氨茶碱加样回收率ppt课件

1、实验二实验二 氨茶碱加样回收率氨茶碱加样回收率 方法学调查方法学调查目的：证明所采用的分析方法适宜于相应的检测要求。目的：证明所采用的分析方法适宜于相应的检测要求。 准确度、精细度反复性、中间精细准确度、精细度反复性、中间精细度和重现性、专属性、检测限、定量限、度和重现性、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。线性、范围和耐用性。验证内容验证内容 一、一、 准确度准确度accuracyaccuracy 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。参考值接近的程度，用百分回收率表示。 原料药可用知纯度的对照品或样品进展测定

2、，或原料药可用知纯度的对照品或样品进展测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进展比较。果进展比较。 制剂可用含己知量被测物的各组分混合物进展制剂可用含己知量被测物的各组分混合物进展测定，即采用在空白辅料中参与原料药对照品的方测定，即采用在空白辅料中参与原料药对照品的方法。法。 如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中参与如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中参与知量的被测物进展测定。知量的被测物进展测定。 中药分析的准确度普通用加样回收实中药分析的准确度普通用加样回收实验衡量。中药回收率普通要求在验衡量。中药回收率普通要求在959510

3、5%105%范围内，有些方法操作步骤繁多时，范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在可要求在9090110%110%范围内，范围内，RSDRSD普通在普通在3%3%以内。以内。 测定回收率测定回收率R Rrecoveryrecovery的详细方法可采用的详细方法可采用“回回收实验法和收实验法和“加样回收实验法。加样回收实验法。 回收实验回收实验 空白空白+ +知量知量A A的对照品或规范品测的对照品或规范品测定，测定值为定，测定值为M M。%100AMR 加样回收实验加样回收实验 已准确测定药物含量已准确测定药物含量P P的真实样品的真实样品+ +知知量量A A的对照品或规范品测定，测定值的对

4、照品或规范品测定，测定值为为M M。%100APMR数据要求数据要求 规定的范围内，至少用规定的范围内，至少用9 9次次测定结果评价，如制备三个不同测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。用偏向浓度样品各测三次。用偏向d d、规范偏向、规范偏向(SD)(SD)、相对规、相对规范偏向范偏向(RSD)(RSD)变异系数表示。变异系数表示。 偏向偏向d d：丈量值与平均值之差：丈量值与平均值之差xxdi规范偏差规范偏差SDSD或或S S12nxxSi相对规范偏差相对规范偏差RSDRSD，也称变异系数，也称变异系数CVCV%100 xSRSD紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计主要构造及功能主要

5、构造及功能 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品池紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品池吸收池、检测器及放大器和记录显示系统所组成。吸收池、检测器及放大器和记录显示系统所组成。1 1、光源、光源钨灯丝和氢灯两种钨灯丝和氢灯两种钨灯丝适宜运用的范围是钨灯丝适宜运用的范围是360nm-1000nm360nm-1000nm；氢灯或氘灯适宜运用的范围是氢灯或氘灯适宜运用的范围是150nm-360nm150nm-360nm。由于玻璃会吸收紫外光，灯泡必需用石英资料。由于玻璃会吸收紫外光，灯泡必需用石英资料。 单色器是指能未来自光源的复色光按波长长短顺单色器是指能未来自光源的复色光按波长长短顺序色散为

6、单色光，并能恣意调理波长的安装。常由棱序色散为单色光，并能恣意调理波长的安装。常由棱镜和光栅组成。经棱镜或光栅色散成一系列由单色光镜和光栅组成。经棱镜或光栅色散成一系列由单色光带组成的光谱，逐个从单色器的出口狭缝射出。带组成的光谱，逐个从单色器的出口狭缝射出。 棱镜由玻璃或石英制成，玻璃色散才干大，但可棱镜由玻璃或石英制成，玻璃色散才干大，但可吸收紫外光，只能用于吸收紫外光，只能用于350-820nm350-820nm的波长测定。样品的波长测定。样品池和参比池需求配对即完全一样的两个，其厚池和参比池需求配对即完全一样的两个，其厚度光束经过溶液的途径长度普通为度光束经过溶液的途径长度普通为1mm

7、1mm、2mm2mm、5mm5mm、1cm1cm、2cm2cm、4cm4cm。如在定量测定时，所运用的。如在定量测定时，所运用的一组样品池要完全一致。一组样品池要完全一致。 2 2、单色器分光系统、单色器分光系统3 3、样品池参比池、样品池参比池 检测器是一种光电转换设备，它将光强度转变为检测器是一种光电转换设备，它将光强度转变为电信号显示出来。电信号显示出来。5.5.丈量系统丈量系统 包括放大器和结果显示安装。在主机中装有微机处包括放大器和结果显示安装。在主机中装有微机处置器，将丈量数据显示在屏幕上。置器，将丈量数据显示在屏幕上。 4.4.检测器检测器 T6T6型紫外可见分光光度计构造型紫外

