中药槐角中染料木素提取新工艺的开发研究

1、中药槐角中染料木素提取新工艺的开发研究项目可行性报告一、项目摘要 染料木素广泛存在于豆科植物及槐角中，具有防治肿瘤、骨质疏松症、心血管疾病、美容，减肥等多方面的药理作用，使得染料木素原料其相关医药产品已成为近年来人们研究与开发的热点，在国内外已有染料木素保健品上市。特别是对骨质疏松症的预防和治疗，已开发为国家中药一类新药进入期临床试验。染料木素的潜在性市场需求量越来越大。然而，令人遗憾的是目前国内还没有一家具有染料木素原料合格的产业化厂家来满足市场的需求；对于生产厂家来说，关键是没有一个能大量生产高纯度的染料木素的生产工艺提供给他们，使其广泛应用由于染料木素原料生产成本过高而受到明显的限制。最

2、近报道的从槐角中提取染料木素的专利工艺为染料木素的大量应用提供了新的渠道，但是，由于其工艺采取醇提取和有机溶剂脱脂的方法，一方面增加了成本，另一方面易造成环境污染。这就迫切要求开发一种符合环保、简单可行、成本低廉的生产工艺，大量生产染料木素,而本项目的实施就能解决这个难点问题。本项目采用水性助溶剂替代醇提取并省去有机溶剂脱脂的方法，将使生产成本由每公斤1400元降到800元以下，且染料木素纯度99%，收率1.2%，年产量可达10吨。使染料木素制备达到高效、环保、高纯度、低成本。通过本项目的研发，拟建立染料木素提取新工艺、制定质量标准和规范化操作规程，形成行业或国家标准，取得技术创新专利。本项目

3、的实施，需购槐角1000吨，可以直接增加农民收益400万。可以推动我省药材种植业和陕西区域经济的的发展，变资源优势为经济优势。随着我公司低成本染料木素原料药的大量生产，其相关医药产品开发研究将越来越多，使得染料木素原料、相关制剂及系列化新产品适应当前消费者追求健康和提高生活质量的目标要求，因此具有良好的市场发展前景，将产生良好的经济效益和社会效益。二、项目的意义和必要性1、项目相关技术国内外发展现状、趋势染料木素(Genistein)又叫金雀异黄素，化学名为5,7,4-三羟基异黄酮。它广泛存在于豆科植物和广豆根、国槐、高丽槐木的果实中，因其结构与雌激素相似，故称之为植物雌激素（phytestr

4、ogens）。研究表明，染料木素具有重要生理功能15，如：抗肿瘤作用，特别是对激素依赖性肿瘤如乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、子宫内膜癌和卵巢癌。植物雌激素染料木素与雌二醇竞争性地结合雌激素受体，从而抑制雌二醇对肿瘤细胞的促有丝分裂，抑制肿瘤的生长。预防和治疗骨质疏松症。预防和治疗心血管疾病。它还具有减少女性的热潮红与绝经期综合证、美容以及减肥等多方面的药理作用，在国内外已开发成保健品上市。由于染料木素有如此重要的生理功能，成了近年来人们研究与开发的热点，特别是对骨质疏松症的预防和治疗，国内已有单位将其开发为预防和治疗骨质疏松症的国家中药一类新药进入期临床试验6。虽然染料木素具有广泛而重要的生理功能

5、，然而，令人遗憾的是染料木素原料药的提取研究却远远落后于它的生理作用和功能研究，使其广泛应用由于染料木素原料药生产成本过高而受到明显的限制。国内外对染料木素提取、制备的研究一直在进行，起初，染料木素的制备大多从植物中提取，刘大川等7用正交实验和单因素实验确定了从大豆胚牙中大豆异黄酮甙的最佳提取工艺，收率为1.4%。闫祥华等8采用多种溶剂浸提法，从大豆中提取染料木素，纯度为95%（HPLC法），人们用不同的方法如生物反应器培养、超滤法、液相色谱法、萃取法等从大豆中提取染料木素8-12。曲丽萍等4最新报道从淡豆豉中制备出染料木素。虽然从大豆中提取染料木素研究报道较多，但是，可能是由于大豆含植物蛋白

6、和油脂太多的缘故，使提取工艺复杂，得到纯品（纯度98%）相当困难，造成其生产成本高、价格昂贵，到目前尚未见其纯品的批量生产上市。也有从其它植物中提取、制备染料木素的报道13-15。如以红车轴草、山葵叶柄(日本产植物萮菜)为原料制备染料木素。Sturtz, M等16建立了从大豆、红车轴草(红三叶草)中用色谱法分离、纯化异黄酮工艺，并用核磁共振光谱确证了异黄酮的结构。Weber J等17公告了一种染料木素的制备工艺，用碱性有机溶剂从以大豆为培养物的百金花属聚多糖孢子体发酵菌液中提取染料木素。也有从植物蛋白乳清、豆科蔬菜蛋白提取物中提取染料木素的报道18-21 。从红车轴草、日本萮菜等原料或植物提取

