坐骨神经周围注射可乐定对CCI大鼠促炎性细胞因子表达的影响

1、坐骨神经周围注射可乐定对CCI大鼠促炎性细胞因子表达的影响         11-01-16 16:10:00     作者：刘永峰杨承祥     编辑：studa20【摘要】  目的：观察损伤坐骨神经周围注射可乐定对慢性坐骨神经结扎模型(chronic constriction injury，CCI)大鼠促炎性细胞因子表达的影响，探讨2-肾上腺素受体激动剂是否对已经形成的神经病理性疼痛产生作用。方法：雄性SD大鼠32只，随机

2、分为4组，每组8只。Sham组：只分离皮肤、肌肉，不结扎坐骨神经;Sal组：形成CCI后注射生理盐水组;Clo组：形成CCI后注射可乐定组;Clo+Yo组：形成CCI后注射可乐定和育亨宾组。在注射药物3 d后急性处死动物，取患侧脊髓L4、L5、L6背根神经节采取全自动化学发光法检测TNF-和IL-6浓度。结果：术后从7 d开始CCI大鼠脊髓背根神经节TNF-和IL-6浓度有明显增高。损伤坐骨神经周围注射可乐定能明显抑制CCI引起的脊髓背根神经节TNF-和IL-6的表达(P<0.01)。结论：损伤的坐骨神经周围注射可乐定可以降低促炎性细胞因子的表达。 【关键词】  可乐定;外周注

3、射;CCI大鼠;神经病理性疼痛;TNF-;IL-6AbstractObjictive: To assess the effect of perineural clonidine on the expression of TNF- and IL-6 in the rats with chronic constriction injury(CCI) in the sciatic nerve. Methods：Thirty-two male SD rats were randomly divided into four groups(18 for each):sham group, Sal grou

4、p (CCI+ saline), Clo group(CCI+clonidine) and Clo+Yo group(CCI+clonidine+ yohimbin). The rats were killed 3 days after the injection of medicine mentioned above and spinal cord DRG of L4,L5,L6 were taken for determining the concentration of TNF- and IL-6 of DRG in the rats with automatic luminescent

5、 technique. Results: The rats of CCI group demonstrated steady mechanical and heat hyperaglsia from the seventh day after the operation. There was a remarkable increase in the concentration of TNF-a and IL-6 in DRG from the 7th day after the operation. Perineural injection of clonidine could suppres

6、s the expression of TNF- and IL-6 caused by CCI in the DRG of CCI rats(P<0.01). Conclusion: Perineural injection of clonidine modulates proinflammatory cytokines expression in CCI rats.Key wordsClonidine; Perineural inject; CCI; Neuropathic pain; TNF-; IL-6神经病理性疼痛(neuropathic pain)是指由于神经系统受到损伤或产生

7、病变而导致的疼痛。病理生理学特点主要表现为痛觉的高反应性,如痛觉过敏( hyperalgesia)、痛觉超敏(allodynia)及自发疼痛( spontaneous pain)等。神经病理性疼痛不同于由于组织损伤而导致的急性疼痛,通常呈慢性，可持续数天或数月,是目前临床治疗的难点之一。可乐定( clonidine)是2-肾上腺素受体激动剂,临床上常用来治疗高血压。近年来发现它具有很好的缓解神经病理性疼痛的作用，多用于鞘内、静脉注射或伍用其他药物治疗慢性疼痛。本实验拟在经典的神经病理性疼痛模型CCI上，通过在结扎坐骨神经产生痛敏后，在损伤神经周围注射可乐定，探索外周注射可乐定是否对已经形成的疼

8、痛产生影响,并通过检测促炎性细胞因子变化探索其可能参与的作用机制。1材料与方法1.1材料健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠,体重(200±20) g，由广东医学实验动物中心提供。动物置于(20±1) 和24 h昼夜循环的环境中，能够自由地获取水和食物。所有动物适应环境3 d后投入实验。盐酸可乐定注射液(035K0846)、盐酸育亨宾注射液(015K1444)以及TNF-、IL-6试剂盒均购自美国Sigma公司。1.2方法1.2.1动物分组随机将32只大鼠分为4组,每组8只。Sham组：只分离皮肤、肌肉，不结扎坐骨神经;Sal组：坐骨神经结扎后7 d注射生理盐水;C