8、可见分光光度计构造操作流程操作流程一、开机自检一、开机自检初始化初始化 43%43%1.1.样品池电池样品池电池 OKOK2.2.滤光片滤光片 OKOK3.3.光源电机光源电机 OKOK翻开仪器主机电源，开场初始化，翻开仪器主机电源，开场初始化，3 3分钟左右初始化完成。分钟左右初始化完成。初始化完成后，仪器进入主菜单界面。初始化完成后，仪器进入主菜单界面。光度丈量光度丈量功能扩展功能扩展系统运用系统运用二、进入光度丈量形状二、进入光度丈量形状在上图所示形状按在上图所示形状按ENTERENTER键，进入光度键，进入光度丈量界面丈量界面光度丈量光度丈量 0.000 Abs0.000 Abs 25

9、0 nm 250 nm三、进入丈量界面三、进入丈量界面按按START/STOPSTART/STOP键，进入样品测定界面键，进入样品测定界面 250.0nm -0.002 Abs 250.0nm -0.002 Abs No. Abs Conc No. Abs Conc四、设置丈量波长四、设置丈量波长按按GOTOGOTO键，在以下图界面输入丈键，在以下图界面输入丈量量的波长，例如需求在的波长，例如需求在275nm275nm丈量，输丈量，输入入275275，按，按ENTERENTER键确认，仪器将自键确认，仪器将自动调整波长。动调整波长。请输入波长请输入波长:275.0nm -0.002Abs275

10、.0nm -0.002Abs No. Abs Conc No. Abs Conc调整波长完成后如以下图调整波长完成后如以下图五、进入设置参数五、进入设置参数在这个步骤中主要设置样品池。按在这个步骤中主要设置样品池。按ENTERENTER键进入参数设定界面，按键进入参数设定界面，按键使键使光标挪动到光标挪动到“试样设定，如下图。按试样设定，如下图。按ENTERENTER键确认，进入设定界面。键确认，进入设定界面。测光方式测光方式数学计算数学计算试样设定试样设定六、设定运用样品池个六、设定运用样品池个数数在这个步骤中主要设置样品池。按在这个步骤中主要设置样品池。按键键使光标挪动到使光标挪动到“运用

11、样池数，如下图。运用样池数，如下图。按按ENTERENTER键循环选择需求运用的样品池个数。键循环选择需求运用的样品池个数。试样室：八联池试样室：八联池样池数：样池数：2空白溶液校正：否空白溶液校正：否样池空白校正：否样池空白校正：否七、样品丈量七、样品丈量按按RETURNRETURN键前往到参数设定界面，再按键前往到参数设定界面，再按RETURNRETURN键前往到光度丈量界面。键前往到光度丈量界面。在在1 1号样品池内放入空白溶液，号样品池内放入空白溶液，2 2号样品池内放入待测溶液。封锁好样品号样品池内放入待测溶液。封锁好样品池盖后按池盖后按ZEROZERO键进展空白校正，再按键进展空白

12、校正，再按STRT/STOPSTRT/STOP键进展样品丈量。丈量键进展样品丈量。丈量结果如以下图所示：结果如以下图所示： 275.0nm -0.002Abs 275.0nm -0.002Abs No. Abs Conc No. Abs Conc 1-1 0.012 1.000 1-1 0.012 1.000 2-1 0.052 2.000 2-1 0.052 2.000八、终了丈量八、终了丈量丈量完成后按丈量完成后按PRINGPRING键打印数据，假设没有打印机请记录数据。退出程键打印数据，假设没有打印机请记录数据。退出程序或封锁仪器后丈量数据将消逝。确保从样品池中取出一切比色皿，清序或封锁

13、仪器后丈量数据将消逝。确保从样品池中取出一切比色皿，清洗干净以便下次运用。按洗干净以便下次运用。按RETURNRETURN键直到前往到仪器主菜单界面后再封锁键直到前往到仪器主菜单界面后再封锁仪器电源。仪器电源。实验目的实验目的 了解药物在含量测定前进展加样回收率试了解药物在含量测定前进展加样回收率试 验的目的；验的目的； 掌握加样回收率实验详细方法；掌握加样回收率实验详细方法； 学习加样回收率计算方法。学习加样回收率计算方法。 掌握紫外分光光度计操作方法。掌握紫外分光光度计操作方法。实验原理实验原理 任何药物在进展含量检测以前，都要对该检任何药物在进展含量检测以前，都要对该检测方法的准确度、精