7、物中虽然也能够得到染料木素，但其工艺中多采用有机溶剂提取和脱色，并用复杂方法纯化，而且产品纯度不高，成本加大，限制了染料木素的大量应用。从槐角中提取槐属甙(俗名槐角甙)和染料木素早在80年代就有人报道22，23，但只是简单提取、纯化、结构分析等实验室研究。以后也陆续有这方面的报道24，25，徐任生等人曾将槐属甙经酸解去糖制备苷元26 ，但至今尚未见工业生产的报道。最近几年对槐树及其产物中的染料木素及相关成分研究的报道越来越多。Tang YP等27研究了从槐树果皮中获得了sophorophenolone和染料木素等13个已知化合物。田中民等28。29建立了实验室提取、纯化染料木素4葡萄糖苷的方法

8、，获得了结晶。他们认为超声波提取方法和回流法相比具有省时、操作简便等优点。Park Youngki等30从日本槐树皮中提取和鉴定了染料木素等四种化合物的。刘晓华31的专利涉及一种含槐实、葡萄籽、皮提取物的组合物及其制备方法。周佳32发明一种从槐角中提取染料木素的方法，它主要包括醇提、水沉、回流、加热水解、结晶等步骤，染料木素的产率在1.0%以上，纯度大于95%，远远高于大豆染料木素的收率。王四旺、王增禄等人33发明了从槐角中提取槐属甙，再将槐属甙酸解成染料木素的制备工艺，获得纯度达到药用级的染料木素单体。其工艺收率为0.54%，每克成本小于10元，使染料木素作为药品原料应用成为可能33,34。

9、现已将其开发成预防和治疗骨质疏松症的国家中药一类新药而进入期临床试验研究。中国食品报2004年08月曾以“临床研究获批染料木素新成果破异黄酮市场僵局”为题进行报道6 。虽然该工艺为染料木素的大量应用提供了新的渠道，但是，由于其工艺采取醇提取和有机溶剂脱脂的方法，一方面增加了成本，另一方面易造成环境污染。目前，我们经过多年研究的从中药槐角中提取染料木素新工艺,获得初步的结果，解决了以往工艺不能解决的问题，新工艺将使染料木素的制备做到高效、环保、高纯度、低成本。我们初步探索的从中药槐角中用水性助溶剂提取染料木素的新工艺,其主要步骤为：水性助溶剂提取洗涤酸解结晶收集结晶干燥成品（原料药）检验。该工艺

10、的初步研究结果表明，其产品染料木素纯度达到99%（HPLC归一化法），已符合国家新药单体药物的纯度要求，收率达到1.2%以上。染料木素水性助溶剂提取法的成本大大小于采取醇提取和有机溶剂脱脂法的成本。本法提取工艺简单易行、稳定、收率高、环保，使染料木素的广泛应用成为可能。陕西省科学技术信息研究所查新中心“用水性助溶剂，从中药槐角中经浸提、沉淀、洗涤、酸水解、水洗后结晶，制备染料木素和染料木素的生产规范化操作规程”进行检索，分析比较：“除国内相关文献28、32、33、35提及制备工艺中酸水解一个步骤和文献49对染料木素原料药及其胶囊制剂进行了质量标准研究外，其它国内相关文献未见与查新项目“中药槐角

11、中染料木素提取新工艺的开发研究”查新点内容相同的报道。在外文文献中未见提及与查新项目“中药槐角中染料木素提取新工艺的开发研究”查新点内容相同的报道。随着染料木素生产及相关新产品研究的进展，国内外对染料木素应用市场也在不断扩大，呈现良好的发展前景。国外染料木素研究越来越热，仅在PubMed网上输入genistein一搜即可搜到7千余篇与染料木素有关的研究论文。此项研究之热，由此可见一斑。作为试剂级的染料木素，国外早于国内。Sigma公司出售的来源于大豆的染料木素（纯度为98%），2000年价格为35美元/5mg/1个包装，2006年为44.2美元/5mg/1个包装。化学合成品的价格为为22.7美

12、元/5mg/1个包装（见sigma试剂目录）。北京中医药大学生化室已从大豆中提取染料木素，纯度为98%，已作为纯品试剂出售，40元（RMB）/mg。我国近年大豆异黄酮及染料木素的开发速度甚快，山东三维、石家庄华北制药、哈高科豆企食品公司、清华大学生物科学和技术系等几十家企业生产大豆异黄酮。估计生产能力达200吨，并有部分出口。产品纯度一般在1040，高的达95。其中大豆苷50，染料木苷40。低纯度产品市场价1500元kg。高纯度的染料木素主要由中间体生产厂家进行进出口贸易。目前上市商品主要是经卫生部批准的多种功能性保健品如金转停胶囊（每粒为100mg，内含genistein 1418mg，15

