中药制剂分析第四章-卫生学检查

1、第四章中药制剂的卫生学检查第节概述第二节微生物限度检査法第三节活蛹检查法第四节热原检杳法-第五节无菌检查法-第六节细菌内奇索检查法细菌(一)细菌1细菌的大小与基本形态 细苗个休微小，通常以微米(pm)为计置单位。需 用显微镜放大几百借或上T倍才能着到 各种细菌大小不同赴细菌也因 卑蝕筋飜而線廳鞭的种类不同形态也多种则小对形态2细菌的结构 各种细窗共肓的结构包扔细胞壁、细胞膜、细胞丿贡、核质等 细胞电足细|爲的皿外広纠构.仃细胞腹紧密相连。其卞耍功能是维持细商的 形态.保护细断 与细胞膜其同完成蘭体内外的物质交换。革弋氏阳性菌细 胞壁较厚.IL i夔成分为肽聚糖磷璧酸和少虽衣血虫门恥i'

2、氏阴件葡 细胞臺较薄肽富糖含量少，肽聚糖外丿負丘白和脂多糖组成的 结构.细胞膜位丁细胞壁内侧於半漳透竹牛物膜.上翌成分足责门质磷 脂和盘蕭麒裁多嚣异性的环可敵选择性地吸收营养物晰-押泄废物，维扛渗透压平衡。细嚥紗空屛讷繃闕加忍翳为水严 无机弘、核曲 蛋门质和脂臾鼠 细胞谥内希含冇核蛋门体、质和和胞浆顼 粒笛茎种内禽物。细信的细胞核没仃核膜和核上，但在细胞浆屮冇同泌的核 I心 称核质.核质足由裸齊的双股脫代核昭孩酸址组成的.】耍功能足拧制 细苗的遗传"支汁件状 荣此细I和I冇用魚、芽胞、鞭毛和iWto其屮芽胞 年热、厂煉、化賞药品y辐射均仃牧烦的抵抗力因此.在消祈灭茵时咸以 杀死芽胞伶

3、为彻危灭菌的指标。'To显:聶欲蛊i爲疵般一、细菌3细菌的形态学检査观察细菌的形态和结构，通常冇不染色法和染色法两种。前若适用于 观察细歯的动力、形态和人小，常用的方法冇压滴法、悬滴法、暗视 野荧光法等；麻名璋川于观察细闲的形念.人小、拙列和染0特性, 尚对哝别细閑的纟卜祷。山于细倔的等电後较低，约4：pH2-5Zlu .髓蠶着營魏髒籬嘔鶴魅帶与粕己电荷的緘性染聘躺册片上加滴生理盐水'再用取菌坏挑取齢少许'(2)干燥:在空气中自然F燥。必要时,可将标本面向上.在火焰上烘 ¥但应注意切勿紧靠火焰.以免标本烤焦。 (3)固定：固定的H的是杀死细菌,使细菌粘附在玻片

4、上.增强染料对 细苗的通透件，便丁乘料廿色。方法是将已干燥的玻片來回通过火焰 二次.以热布不烫力H。细菌(4)染色：根检验忖的的不同.堆出不同的染色方法进钉染色.厲傑趙爲釦；戯酸J能満融卿胖成讪色、像:!+以上的染料先HTW7HJ 染成仝网的觑色 M也察细何L门i、”态'川列 能怡妙不p)S1K»£特WstSSiMil的种厂 八：; tin色步骤如卜:；俗绡吊烧集祸加aCAfi卩曜八決lEin丿Ik冼：丹滴加卢戈氏伸1液鹦肿彳鴛：垄叫竹疊 舊谧"丿I 八、忙 讥谨聽(血1漁舷虫準二氏阳性(J)曲贰成谥i： 2氏iMtLG)也杂成红色.4细歯生长素做的条件细

