细菌总数测定操作规程

1、精品文档细菌总数检测操作规程1原理试样经过处理，稀释至适当浓度，在一定条件（如使用特定的培养基，在温度30c 土1C培养72h±3h等）下培养后，所得1g （mL）试样中所含细菌总数。2试剂与仪器2.1 所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000 nL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、 接种针、移液器2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅2.3 所用试剂和培养基营养琼脂取营养琼脂32.0g,加入蒸储水1L,搅拌加热 至完全溶解，分装三角瓶，121c高压 灭菌15min,备用。3、操作步骤3.1 配制0.85%生理盐水。称取氯化钠8.5g溶于1

2、000mL蒸储水中。3.2 三角烧瓶加入生理盐水90mL和玻璃珠，试管中加入生理盐水 9mL, 121c灭菌30min。 （三角烧瓶个数与样品数量一致，试管数量与稀释次数相关）3.3 将1000仙L枪头、培养皿、5mL枪头、称量勺，121c灭菌30min。（注意计算数量）3.4 将枪头、培养皿置于烘箱103c烘干。（1-3步需提前一天完成）3.5 对称量房间进行紫外灭菌30分钟，关灯静置60 min。以无菌操作取样品10g于含90mL 生理盐水三角烧瓶中，于振荡器上振荡 30min,制成1:10的均匀稀释液。3.6 用1000仙L枪头吸取1:10稀释液1mL,沿管壁慢慢注入含有灭菌生理盐水 9

3、mL的试管 中，于振荡器上混合均匀，制成1:100的均匀稀释液。3.7 另去一只1mL灭菌吸管，按照上述操作方法，彳10倍递增稀释，如此每递增稀释一次， 即更换一支灭菌吸头。3.8 选择2个3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释的吸管移 1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个培养皿。3.9 稀释液移入培养皿后，及时将凉至46c ±1C的培养基（可放置46C ±1C水浴锅内保 温）注入培养皿约15mL,小心转动培养皿使试样与培养基充分混匀 （从稀释试样到倾注培精品文档养时间不能超过30min）。如估计试样中所含微生物可能在培养基平皿表面生长时，待培

4、养基完全凝固后，可在培养基表面倾注凉至 46 C ±1C的水琼脂培养基4mL o3.10 待琼脂凝固后，倒置平皿于30C恒温培养箱内培养72h战h取出，计算平板内细菌总数目，细菌总数乘以稀释倍数，即得每克试样所含细菌总数。4、细菌总数计算方法做平板菌落计数时，可用肉眼观察，如菌落形态较小可借助放大镜观察。在计算出各 平板细菌总数后，求出同稀释度的两个平板菌落的平均值。4.1 细菌总数的报告形式细菌总数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有 效数字后面的数值，以四舍五入方法修约。为了缩短数字后面的零数，也可以用 10的指数 表小。（见表1）4.2 细菌

5、总数计数的报告4.2.1 平板细菌总数的选择选择细菌总数在30-300之间的平板进行细菌总数测定，每一稀释度使用两个平板菌落 的平均数。两个平板其中一个平板有较大片状菌落生长时不宜采用；若片状菌落不到平板 的一半，而另一半菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全平皿细菌总数。4.2.2 稀释度的选择应选择平均细菌总数在3030叱间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表1中例次1）若有两个稀释度，其生长的细菌总数均在 30300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值（高稀释度数值：低稀释度数值）2,应报告其平均值；若2则报告其中较小的数字（见表1中例次2及例次3） o若所有稀释度的平均细菌总

6、数均大于300,则应按稀释度最高的平均细菌总数乘以 稀释倍数报告之（见表1中例次4）。若所有稀释度的平均细菌总数均小于30,则应按稀释度最低的平均细菌总数乘以稀 释倍数报告之（见表1中例次5）。若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释度报告之（见表1中例次6）。若所有稀释度的平均细菌总数均不在 30300之间，其中一部分 300,或者小于30 时，则以最接近30或300的平均细菌总数乘以稀释倍数报告之（见表 1中例次7）。表1稀释度选择及细菌总数报告方式例 次稀释液及细菌总数稀释液 之比稀释度选择细菌总数/CFU/g (mL)报告方式/CFU/g (mL)10-110-210-31多/

7、、 可计16420一取平均细菌总数在 30300之间 的稀释度1640016000/1.6 x 1042多不295461.630300 之间，比值(46000:3775038000/3.8 X 104精品文档可计29500) V 2,报告平均值3多/、 可计271602.230300 之间，比值(60000:27100) > 2,报告较小的数值2710027000/2.7 X 1044多/、 可计多/、 可计313一所有稀释度的平均细菌总数均 大于300,报告稀释度最高的数313000310000/3.1 X105527115一所有稀释度的平均细菌总数均 小于30,报告稀释度最低的数270270/2.7 X 10