13、元/粒）、安睡美胶囊、天雌素大豆异黄酮营养片、天能中年宝片等产品，其主要成分均是染料木素或富含染料木素的原料6，36。中国药网（）报道美国的大豆异黄酮（含染料木素）的功能性食品已达30余种，如Genistein form soy tabs， 7.92美元/60片。美国国际著名的玉米深加工企业CARGILL推出了大豆异黄酮的饮料和口嚼片。随着科学技术的发展，新技术的不断出现和染料木素需求的大量增加，必将促进染料木素制备工艺向环保、简单、易行、稳定、收率高的方向发展。总之，染料木素提取工艺技术已取得进展，制备工艺在不断完善，其成本亦越来越低，质量越来越好，随着我公司低成本染料木素原料药的大量上市，

14、其相关医药产品开发研究将越来越多，相信在不远的将来将产生巨大的经济和社会效益，同时它将对陕西区域经济的发展起到促进作用。2、项目的目的、意义（1） 现有的染料木素生产工艺限制了染料木素的广泛应用，急需建立一套高效、低成本的现代化生产工艺；它将促进中药提取向规范化、标准化、高技术、现代化、产业化方向发展经国内外大量研究证实，染料木素具有广泛和重要的生理功能，如防治骨质疏松症、心血管疾患病，抗肿瘤，减少女性的热潮红与绝经期综合症，美容，减肥等，使得染料木素原料、相关制剂及系列化新产品适应了当前消费者追求健康和提高生活质量的目标要求，因此具有良好的市场发展前景。但是由于染料木素制备工艺的限制，使得染

15、料木素始终无法大量生产，且生产成本居高不下，为此有必要开发出一种符合环保、简单可行、成本低廉的生产工艺，来大量生产染料木素,为药品和功能性食品的开发提供条件。而本项目的目的就是为了解决这个难点问题。本项目采用的水性助溶剂提取工艺替代原有的有机溶剂提取工艺，大大减少了原来有机溶剂造成的环境污染的可能。我们拟对从槐角中用水性助溶剂提取染料木素的新工艺进行系统研究，然后进行中试放大研究，按照中药原料药的要求建立质量标准，按照GMP和相关企业规定建立规范化操作规程，并进行连续三批中试进行验证，合格后进行工业化大生产，并建立一个完整的、有效的质量保证体系，使每批都能生产出合格产品。建立染料木素制备的最佳

16、工艺，为公司将来申报和生产染料木素原料药以及开发相关新产品奠定基础，满足市场对染料木素的需求，并能促进中药提取向规范化、标准化、高技术、现代化、产业化发展（2）本项目成功实施，将带动陕西区域经济的发展，变资源优势为经济优势，促进社会和谐发展本公司研究后发现，陕西地区槐角中染料木素的含量较高，且槐角自然资源丰富，具有很好的开发利用价值。我国西部地区属于半干旱地区，槐树耐干旱、易生长，是很好的木材资源，因此种植面积大，槐角产量大，但目前槐角尚无深加工产品。本项目是从中药槐角中提取染料木素，其槐角产于资源丰富的陕西广大农村地区。初步概算，需要年收购槐角近1000吨，可以直接增加农民收益近400万元，

17、相当于农民种植小麦近万亩的收入。该项目的有效实施，充分利用当地的资源优势，进行深加工，能提高农产品附加值，有利于农民增加收益，脱贫致富，调动农民的积极性，可以推动我省药材种植业的发展，变资源优势为经济优势，带动陕西区域经济的发展，促进社会和谐发展3、项目的必要性经国内外大量研究证实，染料木素具有广泛和重要的生理功能，引起人们的普遍关注，染料木素在药品、功能性食品、化妆品的研究与开发方兴未艾，染料木素的潜在性市场需求量越来越大，但目前国内还没有一家具有染料木素原料药合格的产业化厂家来满足市场的需求；对于生产厂家来说，关键是没有一个能大量生产高纯度的染料木素的生产工艺提供给他们，这就迫切要求对现有

18、的粗放性的生产工艺进行改良和优化，或者有必要开发一种符合环保、简单可行、成本低廉的生产工艺，大量生产染料木素,为药品和功能性食品的开发提供条件。 而本项目的目的就是为了解决这个难点问题。拟采用水性助溶剂提取新工艺取代了原有的有机溶剂提取工艺，减少有机溶剂可能造成的环境污染。按照中药原料药的要求建立质量标准，按照GMP和相关企业规定建立规范化操作规程，建立染料木素制备的最佳工艺，并进行连续三批中试进行验证，合格后进行工业化大生产。为公司将来申报和生产染料木素原料药以及开发相关新产品奠定基础，并满足市场对染料木素的需求。参考文献:1）谢明杰,高爽,邹翠霞,刘长江,金凤燮.大豆异黄酮生理功能的研究进

19、展J.食品与发酵工业,2004;30(5):94-982）王多宁,王增禄,王四旺.染料木素及其生物活性J.中草药,2003;34增刊：309-3113) Masayoshi,Yamaguchi,Shizuok,(Japan).Composition for stimulating osteogesis and prevnting reduction of bone salt P.US:5935996 10/19994）曲丽萍，宓鹤鸣，范国荣，位华,孙亮.高速逆流色谱法分离制备淡豆豉中大豆素和染料木素J.中草药，2006;37(3):375-3775）唐传核,彭志英.大豆异黄酮的开发与应用前景J