5、閤讯氏他什沏IV.必须不A地从外界环览吸收卄齐物应用以仃成门 直的预刘跖籾获得能!(；冋时逝佈妳代鲂 怙堪持门刃的牛长和緊慰细的牛上系 笊的豕仟仃：允疋的肯探：细尚牛氏緊殖所於的污斥物质匕亲、无机盐、氏浙、氮源和牛长冈 生氏冈r是许多细画1上过杆屮 '乙i.如浪囁殊氮事z/谥痴籃fcM繼帽 爲蔬歯册艮H I、四种TT- - lriW&hVtt不同 tfl5V-40(11(：;1 : /'He：叮二 八丿"冬址氧气和 7*-I-，良气的咯 TJfcfi 6K条件！ 、的细创弥为件石饥凿薜脾鯛;林洌能畝黠叫嚥齡曲魏鬻舞躺严3 r統和无细菌5.细菌的代谢产物 细菌在

6、代谢过榨屮广隹务种代谢/物，K中砂产物可供鉴别细菌 用.仃屁匚細繭的致病性冇义，用防治疾衣。合成代谢产物 毒素及侵袭性fife：細閑能产牛対机化仃害的毒素。内祷素*G-«l产牛：外毎素大事 山G+菌八I.但少数G请也能产工外毒索 荣此细悄还能"k只右侵茨性的悅，损伤 机体组织.如金员色的苟球闔产生的血浆凝固酚尊. 热廉质：许3G*|閨及少数G+朴歯., 匸 种耐热物庾，注入人或动物体内心 4反应，故称热塚圍乏雜高浪 im、“ ；.岷m 爲I反滤过等方法除去液体屮人已分热原质 t物制品、静脉渝上甬注射剤应不含仃 ,1滤翻辭胞辭溜馳短牡爲慫曙棘踽駅湍秽色盼 紹豔枣新勺粉業從丄風

7、器沽；*的，能选样性抑制和杀死它种t物细胞也菌恿廷细亶亡生二型作丿|為蛊自 其抗誌團鉄札 仅对近ft 仃抗菌徘用匸要用r细蘭的分用和戒行柄学调仟细生索：人体肠道内的杲叫细菌如人肠杆繭.能"成维生索b和维生索K町供人体 利丿讥细菌 （2）分解代谢产物：各种细菌具冇不同的師，对物质的分解 利用能力利代谢产物有所不同。利用这些牛化特性來鉴别 细菌，统称为细菌的生化反应。糖代谢产物：糖的分解产物上要是酸类（甲酸、醋酸和 乳酸）、醇类（乙醇、丁醇、乙酰卬基屮醇等）、酮类和气体 （二氧化碳、址气）等。例如人肠杆菌能分解乳糖和匍萄糖, 产酸并产气；而伤寒杆菌则不能分解乳糖，分解葡萄糖只 产酸不产气

8、，据此口J用于细菌的鉴别。蛋白质代谢产物：不同细菌対蛋白质和氨垄酸的分解能 力不同，如大肠杆菌能分解色氨酸产主靛基质：沙门氏菌 能分解胱氨酸等含硫氨宰酸产生硫化总气体，据此可帮助 鉴别细菌。、细菌6.细菌的生理学检wm劇缎删加跖檢 按其用逢可分为以下几类：翩黯驟攏能麟豁澀供大麴缨饑觸/脸船选择培养基：利用不同种爻细菌对乞种化学物质的敏感 程不同,制成有利于选择欲分离细菌而抑制其他细菌生K 的培養慕。例如加入煌绿、川I盐等旳沙门氏、吉贺氐開属 琼脂卅养基（SS培养基），能抑制G+南和夫肠杆菌，看刹 FG 肠道致病菌生匕细菌鉴别培养基：在培养基屮加入某些特定成分(如糖、醇 类的指示剂等)，用丁观察

9、细菌的各种生化反应。厌氧培养基：性厌氧菌须在无氧条件下才t长，因此 需制备与氣隔绝或在细菌生长时达到无氧环境的培养基， 如疱肉培养基。(2)常用培养基的制备程序：制备一般培养基的卞要程序 可分为配料、溶化、调整pH值、澄清过滤、分装、灭菌、 检定、保存等步骤。标本,进行接种。接种环与接种针以白金丝最为理想,也(3)细菌的接种方法：接种细菌采川接种针(环)來沾取细菌可用银钻丝代替，二者均能耐高温且传热快，经火焰灭菌 后冷却快。、细菌曙単帶聲碧爲窈谡齋蚕籍喬续如戈斜嚟昴編川肆用于鉴怎或保菌刊:。以左F持培养垒，右手押 丄总1灭就话冷却挑取必落：左卞立即加取斜而培於 手小指利无名指拔取稔塞，夹捋J手

