内皮细胞.特别是DPSCs的成骨水平对以后的临床应用有重要意义.在口腔医学研究

35、领域,DPSC的别离提取较为方便,常常可以通过别离某些牙源废物的髓质成分获得.因此,该细胞在别离培养方面的廉价性以及本身具有的多向分化潜能、自我更新水平,均在很大程度上决定了该细胞在再生医学中的广泛应用前景.但是,关于DPSC诸多方面的研究尚处于起步阶段,特别是在体内应用性研究方面,仍需进一步探索.所以,只有建立一种高效稳定、平安可靠的DPSC的应用模式,DPSC才能真正走进临床,效劳于人类.摘要1JGronthosS.MankaniM.BrahimJ,etal.Postnatalhumandentalpulpstemcells(DPSCs)invitroandvivoJ.ProcNatlAc

36、adSciUSA.2000,97:136253630.2张晓艳？张楠等？牙髓干细胞的研究进展J.口腔医学.2022,30(7):434-436.10/14牙糙丁细胞研究进展综述3张巍巍？李艳萍.梁鹏等？人牙髓干细胞在聚乳酸-醇酸共聚物支架上粘附与增值的研究J.口腔医学研究,2022,27(12):1083-1085.4 LindroosB,Mae口口imK.YlikomiTxtal.BiochemBiophysResConimun.2022.368(2)329-335.5 ArthurA.RychkovGShiS,etal.StemceU5.2022,26(7):1787-1795.6王亦菁.

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