20、. 西部粮油科技, 2000;25(4):35-396）谢玲.临床研究获批,染料木素新成果破异黄酮市场僵局. 来源：中国食品报2004年08月13日7）刘大川,汪海波. 大豆胚牙中大豆皂甙、异黄酮的提取工艺研究J. 食品科学, 2000;21(10):28-318）闫祥华，刘大星，何传民.大豆异黄酮的提取工艺及其对血凝调节的影响J. 食品科学, 2001;22(5):70-739）Robert Mark Wenneth,Kenneth C.Sink,Tyler T.Ames et al.Method and apparatus for growing plant cellsP.US:58858

21、26.3/199910）Eric T. Gugger, Daniel G. Dueppen. Production of isoflavone enriched fractions from soy protein extractsP. US: 5792503 .11/1998 .11）Bolin cheng, John A Yegge, David T. Bailey, Jamesl. Sullivan. Process for the isolation and purification of isolavonesP. US: 5679806. 10/1997 .12） .染料木素的制法P

22、.Japan:特開平10-99089.10/199813）杨振萍,魏莎莎,边清泉. 微波法提取红车轴草中染料木素工艺的研究J.西南科技大学学报,2005;20(2):67-69 14）薛存宽.一种从红车轴草制备红车轴草异黄酮的制备工艺P.CN1693306 11/2005 15）Sturtz,M.,Lander,V.,Schmid,W.,Winterhalter,P. Preparative isolation of isoflavones from soy and red cloverJ. Molecular Nutrition & Food Research, 2006;50 (4

23、/5):356-361 16）Suzuki T, Yamaguchi M. Purification of active component in wasabi leafstalk (Wasabia japonica MATSUM.) extract in stimulating bone calcification in vitroJ. Journal of health science,2004;50(5): 483-490 17）Weber J Mark,Constantinou Andreas, Hessler Paul E. A Process of preparing genist

24、ein. P WO9706273 2/199718）J.申 M.A.鲁西,B.A. 布赖恩,M.C. 奥示雷德. 蛋白质技术国际公司. 富含配基异黄酮的植物蛋白乳清及其生产方法P.CN:1214871A.4/199919）Barbara A. Beryan, Margann C. Allred Mark A Roussey. Two-step conversion of vegetable protein isoflavone conjugates to agluconesP. US: 5827682.10/1998 20）B.A. 布赖恩. M.C. 奥尔雷德. 富含配基异黄酮的植物蛋白提取

25、物和蛋白物质, 高染料木黄酮和黄豆苷原含量的物质及其制备方法P. CN :CN1183475A. 6/199821）Dobbins Thomas A. Process for isolating genistin from mixtures of soy isoflavonesP. WO:03082888 10/2003 22）刘嘉森,丁建弥,黄梅芬.槐角有效成分的研究J 中草药,1980; 11(4):145-14623）何兴林,徐去翔,薛慧中,王文华,周志仁,程培元,樊梅芳. 槐角的避孕成分研究J. I. 生殖与避孕, 1982;2(2):23-2724）季宇彬主编.中药有效成分药理与应用

26、M.第一版. 哈尔滨: 黑龙江科学技术出版,1995:149-150, 207-20825）黄文哲, 段金廒, 李正亮. 怀槐的化学成份研究IJ.中国药科大学学报, 2000;31(1):8-1026）徐任生,陈仲良主编.中草药有效成分提取与分离M.第二版.上海:上海科学技术出版社,1983:111.224.32527）Tang YP, Hu J, Wang JH, Lou FC A new coumaronochromone from Sophora japonicaJ. Journal of asian natural products research, 2002;4 (1): 1-5

27、28）田中民,万明习.中药槐角中槐角苷超声提取工艺的研究J. 中国药学杂志. 2003,38(5).-351-353 29）Tian, Zhongmin; Wan, Mingxi; Wang, Zenglu; Wang, Bo.The preparation of genistein and LC-MS/MS on-line analysisJ.Drug Development Research, 2004; 61(1):6-1230）Park Youngki; Lee HakJu; Choi DonHa; Kwon YeongHan; Oh JungSoo Extractives from

28、the bark of Sophora japonicaJ. Mokchae Konghak = Journal of the Korean Wood Science and Technology, 2002;30 (3): 42-47 31）刘晓华.一种含槐实、葡萄籽、皮提取物的组合物及其制备方法P.CN1634359 7/200532）周佳.染料木素的提取方法P.CN1465571 1/200433）王四旺,王增禄,王建波.染料木素制备工艺P. CN :ZL02123450 7/200534）王四旺,王增禄.中药新原料药一类-染料木素申报资料2002（内部资料）35）索志荣.槐角中染料木素

29、的提取、改性和三种中药的色谱分析。西北大学化学、分析化学专业硕士论文，2003.36）henny1284 (优优-樱桃仙)。植物提取物市场分析。来源：医药资源。小优优医药化工资源网 37）中药提取物：急需产业化的调控和规范38）杨学武.国槐扦插育苗技术研究J.甘肃林业科技，1996，2；34-3539）需朗然，傅坤俊，何善宝.黄土高原豆科植物区系的研究J.西北植物学报，1992;12（2）：149-15340） 郑占虎, 董浙宏, 佘靖主编. 中药现代研究开发与应用M. 第5卷.第一版. 北京: 学苑出版社, 1999:4465-447441）国家医药管理局中华本草编委会.中华本草(4) M.