10、指间。立即将管L通 后将按种甘、仲入斜啲挣内，先从斜面底部到顶端拖条接辭郦喘过基管,以右：瞬罷需fiffl錬倾注平板法:；smr液体标本的细苗计数,取原标本或经适当晞释 鬲棵木1ml,置于直衿9cm无菌平皿内帧注已熔化并冷却至50°C左 右的培养基约1315mL立即混匀，待凝固扁倒置，丁37C培养 1824h,作菌落计数。穿刺接种法：名用于观察细筒动力及某些牛化反山。方法与斜而接 廉蘇辭鵜黜籍魏盧滴盼培养晰叫穿刺至 傻液护糾希、思務#強縈翼卑落，在试管内壁与液血交界处轻轻研细菌 （4）细菌的培养方法：细閑的培养方法侑以卜三种： 般培养法：乂 祿需笊培廉法.仏30137C温箱屮培养泮通

11、需氧或辣性厌单臥 一氧化碳玮弄法：将某此在有一氣化碳环境卜才能住长的细I叙如脑 膜炎球閑）.放在一氧化碳环境中进行培养的方法。丿犬冠培养法： 索氧填阳裂勰除耋懸离及鉴足过用中均需在无氧n勺环境下培石）细齒在培养聶中矗星长现象：将细仙接种到培养畢屮，经37C培 斥1824h,即町出现伙眼町见的牛长现象。在液体培养棊中，可出 现均匀混浊.沉淀及形成菌膜等。若将细倩橫种于周体培养基的衣面. 经培养后町形成单的肉眼对见的细菌集乩称为胡落。歯落的人 小、形状.色洋等伙I细苗种类的爪同而舟 冇助砂|置的柠别（见图3 10）。“i细祐赤固体培养肚表面密集卞长时，參个茵落融介在 起， 称为菌苔。细菌在半同体境

12、养華T生长时,无鞭爰的细茵,沿穿观线 生比 仃鞭E的细苗则沿*刺殘向周西扩散7厶孝状混浊生氏，借此 可判断细講有无动力。图310细閑的菌落形态二、真菌真菌为真核生物，无根、茎、叶的分化，也无叶绿体，以 膜牛或寄牛方式牛长，进行有性或无件繁殖。真菌的结构 比细菌复杂，冇细胞壁、细胞质和细胞核。细胞核具冇核 膜、核质和核仁。真菌的基本形态有单细胞和多细胞两种, 单细胞宾菌呈圆形或椭圆形，常见的冇酵母菌或类酵母菌; 多细胞真菌山菌丝和他了组成，菌丝分枝交织形成俯丝体, 他子是真菌的繁殖结构。真菌种类繁多，形态大小不一。 革兰氏染色为阳性。大多数真菌不需复杂的营养就能生长，适宜生氏温度为 22

13、6;C28C,个长时需耍较高的湿度和氧气。虽繁殖力较 强，但生氏速度较慢。一般需数日至十几日才能心出菌落。 真菌的菌落白单细胞真傭的酵母型菌落、酵母样菌落，多 细胞真菌的丝状菌落三种。二、真菌1 酵母型菌落 类似一般细菌菌落，菌落光滑、湿润、柔 软、致密，显微镜检査对见脚形或椭圆形并牛细胞，酵母 菌及隐球菌多为此种菌落。 2酵母样菌落 外观性状同酵母型菌落。但在菌落表面除 有芽生细胞外，还有假菌丝伸入培养基屮，如白色念珠菌。 3丝状菌落 菌落疏松，呈棉絮状、绒毛状或粉末状，菌 落正面和背面町显示各种不同的颜色，如白色、黄色、纟. 色、紫色或灰色等，常作为鉴定菌种的参考。毛得菌和皮 肤丝状菌等多

