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文档简介

1、BCA法测定蛋白浓度主讲人：周芳亮【原理】：碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。【主要特点】1. 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。2. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。3. 快速：45分钟内完成测定。4. 准确灵敏, 线性范围广。5. 经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。 【实验器材与试剂】1器材: 分光光度计、恒温水浴锅。2. 试剂: BCA试剂盒；待测样品。【操作步骤】 1.配制BCA工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂

2、加1体积Cu试剂（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀。 2. 稀释标准品：用生理盐水稀释蛋白标准品BSA。实验步骤实验步骤实验步骤实验步骤200蛋白液稀释5、按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品（原液，1：10,1:100稀释液）各150 l分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。6、向每个试管中各加入3 ml BCA工作液，充分混匀，37水浴中孵育30分钟 ，将各管冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。7、用分光光度计在562 nm处，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。8、绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。【注意事项】： 1.标本的充分混匀。 2.要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白样品均需做复孔, 每次均应做标准

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