30、 第一版. 上海:上海科学技术出版社, 1999: 4.646-4.64943）中华人民共和国药典M. 槐角A.一部.2000版.29244）袁昌齐主编.天然药物资源开发与利用M.第一版. 南京:江苏科学技术出版社,2000: 0435-043945）植物提取物产业前景分析2006年10月20日 18:56 报告在线.46）陕西特产-秦川国槐.特色特产网47）五泰信息咨询有限公司.染料木素市场调研报告.48）五洲咨询网.染料木素市场调研报告49）成果名称：染料木素原料药及其胶囊制剂 R977 R965 完成单位：第四军医大学；出处：中国科技成果数据库 项目年度编号：04012700202、攻关

31、研究成功后对促进行业、产业发展的作用（1）建立了一套高效、低成本的现代化染料木素生产新工艺,使染料木素的广泛应用成为可能，促进中药发展经国内外大量研究证实，染料木素具有广泛和重要的生理功能，如防治骨质疏松症、心血管疾患病，抗肿瘤，减少女性的热潮红与绝经期综合症，美容，减肥等，使得染料木素原料、相关制剂及系列化新产品适应了当前消费者追求健康和提高生活质量的目标要求，因此具有良好的市场发展前景。但是由于染料木素制备工艺的限制，使得染料木素始终无法大量生产，且生产成本居高不下，为此有必要开发出一种符合环保、简单可行、成本低廉的生产工艺，来大量生产染料木素,为药品和功能性食品的开发提供条件。而本项目的

32、目的就是为了解决这个难点问题。本项目采用的水性助溶剂提取工艺替代原有的有机溶剂提取工艺，大大减少了原来有机溶剂造成的环境污染的可能。项目完成预计染料木素年产量10吨，生产成本为800元/公斤，市场价格为1500元/公斤，年销售额为1500万元，其中年创汇约120万美元。染料木素国外主要用户为大型制药公司、保健品生产厂，年需求量约4050吨，并且保持20%的年增长速度。预计到2010年，该类产品的国外原料市场容量将达到1.5-2亿美元。主要销往法国、美国、日本、韩国、印度等国。国内市场也随着染料木素相关制剂的研究开发不断扩大。本项目的实施，将未申报和生产染料木素原料药以及开发相关新产品奠定基础，

33、满足市场对染料木素的需求，造福于人类。（2）促进中药提取向规范化、标准化、高技术、现代化、产业化发展在由中国医药保健品进出口商会组织召开的“植物提取物产业国际化报告会”上45，中国医药保健品进出口商会植物提取物分会副秘书长张中朋介绍说，我国植物提取物产业的发展现状是：产业发展迅速，产品出口增长快；生产经营企业多，市场竞争激烈；产业技术装备水平参差不齐，高新技术企业和作坊式工厂并存；部分企业走向国际市场，产业发展前景看好。中药提取物是从中药产业中分化出来的新兴领域，目前我国中药提取物经数年的发展，已具备一定的产业规模，专业生产企业有200家以上，不少中成药、精细化工等生产企业也生产提取物，经营企

34、业有200-300家，出口比例已超过中药，并呈现上升趋势。但经营规范普遍较小，最大不超过千万美元。一方面，更多的小企业由于资金、人才、信息的缺乏，技术和装备较为落后，加之中药提取物是从中药产业中分化出来的特点，以及中药提取物质量研究和技术标准的建立是一个持续的、需要不断完善的过程，技术成熟往往滞后于市场的要求特征，另一方面，提取物研制、生产、流通等各个环节，从宏观到微观尚缺乏必要的管理规范，产品品种多、规格杂、生产企业多而小、经营渠道杂、经营秩序混乱、产品质量良莠不齐，造成目前绝大多数的植物提取物没有国家标准或行业标准37，企业多以合同中的质量条款作为产品交付的依据，产品质量的检测方法较为混乱

35、，给生产经营带来了障碍，同时给产业的发展提出了挑战。因此，中药提取急需向规范化、标准化、高技术、现代化、产业化方向发展，这也是本项研究的目的之一。课题的目的旨在按照GMP和相关企业规定建立规范化操作规程，建立一个完整的、有效的质量保证体系。在研究中建立的质量标准和规范化操作规程首先制定企业标准，然后不断完善，最终形成行业或国家标准。为行业中生产实现技术现代化、工艺工程化、质量标准化起到一个有益的带头作用，保证和提高产品质量，规范行业经营管理秩序，对于进一步扩大出口，促进行业的健康发展，中药现代化都有重要意义。（3）本项目成功实施，将带动陕西区域经济的发展，变资源优势为经济优势，促进社会和谐发展