14、细胞真菌产生此型菌落。霉菌、酵母菌与细菌在营养琼脂及政瑰红钠琼脂平板上的 菌落形态区别，见表3 6。二、真菌3-6 9B<歸巨曲二沟SifTilh及形?5eniSTHflb细d大卜檢较弋讯期小的带裔在伺一辛祓上主长的88茎尢小言対不一敦-金带Jig丸l2nju在13-甲辰上生长於菌蕩走小耳时不一皱等别債大.左冃一干板匸|T±MAr:-5±T ILOnxi B5?*命为圆W:3S1XKE仆耳农五生廉看务为 国形内是生谀看比旳 IF纺曲S三冷形父体小兩喪2龙大而尽ITHB落炭白.大苗;S用廉JB子丘祯色齐性Bf?I一血忙 ，1乳白盡榻I色多应衣旬平阪上程刊仃单白、京白、超

15、、茨童扶币东呦色，B«I« 1云垃性伯3十昭需半透mjEfl昱拓 开性大陪;TF遍旳透朋険羞"132HS不透口艺fci粹旳成.晏呈如忖至齐.吃倍下可见蔥恢.«?®«aziHB 丝比 t£38列“状、柯扶状、锂自牧、卷1注 WBR-£g百则齐结育語彝年固.不易建起不;8會Srtif不箔會、| 生快理度亠«?»一«鶴快第二节微生物限度检查法 一、染菌限度检验原则二、常用稀释液、试液、指示液及培养基三、细菌、霉菌及酵母菌计数四、控制菌检查五、微生物限度标准染菌限度检验原则规疋的方法与步骤.测

16、定药品中染菌的程度。必须 1供试品抽样、保存及检验最供试胡般按批号随机抽样。每批取检验用量的3借量。吋批抽样应 至少含仃2个以I支小包起怕t 捕样时凡发现右界常的样品丿“ 先抽取有泉问的样品:但机械损伤、明显破裂勢包装.不能抽作样品 I缈可奂絆、发爲、虫蛀及变质的药品，无需再抽样检ft，nJ'f|.接辭讎检劉蠶鬆开翳勰飜叡鍍製曙保存在阴并种药品检验取样杲都仃明确规定。所仃剂型的检验晟必须取自2个 以上的包装单位，大議丸、股剂应取4丸(片)以上样尿固体和、卜固体 制剂 10a：液休制剂检於G为10m：中跖®5剂检为3050cm2o坯重蜒微掘包装的供：“川险吊可酌减，但口服用歸不

17、得 低丁3g.外用药不得低J：5g液体制剂采用原玻何接测左者不得辰丁 6ml,菜用供试液稀不得低J 3mlo、染菌限度检验原则 2检验条件(1) 培养温度：除另有规定外.细菌培养温度为30°C37°C霉閑. 酵母禽培粥蟲度为25“C289,控制菌培养温度为36C土代。取供 试液检验时，应址意摇匀，以便均匀取液。检晶制成供试液后应在 12h内进行检验。(2) 阴性对照：冷约品卫牛检询皿先做阴件対照试验.以确左无菌 扶术的町靠性。方法是：取供试液用的稀誓剂,分别按照细菌数.得 鼬飜鹹驀聲鶯鼬化说明无茵技术皿：否(3) 阳性对照：在规定控制仙检金屮，应做阳性对做试验.I的足检竹

18、试胡对痙制菌生长有无彳ifl I! m "法是:液分为两组，组中加入-定数晴标准对照仙株另纟ii不加对照閑 爲醪鵡酸務察醯醪韻醒辎饑魏黠i黔、染菌限度检验原则国家规定的各种控制菌的标准菌株是：大肠杆菌CMCC(B)44102,沙门氏菌 CMCC(B)50094、铜绿假单胞菌 CMCC(B)10104及金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003o对照用菌液的制备方法是：取相应菌株的 新鲜培养物1取菌环，接种至营养肉汤培养 基内，培养1820h后，稀释至1:106o对 照菌的加入量为50100个。、染菌限度检验原则3供试液的制备 液体中药制剂：取供试吊10ml加入90ml稀祥剂屮，混匀作为