14、细度及仪器灵敏度等进展调测方法的准确度、精细度及仪器灵敏度等进展调查，目的是证明采用的方法能否适宜于相应的检查，目的是证明采用的方法能否适宜于相应的检测要求。其中准确度系指用该方法测定的结果与测要求。其中准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，普通用回收率真实值或参考值接近的程度，普通用回收率% %表示。加样回收率实验最终反映的是测试结果的表示。加样回收率实验最终反映的是测试结果的准确度。在测定样品时，于知被测成分含量的供准确度。在测定样品时，于知被测成分含量的供试品中再精细参与一定量的知纯度的被测成分对试品中再精细参与一定量的知纯度的被测成分对照品，依法测定。用实测值与供试品

15、中含有量之照品，依法测定。用实测值与供试品中含有量之差，除以参与对照品量计算回收率。差，除以参与对照品量计算回收率。实验仪器与资料实验仪器与资料r实验仪器：紫外分光光度计、精细天平、石实验仪器：紫外分光光度计、精细天平、石英比色皿、英比色皿、50ml50ml烧杯、玻璃棒、称量纸、烧杯、玻璃棒、称量纸、10ml10ml容量瓶、容量瓶、25ml25ml容量瓶、洗瓶。容量瓶、洗瓶。r实验资料：氨茶碱原料、蒸馏水、氢氧化钠。实验资料：氨茶碱原料、蒸馏水、氢氧化钠。r 0.01M NaOH0.01M NaOH溶液的配制：称取氢氧化钠溶液的配制：称取氢氧化钠0.4g0.4g，用蒸馏水定容至，用蒸馏水定容至

16、1000ml1000ml，即得。，即得。实验方法实验方法步骤一：规范品溶液的制备：精细称取氨茶碱规范品步骤一：规范品溶液的制备：精细称取氨茶碱规范品12.5mg12.5mg置于置于25mL25mL容量瓶中，先用少量容量瓶中，先用少量0.01M0.01M的的NaOHNaOH溶液振摇使溶溶液振摇使溶解，再用该溶液定容至刻度，配成浓度为解，再用该溶液定容至刻度，配成浓度为0.5mg/mL0.5mg/mL的规范的规范贮藏液；贮藏液；步骤二：再从规范贮藏液中汲取步骤二：再从规范贮藏液中汲取1ml1ml，置于，置于10mL10mL容量瓶中，容量瓶中，用用0.01M0.01M的的NaOHNaOH溶液定容至刻

17、度，摇匀，配成浓度为溶液定容至刻度，摇匀，配成浓度为0.05mg/mL0.05mg/mL的溶液，记为规范贮藏液，备用。的溶液，记为规范贮藏液，备用。步骤三：样品溶液的制备：从规范贮藏液中汲取步骤三：样品溶液的制备：从规范贮藏液中汲取200l200l，置于置于10ml10ml容量瓶中，用容量瓶中，用0.01M NaOH0.01M NaOH溶液定容至刻度，摇匀，溶液定容至刻度，摇匀，即得氨茶碱样品溶液，平行制备即得氨茶碱样品溶液，平行制备9 9份，再导入份，再导入9 9个试管中，个试管中，并相应做好标志；并相应做好标志；步骤四：从步骤四：从9 9个试管中分别取出个试管中分别取出5ml5ml放置于放

18、置于10ml10ml容量瓶中，容量瓶中，做好相应标志后，备用；做好相应标志后，备用；步骤五：步骤五：9 9个试管中剩余部分用于含量检测采用紫外分光个试管中剩余部分用于含量检测采用紫外分光光度法在光度法在275nm275nm处测定吸光度值处测定吸光度值A275A275，根据知规范曲，根据知规范曲线求出溶液中氨茶碱浓度，并记录。线求出溶液中氨茶碱浓度，并记录。步骤六：再从规范贮藏液中分别取出步骤六：再从规范贮藏液中分别取出0.8ml0.8ml 80% 80% 、1.0ml1.0ml100%100%和和1.2ml1.2ml120%120%溶液各三份，参与步骤溶液各三份，参与步骤四的容量瓶中，用四的容量瓶中，用0.01M0.01M的的NaOHNaOH溶液定容至刻度，摇匀并溶液定容至刻度，摇匀并做好标志