流式细胞分析和混合淋巴细胞反应试验中小鼠脾脏的摘取图文解说_第1页
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文档简介

1、流式细胞分析和混合淋巴细胞反响实验中小鼠脾脏的摘取最近老婆要提取脾脏细胞做流式,我就做个简单的解说,也顺便传到网上供菜鸟理解,如果有大神看到这篇文章,也欢送指导.大家一起讨论,把实验做得更好.无论是做混合淋巴细胞反响或者流式细胞分析都要用到脾脏.小鼠的脾脏摘取颇为简单,但有很多同学是第一次接触,所以在此做一个简单的图文讲解.在此讲解不甚详细,具体步骤请同学参照网上已有各种protocol,本文重点在于图文解说,让大家对照图片和其他protocol更好的理解脾脏的摘取.一,小鼠处死后泡酒精2-3分钟,泡久了细胞会缩水,泡的时间短了起不到消毒杀菌的作用三,沿着小鼠左侧肋骨走行方向做切口.准备眼科镣

2、和眼科剪假设3把,眼科剪2把文中笔者使用眼科直镶,摆好小鼠体位,取右侧卧位.四,向小鼠左后背方探查,在皮下很浅的地方可见深红色脾脏.脾脏走行向与肋骨方向近似平行五,用镣子轻轻提起脾脏.脾脏下会连着许多结缔组织,轻轻把它们撕掉.六,完整摘下脾脏,放于培养皿中【事先在培养皿中放入PBS混淋或红裂流式和200目的铁丝网】如下右图所示,银色的为本步骤中使用的铁丝网,白色的为后面要用到的过滤膜七,一把新的眼科剪和一把新的眼科镣新消毒过的.本文所用的为新高压的,把脾脏在培养皿里剪成小块.然后用2.5ml或5ml注射器柄,把脾脏研磨成细胞.研磨过程要轻柔,否那么会损伤脾脏中的细胞.八,研磨至培养皿中不见整块脾脏,只剩一些不能磨碎的结缔组织为止.九,再参加4ml红细胞裂解液,冲洗铁丝网,注射器内芯,并用枪头吹打混匀,裂解5min十,将液体一并转入15ml离心管中,400g,5min,离心H一,弃去上清,参加5ml含10%FBSW1640,重悬,用装有200目的尼龙滤膜过滤(可过滤两次)；尼龙滤膜就是第六步中右图的白色滤膜.十二,滤液离心400g,5min,弃上清,参加1ml含10%FBS勺1640,重悬混匀,稀释50(20+980)倍计数,；至此,

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