36、自主开发的从槐角中提取染料木素项目，其槐角产于资源丰富的陕西广大农村地区。该项目的有效实施，是充分利用当地的资源优势，进行深加工，提高农产品附加值，有利于农民增加收益，脱贫致富，调动农民的积极性，可以推动我省药材种植业的发展，变资源优势为经济优势。初步概算，本项目的实施，需要收购槐角近1000吨，可以直接增加农民收益近400万元，相当于农民种植小麦近万亩的收入。槐树本身的生态效应和长期的经济收益也是非常显著的。本项目不但是国家和地方的重点支持项目，而且具有良好的出口创汇前景，同时对于带动区域经济的发展具有较大的推动作用，从而会产生良好的经济效益和社会效益。三、项目的基础条件1、已经取得的与本项

37、目相关的阶段性技术成果经过大量的实验研究，已初步完成了从中药槐角中提取染料木素的初步实验室研究和中试实验（研究资料见附件中染料木素中试实验部分步骤HPLC检测图谱），建立了初步的染料木素提取工艺并设计了本项目拟进行的工艺流程：原料筛选、去杂烘烤、干燥粉碎水性助溶剂提取，过滤 滤液 滤渣弃去 浓缩液 酸水解液静置分层沉淀 上清弃去加水洗涤沉淀至中性，离心收集结晶染料木素粗品乙醇重结晶，离心收集结晶染料木素结晶烘干，粉碎，过筛染料木素（HPLC检测，含量98%以上） 2、实施本项目的工作保障条件，相关的基本建设、技术改造、技术引进、国际合作等落实情况，其它必要的支撑和配套条件，如基地、示范点、技术

38、或工程依托等落实情况课题申请单位泽慧公司是一家电子研发和生产的高新技术企业，他还具有丰富的投资经验和项目管理经验。公司正在转投生物医学和中医药的研发，引进人才和项目。其中包括投资本项目和引进王增禄的研究团队。该团队主要从事染料木素制备工艺及其质量标准的研究工作。发明了一种由槐角中提取染料木素的制备工艺，经该工艺制备的染料木素符合国家中药新药一类单体药物的标准。他们完成的染料木素制备工艺试验的新药申报资料和第四军医大学染料木素新药申报资料申报国家中药一类新药已获得一期临床试验批文(原料批件号2004L01547，胶囊批件号2004L01548)，现正在进行二期临床试验。该项成果已获得国家专利（专

39、利号CN1465570）（见附件一）。发表与染料木素有关的第一作者中英文学术论文4篇。该团队对正在研究一种高效、环保、高纯度、低成本的从中药槐角中用水性助溶剂提取染料木素的新工艺,经过大量的实验研究，已初步完成了从中药槐角中提取染料木素新工艺的初步实验室研究和中试研究（研究资料见附件中染料木素中试实验部分步骤HPLC检测图谱 ），建立了初步的染料木素制备工艺（见技术路线图部分）。本课题的协作研究单位西安医学院科研中心，该中心是全校科学研究的平台，目前建有药物研究室、细胞培养室、动物实验室、分子生物学实验室。具有药学药学研究的基本仪器设备和条件，如中药粉碎机、不锈钢提取浓缩设备、冷冻干燥机、旋转

40、蒸发仪、超声提取仪、离心机、WATERS高效液相色谱仪、岛津紫外分光光度计等。课题组成员具有多年的中草药研究基础，曾承担和参与多项国家自然科学研究基金项目和省厅级科研项目的研究。本课题的合作研究单位西安邦泽医药科技有限公司，从事新药相关项目的开发研究、项目管理，具有丰富的管理经验，在本项目中主要进行项目管理和协调。课题申请单位泽慧公司已准备了相应的配套自筹资金（详见附件自筹资金证明）。3、技术研究队伍组织情况，包括产、学、研结合，组建项目联合体等情况（1）技术研究队伍的组成：本项目研发的技术研究队伍由公司与西安医学院联合组成，其中博士2人，硕士3人，高级职称6人，详见下表。如此组成强有力的科研

41、队伍以保证课题的顺利完成。（2）项目主要负责人简介王增禄 男，1957年生，为泽慧有限公司科研部染料木素研究课题负责人，原第四军医大学药学系生物技术中心高级实验师，负责课题的总体设计和实验指导。2006.9-现在 泽慧有限公司科研部染料木素研究课题负责人，西安邦泽医药科技有限公司技术顾问。主要从事从中药槐角中染料木素制备工艺及功能研究工作。2005.9-2006.9:第四军医大学药学系生物技术中心高级实验师，主要从事可溶性腺苷酸环化酶的研究和染料木素研究工作。20029-20058：美国德州大学西南医学中心访问学者。在德州大学西南医学中心肾内科、水盐代谢和临床研究中心等实验室进行可溶性腺苷酸环

