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文档简介

1、乳与乳制品微生物检验鲜乳中抗生素残留检测YLNB 3.5方法一：1. 引用依据：GB/T4789.27-20032. 范围本方法适用于能杀灭嗜热乳酸链球菌的各种常用抗生素 的检验3. 仪器及器材2.1冰箱：4C-20C；2.2恒温培养箱：36 1C；2.3恒温水浴锅：36 1C、79 1C；2.4 天平；2.5灭菌吸管：1ml、10 ml ；2.6灭菌试管：16mn 160mm2.7 100C温度计；2.8 蜡笔；2.9 灭菌广口瓶或三角烧瓶：容量为 500ml ；2.10 灭菌玻璃珠：直径约 5mm2.11 酒精灯；2.12 试管架；2.13 灭菌刀、剪子、灭菌镊子等。4.菌种、培养基和试剂

2、3.1 菌种：嗜热乳酸链球菌。3.2 脱脂乳：经 113C灭菌 20min。3.3 4 %2, 3, 5-氯化三苯四氮唑 （TTQ 水溶液： 称取 1gTTC, 溶于 5ml灭菌蒸馏水中，装褐色瓶内于7C冰箱保存，临用时用灭菌蒸馏水稀释至五倍。如遇溶液变为玉色或淡褐色，则不能再使用。5.检验程序鲜乳中抗生素残留检验程序见下图。6. 方法6.1 菌液制备：将菌液移种脱脂乳， 经 36 1C培养 15h 后， 以灭菌脱脂乳 1 : 1 稀释待用。6.2 取检样 9ml 于试管内，80C水浴加热 5min 冷却 37C以下，加菌液 1ml, 36 1C水浴培养 2h,加 TTC 0.3ml, 36

3、1C水浴培养 30min,观察如为阳性，再于水浴中培养 30min 作第二次观察，每份检样作两份，另外再作阴性和阳性对照 各一份，阳性对照管用 无抗生素的乳 8ml 加抗生素及菌液和TTC 阴性对照管用无抗生素乳 9ml 加菌液和 TTG7.判断方法：准确培养 30min 观察结果，如为阳性，再继 续培养 30min 作第二次观察。观察时要迅速，避免光照过久 发生干扰。乳中有抗生素存在，则检样中虽加菌液培养物，但因细菌的繁殖受到抑制，因此指示剂 TTC 不还原，不显色。与此相反，如果没用抗生素存在， 则加入菌液即行增殖，TTC 被还原而显红色，也就是说检样呈乳的原色为阳性，呈红色 为阴性。具体内容见表 1 和表 2。表 1 显色状态判断标准显色状态判断未显色者阳性微红色者可疑桃红色-红色阴性表 2 检测各种抗生素的灵敏度抗生素名称最低捡出量青霉素0.004 单位链

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