19、1:10供试 况 油剂对加人基量聚山梨酯80：气雾剂以适斌方法使拋射刑导出后，加入 适吊稀释剂混令卩吸取相ilOglOml供试品山稀秤成100ml做供试液； 禽奸I浆或蜂责的介剂及滴眼剂町以原液为供试液(2)固体或半固体中药制剂：取供试AMOg.为0.9%无菌生理盐水100mP|L 加鄴黠駢図鯛锯腺鼬泌制备过叽必则可加III水溶性虫药制剂：取供试品5g(5mn,加入含溶化的无函山盘-80 5g、4 蚀脂酸II汕酣3g、聚山梨怡80 1也混合物的烧杯中，川无闖玻M、搅打炭团丿二 慢慢加入45P0.9%无菌氯化钠溶濟约80ml,逋加边搅拌,仗供试品允分乳化, 榨为供试液(仁20)。不溶J水的膜剂：

20、HZ30-50cm2.剪碎.加桶祥剂100m 1(必耍时可增加稀 释剂)浸泡，加摇，即得。鱼肠溶胶WOt)：取供试胡10g冒含无閑磷酸盐缓冲液(pH68) 100ml的俳形 瓶内.j 45vC±rC水浴中，晁摇，溶解，即得。亠、染菌限度检验原则 (3)含抑菌成分的中药制剂：供试品如干扰控制菌检验， 按以下方法处理后，依法检查。稀释法：将供试液接种入较参的培养基屮，使该供试液 稀释至不具抑菌作用的浓度。离心沉淀集菌法：取规左暈的供试液高速(3000r/min)离 心沉淀30min,齐去上清液，留底部集菌液约2ml,冉稀 释成原规定暈的供试液。如自不溶性药渣，可先低速 (500r/min

21、)离心沉淀5min,取全部门青液，再行集菌处理。薄膜过滤法：取规定最的供试液，置稀释剂100ml中， 摇匀，以无菌操作加入装有直径约50mm.孔径不大于 0.45Mm±0.02pm微孔滤膜的过滤器内，减压抽干后.用 稀释剂冲洗滤膜三次，每次50-100ml,取出滤膜备检。亠、染菌限度检验原则中和法：凡含有硫胺、汞、神类或防腐 剂的中药制剂，可用相应的试剂中和毒牲 后制成供试液。 4.检验报告单位细菌、霉菌、酵母菌数：个(菌落数)/g(ml)o (2)膜剂：个/cm2或“未检出"o (3)控制菌：以1g、1ml或10cm2为单位，报 告“检出”或“未检出” o二、常用稀释液、

22、试液、指示液及培养基三、细菌、霉菌及酵母菌计数细菌、霉菌、酵母菌计数足检测规定单位的非灭菌药品制 剂屮汚染沾菌的数量，是判定药品受到微牛物污染卅度的 重要指标，同时，也是对牛产单位的药品原辅料、设备器 具、匸艺流程、生产环境和操作人员卫生状况进行卫生学 评价的综合依据之一。细閑、霍菌与酵母菌计数均采用平板菌落计数法。由于检 验中细菌计数用营养琼脂在30P37°C需氧培养,霉菌9 酵母菌计数用玫瑰红钠琼脂或酵母浸出粉丿冻葡萄糖琼脂在 25°C28°C需氧培养，厌氧菌和嗜冷菌在此条件下不生心, 有特殊营养要求的菌也受到限制，因而测定数只包括一群 能在上述培芥基上生K的

23、嗜中温、需氧和兼性厌氧茵的菌 落总数。内此，测定时，必须严格按规定的条件操作，以 免产生实验误差。、细菌、霉菌及酵母菌计数 1 培养基与试剂纂魏sb罷嬲訛緞辭気腳緇勰勰糖琼脂培 2检验程序供试i10g（ml）1:10供试液（平皿23个->1:102供试液（平皿 23个）->1:103供试液营养肉汤（'FIHL23个）（培养1824h） ->30935°C倾注培养48h±2h或25C289倾注培养72h±2h菌 落计数T报告。 3操作步骤 （1）供试液制备：族类制剂按前述方法制备1:10供试液。（2）供试液的稀评与注皿：用1ml无苗吸答，吸