42、化酶的研究，在美国生理杂志上发表论文一篇。2001.2-2005.12西安交通大学生命科学与技术学院攻读医学生物工程专业博士学位，完成了人源可溶性腺苷酸环化酶的克隆、表达、纯化及其功能研究的博士论文并获得博士学位。19997-20028第四军医大学药学系生物技术中心，高级实验师。主要从事染料木素制备工艺及其质量标准的研究。发明了由槐角中提取染料木素的制备工艺，撰写了染料木素原料药申报资料5“染料木素制备工艺及其研究资料”附件1“染料木素化学结果的确证及文献资料”；参加染料木素原料药和胶囊“骨克欣”申报资料中14份资料的撰写和实验工作。现已作为国家中药一类新药而进入二期临床试验(原料批件号200

43、4L01547，胶囊批件号2004L01548)。该项成果已获得国家专利（专利号CN1465570）（见附件一）。发表第一作者科研论文2篇。19982-19992：美国德州大学西南医学中心进修肌肉收缩蛋白轻链激酶的制备和纯化，访问学者1993.9-1998.1：第四军医大学药学系生物技术中心，实验师、高级实验师。1）参加总后八五攻关课题（91C041-0156）：重组改构人突变型肿瘤坏死因子(rhmTNF)的实验研制。该药于2003年3月取得国家生物制品类一类新药证书和生产证书，获得陕西省科技进步一等奖（署名第四）；2） 完成了国家八五科技攻关项目猪胰脏多酶联产(NO.85-08-05-02)

44、的实验研究课题。该项目96年初已通过国家科委的验收。共发表30余篇，其中与该课题相关的论文6篇。1999-2002陕西省生化学会兼职业务秘书。近期发表论文及与本课题有关的论文：（1）Z.L. Wanga, , , J.Y. Sun, D.N. Wang, Y.H. Xie, S.W. Wang, W.M. Zhao.Pharmacological studies of the large-scaled purified genistein from Huaijiao (Sophora japonica Leguminosae) on anti-osteoporosisPhytomedicine

45、.2006,13（9-10）：718-723（2）Geng WD, Wang ZL, Zhang JN, Reed BY, Pak CY, Moe OW. Cloning and Characterization of the Human Soluble Adenylyl Cyclase (hsAC). Am J Physiol Cell Physiol. 2005, 288:C1305-1316（3）Xue X, Wang ZL, Yan Z, Shi J, Han W and Zhang Y. Production and purification of recombinant human

46、 BLyS mutant from inclusion bodies. Protein Expr Purif. 2005,42(1):194-199（4）王增禄，孙纪元，王多宁，王剑波，谢艳华，王四旺，赵文明.槐角染料木素的结构鉴定及预防骨质疏松症的药理研究. 中国药理学通报, 2004, 20(5):580-584（5）王增禄，王多宁，王剑波，孙 刚，赵小兵，王四旺，赵文明. 槐属苷的紫外分光光度法检测. 第四军医大学学报, 2003,24(14):1320.（6）王增禄，王多宁，王剑波，赵小兵，孙刚，王四旺，赵文明. 槐属苷和染料木素的高效液相色谱法检测.中华现代临床医学杂志, 2004,

47、 2:1926-1928（7）Tian, Zhongmin, Wan, Mingxi, Wang, Zenglu;,Wang, Bo.The preparation of genistein and LC-MS/MS on-line analysis. Drug Development Research. 2004, 61(1):6-12（8）王多宁,王增禄,王四旺.染料木素及其生物活性.中草药,2003,34增刊：309-311（9）Wang ZL，Zhang YQ，Lu J, Ru BG, Zhao WM. Simultaneous extraction and purification

48、of eight diverse enzymes and trypsin- inhibitor from porcine pancreas. J Fourth Mil Med Univ.2001, 22(19):1729-1734.王多宁，男，1956年生，西安医学院科研中心主任，高级实验师。第四军医大学医学实验技术专业本科毕业。长期从事于天然产物及抗氧化剂药物研究，曾承担和完成了3项国家自然科学基金项目和1项军队85攻关课题分课题研究，主持和完成一项卫生厅科研课题。获军队科技进步二等奖1项，陕西省科技进步二等奖1项，陕西科技进步三等奖1项，陕西省教育厅高等学校科学技术奖三等奖1项，获国家发明

49、专利1项。发表与本课题有关的论文有：（1）王多宁,王增禄,王四旺.染料木素及其生物学作用.中草药,2003,34(增刊):309-311（2）王增禄,王多宁,王剑波,孙 刚,赵小兵,王四旺,赵文明.槐属苷的紫外分光光度法检测. 第四军医大学学报,2003,24(14):1320（3）王多宁,张小莉,杨 颖 等.百合多糖对羟自由基的清除作用.陕西中医学院学报，2006,29(4):53-55（4）Z.L. Wanga, , , J.Y. Sun, D.N. Wang, Y.H. Xie, S.W. Wang, W.M. Zhao.Pharmacological studies of the la