9、lo组：坐骨神经结扎后7 d注射可乐定组;Clo+Yo组：坐骨神经结扎后7 d注射可乐定和育亨宾组。1.2.2CCI模型的建立依照Bennet方法，大鼠腹腔注射10 %水合氯醛 (50 mg/kg)麻醉后，在一侧后肢剪毛消毒,在股骨外侧纵形切开皮肤,顺肌纹钝性分离肌肉,暴露坐骨神经,游离周围组织,用3.0丝线结扎坐骨神经中段,使神经外膜轻度凹陷,但不阻断血供,缝合皮肤。假手术组只钝性分离肌肉,暴露坐骨神经,游离周围组织，不结扎坐骨神经。术后7 d以MWT和TWL较基础痛阈下降40 %以上者视为CCI模型成功，投入实验。1.2.3注射药物操作CCI术后7 d，完成行为学测定后，水合氯醛麻醉动物。

10、分别将1 mL生理盐水、1 mL盐酸可乐定注射液(150 g/kg)和1 mL盐酸可乐定注射液(150 g/kg)、盐酸育亨宾注射液(220 g/kg)和生理盐水混合液吸入1 mL注射器。依照先前文献所示实验方法，在大鼠的大转子和坐骨结节间皮肤进针，然后向前内侧前进，沿坐骨神经走行扇形注射药液。在预试验中注射大鼠相同剂量的2 %利多卡因会使95 %受试大鼠产生短暂的单侧肢体麻木，证实药物注射在神经周围且发挥作用。1.2.4TNF-和IL-6的测定32只动物在注射药物3 d后，完成最后行为学测试，使用10 %水合氯醛麻醉动物，断头宰杀。收集4组每个动物患侧的L4、L5、L6的背根神经节(dors

11、al root ganglion，DRG)。所有样本都被收集到1.5 mL的聚丙烯试管(无热源、经DN酶和RN酶处理)，称重后立即放入干冰，随后所有收集的组织都以-80 温度保存以待分析。以每毫克组织10 L的比率加入正常细胞培养液和10 %灭活的牛血清，在冰浴中以超声匀浆器匀浆。然后以1 300×g速度离心，持续15 min，温度为4 。取上清液继续保持4 ，1 500×g速度离心10 min。取上清液采用全自动化学发光法，使用全自动化学发光免疫分析仪对上清液进行TNF-、IL-6含量测定。具体操作分别按TNF-试剂盒和IL-6试剂盒说明进行。重复测定2次，取其均值作为最

12、后结果。1.2.7统计学处理采用SPSS11.0统计软件进行分析，各组数据以均数±标准差(x±s)表示，两组均数间的比较采用t检验，多组均数间的比较采用单因素方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1动物模型行为表现实验期间，所有大鼠均保持良好状态，无明显伤口感染现象。Sham组大鼠活动如常。结扎坐骨神经大鼠左侧(结扎侧)出现舔爪、跛行，安静时患足常保持防御姿势。患侧足趾并拢并呈轻度外翻状。注射可乐定后，舔爪、跛行等行为减轻。2.2促炎性细胞因子变化2.2.1TNF-的变化与Sham组相比，注射药物3 d后， Sal组和Clo+Yo组大鼠背根神经节TNF-浓度明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)。Clo组大鼠背跟神经节TNF-浓度升高不明显，和Sal组、Clo+Yo组相比，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。2.2.2IL-6的变化与Sham组相比，注射药物3 d后，Sal组和Clo+Yo组大鼠背根神经节IL-6浓度明显升高，差异有统计学意义(P<0.01);Clo组大鼠背跟神经节IL-6浓度升高不明显，和Sal组、Clo+Yo组相比，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。表1促炎