24、取混匀的供试液1ml, 魯嘗壁注入装任ml无閑稀释剂的试管心 混成1:100的稀释液二按同 法依次10倍递增稀释成1:1000. 1:10000的稀释液备用。每一次稀释 更换一支1ml吸管。根据对谯试甜污染程咬的俗计,选择23个适宜 稀释丿姑 用一支1ml无菌吸管.按岛倍稀释令低倍稀释的顺序分别取 各桶释度的液体1ml,注入平IUI内。每个稀释度应杵2-3个平皿。三、细菌、霉菌及酵母菌计数倾注培养基：将预先配制好的培养基（细 菌计数用营养琼脂，霉菌、酵母菌计数一 般用玫瑰红钠琼脂，含蜂蜜、蜂王浆液体 制剂另加用丫PD琼脂）熔化，冷却至45°C时, 倾注上述各平皿约15ml,旋摇平皿使

25、混合 均匀。置水平台上待冷凝固。 （4）培养：细菌计数平板倒置于30°C37°C 培养箱中培养48h；霉菌、酵母菌计数平板 于25°C28°C培养箱中培养72h。三、细菌、霉菌及酵母菌计数4菌落计数(1) 般将平板氏菌落计数器上或以肉眼仔细观察点计.不要漏计琼脂圧内和 (2)若平板I仃2个或2个以上的苗落匝迭，肉眼町辨别时仍以2个或2个以上倩 诵订 如 仃丿i状蔺落或花斑样菌落曼爼个氏及丫板LZ被污染.不垃作为汁数 (3)记录冷稀释级平板的菌落数，求取乞稀秤级2或3个平板歯落的均数。当苗 落数415以 ' 同稀秤级2个平板苗落数乂相屋1倍以上时，

26、该祐秤级不血采 丿山X2个T板断落数均在15以卜(:门5)时，毎个半板曲落数的并值允许范也 为04, 17, 2-9, 3-10. 412, 514 615.趙出以匕范由即视 为操作误层，不得作为计数依据。 (4)供试胡按甘养琼脂半板点计细菌菌落数:固体供试骷按玫瑰红钠琼脂平板r仁 *体供试品按攻塊纟i讷1 Im 1数:含蜂蜜及蛙I浆的谷剂按玫塊纟I钠琼脂T板点讼疥离怙数按YPD琼脂¥ 板点计酵母仙谕落数，二者介儿为霉胡及酵母倔数。三、细菌、霉菌及酵母菌计数 5 菌数报告原则细菌宜选取平均菌落数在30300之间的稀释级，毎菌、 酵母菌宜选取平均菌落数在30100Z间的稀禅级作为菌 数

27、的依据。细菌总数报告原则如下： 若仔一个稀释级的平均菌落数在30300时，将该稀释 级的菌落数乘以稀释倍数报告(见表42例1)。(2)若有两个稀释级，其生氏菌落数均在30300,先计算 两稀释级菌落数的比值，比值=若其比值M2,应报告其平均数；若比值2,则以低稀释 级的平均菌落数乘以稀释倍数报告(见表)】、细菌、霉菌及酵母菌计数 Q）若有3个稀释级的平均菌落数均在30300之间时，采 用后2个稀释级计篦级间比值报告（见衣42例4及例5）。（4）若所何稀样度的半均菌落数均大于300,则应该按稀释 度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表42例6）。 （5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30300

28、间，以最接 址30或300的稀释级平均苗落数乘以稀释倍数报告（见表4 2 例 7）。 （6）若所冇稀释度的平均菌落数均少于30,则应按稀释度 总低的平均询落数乘以稀祥倍数报告。但若川原液为供试 液.当1:10稀释级平均菌擢数等F或大于原液时，丿垃以培 养基稀释法测定，按测定结果报告（见表42例8及例9）。培养皋稀释法：吸取供试液（原液或1:10供试液）1ml,注入 5个半皿内（每1UL ?V0.2ml）共作3份，共15个半U1U 每皿注 熔化并冷荃45°C左右的疏脂培养基约三、细菌、霉菌及酵母菌计数 15ml,混匀，冷凝后按规定培养温度与时限培养，计数。 每1ml注入的5个平板的曲落

