怎样选择色谱柱及流动相

1、怎样选择高效液相色谱柱高效液相色谱柱怎样选择色谱柱现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗岀色谱柱。反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流岀色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲岀，而极性弱的组份会在色谱柱上有 更强的保留。二、聚合物填料质等样品的分离非常有效。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。三、其他无机填料用途。如石墨化碳

2、也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基 键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基 键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由 但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用， 度，其重要用途与优势尚在进行中。怎样选择填料粒度但不是唯一的因素。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料 短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力、如何保证良好的柱性能与柱寿命名称别名功能基

3、团正相 反相离子对应用Silica-OHV非极性和中等极性以及非离子性有机化合物。SASC1-(CH3)3V在所有的烷基键合相中对非极性化合物保留最弱 ，典型用于中等极性和多官能团化合物.ButylC4-C4H9VV分离肽和蛋白质，保留时间比C8 和 C18 短。MOS C8，-C8H17VV中等极性相中对中等化合物，小肽和蛋白质，Octyl极性药族化合物和环境样品。ODS C18-C18H37VV烷基键合相中对中等极性化合物保留最强。广泛用于药物，甾族化合物，脂肪酸和环境样品.CPS CN ,Cyano-(CH2)3CNVV对极性化合物有独特的选择性，适合应用于正相(propyl分离，当用于

4、反相系统时，其选择性与C8 和Nitrile)C18 不同，在药学领域和复杂混合物的分离中应用广泛。APS NH2-(CH2)3 NH2VV反相中分析糖类和其他极性化合物。弱阴离子交剂 做流动相。正相中与硅胶的选择性机改性剂不同 , 分析芳香族效果很好。Phenyl-(CH3)C6H5V芳香族化合物Diol-(CH2)2O反相时，分离肽和蛋白质。正相时，与硅选择SCX 强阳离子CH2(CH2OH)2性 相似 , 但极性较弱。-(CH2)2C6H4SO3H-V有机碱。2(Amino Propyl)换 ，阴离子和有机酸则应用缓冲剂和有机改性交换SAX 强阴离子 -(CH2)3N+(CH3)3有机酸

5、，核苷和核苷酸交换二、如何解决色谱柱使用过程中出现的问题问题原因表现不同色谱柱间差异填料、键合相不同保留因子（k）,分离因子（a使用期间柱变化柱床破坏柱效（ N）键合相丢失保留因子（k）,分离子（a）硅胶基质溶解柱效（ N）强保留分堆积堵塞保留因子（k），柱效（N）柱外效应系统差异, 进样量大、柱效（ N）分离效果变差柱平衡慢柱超载进样阀与 色谱柱之间、色谱柱与检测器之间管路太长、检测器流通池体积大、接头死体积大等。流速改变温度改变知化合物加醋酸三乙胺；流动相组分改变保留因子（ k） ,柱效变化很小保留因子（k），分离因子（a）保留因子（ k） ，柱效变化很小重新平衡时间不够样品量太大保留因子

6、（ k） ，柱效变化很小保留因子（k）,柱效（N）2进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（最佳连接管应20cm,内径为 0.007 ”);。31.防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200pp m 的叠氮钠以抑制细菌成长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。3使用缓冲溶液后的色谱柱，应用1520 倍柱体积的不含缓冲剂的同种水 一有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成 100%有机溶剂储存。如何选择保护柱怎样选择保护柱，但又不能影响分离分析？这是色谱工作者经常提出的一个问题。通

7、常，在选择保护柱之前首先要考虑的是样品是否清洁。对于大部分分析工作者来说，一只1cm 长的保护柱，那么就应选择 2cm 或 3cm 长的保护柱。保护柱越长，自然所装填的色谱填料就越多，则其越能避免污染物进入分析 色谱柱的机会。当然，随着保护柱的长度加长，样品的保留时间会比使用短保护柱长。一般来说，保护 柱的内径与分析色谱柱的内径相同或相当即可。保护柱的填料装填方式也很重要。目前有薄膜装填法的 保护柱，使用过程很简单方便，而且可以在实验室中进行干装。但是，其最大的缺点是不经济，特别是 针对中国的具体情况，一次性使用相对费用较高。另外，薄膜装填法的保护柱所装填的色谱填料有限，只能提供有限的保护作用

8、；不过也因为所装填的色谱料较少，保护柱的长度也较短， 所以对分析样品的 保留时间的影响也很小。 另一种保护柱结构其实质是缩短了的色谱分析拄， 设计方式上有直连式、手紧 式或整体式。整体式设计是由色谱的生产厂商直接安装在色谱分析柱上的，必须与色谱分析柱一同订货， 可以非常方便地使用，但不能够被修改。直连式结构设计可在任何时候有色谱工作者来安装连接，可以 与任何品牌的色谱分析柱连接使用，而且还可以根据样品的相关情况选择不同的保护柱长度。手上紧即 可。另外从保护柱结构又分为是否可以更换保护柱柱芯。可以降低保护柱的使用成本。大多数人是根据 色谱分析柱的填料选择保护柱的填料，正常情况下可以选择与分析色谱

9、柱一样的色谱填料。但是，根据 实际的分析工作，也可不必与分析色谱柱的填料完全相匹配。对于选择保护柱的原则是：在满足分析分离要求的前提条件下，尽可能的选择较短的保护柱结构，尽可 能选择对分离样品小一些保留性的填料。液相色谱流动相的选择反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂， 再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂， 如甲醇、 乙腈、四氢呋喃等。 极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影 响。一般情况下，甲醇 - 水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低， 是反相色谱最常用的流动相。但 Snyder 则推荐采用乙腈 - 水系统做初始实验， 因为与甲醇相 比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外185205nm 处检测的要求，因此，综合来看，乙腈 - 水系统要优于甲醇 - 水系统。4在分离含极性差别较大的多组分样品时， 为了使各组分均有合适的 k 值并分离良好， 也需采 用梯度洗脱技术。反相色谱中，如果要在相同的时间内分离同一组样品，甲醇 / 水作为冲洗剂时其冲洗强度配 比与乙腈 /水或四氢呋喃 / 水的冲洗强度配比有如下关系：C 乙腈