50、rge-scaled purified genistein from Huaijiao (Sophora japonica Leguminosae) on anti-osteoporosisPhytomedicine.2006,13（9-10）：718-723（5）王增禄,孙纪元,王多宁 等.槐角染料木素的结构鉴定及抗骨质疏松的药理研究中国药理学通报，2004,20(5):580-584（6）王增禄,王多宁,等. 槐角苷和染料木素的高效液相色谱法检测.中华现代临床医学杂志,2004,2(12):1926-1928（3）组织实施本项目由泽慧负责，与西安邦泽医药科技有限公司和西安医学院（科研中心）

51、共同组织实施，分工协作。具体组织实施如下：1）项目协作分工：999999 西安医学院（科研中心）（协作单位）负责实验室研究西安邦泽医药科技有限公司（合作单位）负责项目管理与协调西安泽慧电子技术有限公司项目负责（2）项目研究、生产组织及劳动定员：项目实施及劳动定员实验室研究6人中试8人生产10人研究资料管理办公室1人项目管理报批 1人4、完成项目所需自筹资金、银行贷款等项资金落实情况完成项目所需自筹资金由项目申请单位泽慧公司负责。该单位已准备了相应的配套自筹资金（详见附件自筹资金证明）。本项目暂不需要银行贷款。四、项目攻关总体目标，实施年限，具体的考核指标（含主要技术经济指标）及年度计划安排1、

52、项目攻关总体目标通过本项目攻关研究，建立优化的染料木素制备新工艺；制定染料木素质量标准；制定染料木素技术标准操作规程，最终实现染料木素的生产达到环保、高技术、高质量、低成本、规范化，产生良好的经济和社会效益。本项目预期将获得国内专利1-2项2、实施年限本项目计划实施年限为两年，2008年1月-2009年12月。3、具体的考核指标（含主要技术经济指标）（1）主要技术指标：本课题研究主要技术指标：获得1.优化的染料木素提取新工艺；2.染料木素质量标准；3.染料木素技术标准操作规程；4.染料木素生产新工艺的相关专利。（2）主要经济指标：本项目研究实施过程中，在使项目技术得到大量改进的同时，也将产生一

53、定的经济效益。项目研究实施过程经济效益预测如下表所示。经济效益预测表标 单位：万元 经济效益新增销售额新增税金新增利润创汇(万美元)2009年5075125552010年300457540合计35052587545.54、年度计划安排本项目计划二年完成，计划进度与考核指标如下：第一阶段：2008.12008.12目 标：完成染料木素实验室研究（优化工艺条件，建立工艺）并总结，拟中试方案并进行中试；建立染料木素检测方案。考核指标：染料木素实验室新工艺和检测方法的建立；制备出小量高纯度（99%，HPLC法）的染料木素第二阶段：2009.12009.12目 标：初步完成中试，并总结获得最佳中试生产工

54、艺条件，建立中试新工艺；建立中试生产质量标准和操作规范；验证中试工艺和质量标准及操作规程；工业生产，并对课题进行总结；申报相关专利。考核指标：染料木素提取新工艺的建立；染料木素质量标准的制定；染料木素技术标准操作规程；申报染料木素生产新工艺专利；发表论文2-3篇；每批能制备出几十公斤的高纯度（99%HPLC法）染料木素。五、项目的主要研究内容，课题设置方案及与其他单位合作方案落实情况1、主要研究内容本项目主要研究内容有：染料木素提取新工艺的实验室优化研究； 染料木素中试研究；染料木素质量标准研究；制定染料木素技术标准操作规程；申报创新专利。通过本研究，使染料木素的生产达到环保、先进、低成本、高

55、质量的高科技生产水平，形成行业和国家标准，同时产生良好的经济和社会效益。2、课题设置方案本课题设置方案拟分为以下部分1）、研究初步拟定技术路线为：课题研究的基本流程：实验室工艺优化研究中试放大研究建立质量标准建立规范化操作规程连续三批中试进行验证工业化生产申报新工艺专利。染料木素制备工艺研究路线拟定如下：染料木素制备工艺流程图：原料筛选、去杂烘烤、干燥粉碎水性助溶剂提取，过滤 滤液 滤渣弃去 浓缩液 酸水解液静置分层沉淀 上清弃去加水洗涤沉淀至中性，离心收集结晶染料木素粗品乙醇重结晶，离心收集结晶染料木素结晶烘干，粉碎，过筛染料木素（HPLC检测，含量98%以上） 2）、在研究中制定质量标准和技术规范化标准操作规程，制定企业标准，然后不断完善，最终形成行业或国家标准。3）、在实验室和中试研究的同时，对已形成的工艺进行自主创新专利申请，力争早日获得知识产权保护。3、与其他单位合作方案落实情况项目申请单位泽慧公司与合作单位邦泽医药科技公司、西安医学院在申报之前已签订合作研究协议，详见合作协议