29、数Z和，即为1ml的菌落数， 共得3组数据，取其平均值乘以稀稗倍数报告。 （7）若各稀释级的平板均无菌落生长或测定数在10个以H 时，报告菌数为V10个/g（ml）霉菌（酵母菌）总数报告原则 与细菌总数报告原则基木相同。如供试品原液平板均未生 长霉菌及酵母菌，报告每临升未检出霉菌及酵母菌。 6 菌落数的报告 （1）菌落数在100以内时，按实有数据报告。（2）閑落数大于100时，采用两位自效数字报告，第三位按 数字修约规则处理。为简便计算，也可用10的指数报告。三、细菌、霉菌及酵母菌计数 7 复试供试品细菌数、霉菌及酵母菌数中任何一项一次检验不合 格，应垂新取2倍包装屋供试品，依法作单项复试两份

30、， 以三次检验结果的均值报告。 8 注意事项 一般悄况下，以营养琼脂平板计数细菌数，玫瑰红钠琼脂 平板计数霉菌、酵母菌数。但如果营养琼脂平板生反了霉 菌、酵母菌，口多于玫瑰红钠琼脂平板的霉菌和酵母菌菌 落数，则以营养琼脂平板的霉菌、酵母菌数报告；反之， 如果玫瑰红钠琼脂平板生长了细菌，且多于营养琼脂平板 的细菌菌落数，则以玫魂红钠琼脂平板的细菌数报告。最4-1桶驿度远徉况塑苗歡很占祝叩岸倂碗映血僧如级伺比tkstt书写10101 (>*>刮1.1362164*7网00l©nOiei.6XLOV刮22WTV2耐1.63775030t>»<3.8XloV

31、何3J2"、2 A27100*和”就27"0。倒423220236>1. 7*>2加0029C>j0Rx8< IO*<*列BP2321962. 2殴00Q20X10 St xox io%*P不可计“4660*Q518150勺COOO m 6. IK 10*.9JV305-730500-3(xno< 3.0XLOV例2J24-12*!VdJ訓0'24> fit 2.4X10肌.22“7"270270 K 2.7X1*创1620*<10-大肠杆萌为肠 随粪檢排出体外。 污染肠道病原体。 品的控制菌之O1 培养基与

32、试剂 普通肉汤培养早.饰 一因此，人肠杆菌被列为光便污染指示菌，足口服药三、细菌、霉菌及酵母菌计数9.检验结论按下列方式巧写检验结论:木品按中国药典2000年版微牛物限度 检查法标准检验，结來符合（或不符合）规定。（三）大肠杆菌检査法胆盐乳糖培养基（BL）、乳糖发酵符或5%乳糖发、责们、曲瘫基、磷酸盐水培养省抱融 养疑、伊红关蓝琼船（EMB）、麦虑沉培养展（MacC）、 撷恢琼脂 （TSI）、欧波氏试剂、屮基红扌旨示剂.V-Pbt剂、帘兰氏染色液°三、细菌、霉菌及酵母菌计数 2.检验程序 供试品供试液BL增菌液（培养1824h） -EMB或MacC¥板（培养1824h） -

33、 左菌落生匕 报告；仃疑似菌落-TSI （培养1824h）忻兰氏染色镜检；或乳糖发 W：或IMViC试验报告。 3.操作步驟 增凿培养；取均匀供试液10ml,加入备妥的100mlBL增|知液内，培并18242（2）分离培养:将I:述带有浹摇匀.再用接种环沾耿12环在EMB戒MacCT板I划线 金培系18 3" < .儿 H r - b1B:1“圆丿”4丢MacCT板I.J.41心吨红，岡形KF，光尿汕fi 、7；冲分离的茵机 常岀现II典型旳因落花EMB平板上呈浊紫色或粉红色九明显昭红色 心.无金加光泽：< MacCT板I早微紫色戒粉色°冈此.以I.彤态均应作为

