大肠菌群得计数试验

1、大肠菌群计数实验MPN计数法一、设备与材料250ML隹形瓶3个 100ML 烧杯1个250MLs筒1个1000ML 烧杯1个15*150mnM管3个 1ML 刻度吸管4个18*180mnM管 20 个玻璃棒1个剪刀1把均质器电炉二、实验准备1、配制培养基：LST培养基得配制：杜氏小管接种环1个药匙2个天平（感量0、1g）洗耳球用天平称取17、8gLST培养基于锥形瓶中加入500ML蒸储水 加热煮沸至完全溶解分装于装有杜氏小管得大试管中，每管10ML,共10管高温灭菌备用BGLB§养基彳#配制：用天平称取20gBGLBW养基于锥形瓶中加入500ML蒸储水加热煮沸至完全溶解 分装于装有杜

2、氏小管得大试管中，每管10ML,高温灭菌备用2、生理盐水取4、25g氯化钠于大烧杯中加入500ML蒸储水溶解取225ML生理盐水于锥形瓶中分别取9ML生理盐水于3只小试管中将分装好得生理盐水进行高温灭菌3、灭菌：将均质杯、100ML烧杯、刻度吸管、剪刀、接种环、洗耳球 高温灭菌备用三、取样在提交得产品中随机抽取三箱，从每箱中随机抽取未打开包装得产品1袋3袋,抽取不低于250g得样品作为微生物指标检验试样。四、检验程序36C ± 1 d 48h ± 2hC ± 1 C 48h ± 2h36五、操作步骤初发酵试验1、称取25g样品，放人盛有 225m生理盐水

3、得无菌均质杯内 ,8 00or/min-10 000r/min 均质 1 min-2 min , 制成 1:10 得样品匀液。2、用1ml无菌吸管吸取1:10样品匀液1ml,沿管壁缓缓注人9ml生 理盐水得无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇 试管，使其混合均匀，制成1:100得样品匀液。3、换一只新得1ml无菌吸管吸取1:100样品匀液1ml,沿管壁缓缓注 人9ml生理盐水得无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液 面），振摇试管，使其混合均匀，制成1:1000得样品匀液。4、将三个连续稀释梯度得样品原液在进行10倍递增稀释时，吸取1 ml 样品匀液于LST肉汤，每个稀

4、释度接种三管。5、同时做一组空白，在一支LST肉汤中接种1ml生理盐水。6、36 c ± 1 C培养24h土 2h ,观察倒管内就是否有气泡产生，如未 产气则继续培养至48h土 2h。记录在24h与48h内产气得LST肉汤 管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。复发酵试验用接种环从所有48h土 2h内发酵产气得LST肉汤管中分别取培养物l环，移种于（BGLB肉汤管中,36 C ± 1 C培养48h±2h ,观察产气情 况。产气者，计为大肠菌群阳性管。大肠菌群最可能数（MPN ）得报告根据大肠菌群阳性管数，检索MPN表，报告每克（或毫升）样品中大肠

5、菌群得MPNg。大肠菌群最可能数(MPN)检索表阳性管数MPN95%M信限阳性管数MPN95碗信限0、10、010、001上限下限0、10、010、001上限下限000<3、09、5220214、5420013、00、159、6221288、7940103、00、1511222358、7940116、11、218230298、7940206、21、218231368、7940309、43、638300234、6941003、60、1718301388、71101017、21、3183026417180102113、6383104391801107、41、3203117517200111113、63831212037420120113、64231316040420121154、5423209318420130164、542321150374202009、21、43832221040430201143、642323290901000202204、542330240421000210153、742331460902000211204、54233211001804100212278、794333>1100420注1:本表采用3个稀释度【0、1g(mL)、0、01g(mL)与0、001g(mL),每个稀释度接种3管。注2:表内所列检样量如改用 1g(mL)、0、