34、販应啬落 进行鉴定.切勿漏检. 分离平板上无蘭落生K或无疑似葡落生氏，可做出未检出报告。0）纯培养，川按种針从规似苗落中心沾离矗许.接种灯18（4）革兰氏染侔：取I述规似人肠杆繭的纯培养物涂片作唯二氏染色镜检。人肠村湘 7jG -无軀帝杆断，1、细菌、霉菌及酵母菌计数 (5)生化反应乳糖发酵试验：取上述斜面培养物接种于乳糖 发酵管，培养2448h,取出观察结果。大肠杆 菌应发酵乳糖产酸产气，或产酸不产气。产酸者, 以酸性复红为指示剂的培养基就红色；以澳甲酚 紫为指示剂的培养基显黄色。产气者，倒管内有 气池。为避免迟缓发酵乳糖造成假阴性，可选用5%乳糖 发酵管。绝大多数迟缓发酵乳糖的细菌可T24

35、h 出现阳性。三、细菌、霉菌及酵母菌计数 IMViC试验：靛華质试验(I)：収斜向培养物，接种尸蛋白濟水培养棊，埒养2448h 沿管號加入欧波氏试剂数滴.轻微揺动试管，液面丫.玫瑰红色为阳牲 丫试 剂木色为阴性。卬咸红试於(M)：取斜面培养物接种丁碣酸盐葡豹椭蛋门豚水培养届.培养 48h、每1ml培养物屮加入甲摩红试剂1滴摇匀龙即观察结果.早鲜红色或 枯红色为阳件呈黄色为阴性。V-P试验(Vi)：取斜面培养物接种丁磷酸盐葡勺丽蛋|j陈水培养基中，昭养 48h,毎2mlW养液屮加|入VP试剂卬液(6%o棊酚乙醇溶液)1ml.混匀，再加 VP试剂乙液(40%KOH)0.4mh充分振)乳 如任4h内

36、出现红色为阳性,无红 色为阴性。枸椽酸盐利用试4(0)：取斜面培养物，接种 川旷Mil!.-48h、坤悬 ftlftlf 培斥山1绿色变为蓝色时为阳性.坤沸展颜色无改变，无苗苔生长为阴性。人肠杆閑IMViC反应模式为+或-+-o 4结果报吿：完全符介以卜妳呆时，判赵为检出大肠和苗：染色诫检足G无芽胞杆茴：发 酵乳杪产酸产气，或产酸不产气:IMViC试验反应为+或+四、控制菌检查第三节活嘶检查法 一、活轴的检查二、活啡卵的检查图中约材中常见的蛹活嚇的检查螂属于节肢动物门蛛羽纲鳏媾冃,其种类多.分布广.在土壤、水、 运瓠 蛇蠡等条仕不b 受到嫡旳河料 药园廉珈吊 可在如期吋发 病或危害人体健康。药

37、典规眾.药品特别是中成药，不得检出活靖（一）媾的形态特征轴的体形小，多在1mm以卜，肉眼町察见，但需用放大镜或显微镜才 能观察带别。蟻的形状般工卵洌形或椭悯形，无头、胞、腹卑限。幼虫足 汝 成媾足多数为四对。足通常菴六节组成。【I器向能瑞突 出.螯肢懾呈螯钳状.看齿.由23节甌社 须肢节数肉种类而鼻.射5竹组成仃些种类在躯体询端或两側冇1、2对眼。躯体两侧对 称.表面被仃坚硕的儿丁质的板。体表仔刚毛。蛾的形态因种类而异（见图）C螭类与蜘蛛、昆虫（如书虱）.外形比较近似,应注意区 別（见农4-1） o活廟的检查;表41酩臓、融主要形駆那疆伽照蹣）U融（妇®）彳分刻4对d头' 悔腹甥盼4对*触贓和懈二盼艮虫级铀和3弘1对.分头、胸、腹三部分活廟的检查（二）活嫡的检查 1活媾的一般检査方法(1)漂