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文档简介

1、标记物制备与鉴定125125I I- -125125I I或或125125I I+ +125125I-I-标记物标记物（混合物）（混合物）Ch-TCh-T、LPOLPO氧化氧化取代反应取代反应直接标记法化学或酶促反应，将化学或酶促反应，将放射性负电碘离子氧放射性负电碘离子氧化成碘原子或正电碘化成碘原子或正电碘离子，通过取代反应离子，通过取代反应置换被标记物分子中置换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原及组胺残基上的氢原子。子。 n 使用无还原剂的高使用无还原剂的高比放射性碘源比放射性碘源n 被标记物用量要少被标记物用量要少n ch-Tch-T用量要低用量要低n

2、控制总反应体积控制总反应体积200l200ln 反应时间反应时间1-21-2分钟分钟n 弱碱性反应条件弱碱性反应条件 bolton-Hunter间接标记法 联接标记联接标记( ( bolton-Hunter ) )预先将预先将125125I I 用用ch-T法标记琥珀酰法标记琥珀酰 胺酯，制成的胺酯，制成的125125I I 化化 脂功能基团可与蛋白脂功能基团可与蛋白 分子上的氨基酸残基分子上的氨基酸残基 反应，从而使待标记反应，从而使待标记 物被碘化。物被碘化。 聚合、聚合、损伤物损伤物 标记蛋白标记蛋白游离游离125125I I125碘-标记物的制备纯化 凝胶过滤法 离子交换层析法 聚丙烯

3、酰胺 凝胶电泳 高效液相色谱法125碘-标记物的制备鉴定放射化学纯度l 单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率l 应大于95%免疫活性l 标记物与抗体结合的能力l 标记物与过量抗体反应百分比l 该值越大, 标记物免疫活性好 结果准，结果准，测定复杂测定复杂比放射活性l单位化学量标记物中含单位化学量标记物中含的放射性强度的放射性强度l单位：单位：Ci/g Ci/g mCi/mgCi/mmol mCi/mgCi/mmol l比放射性过高，将影响比放射性过高，将影响标记物免疫活性标记物免疫活性 计算法：依据标记反应中放射性核素的利用率（标记率）来计算标记物的比放射性. 自身置换法 ：

4、比较标记抗原与标准抗原的免疫活性来测定标记物的比放射性 结果结果欠欠准，准，计算计算简便简便比放射性计算法 自身置换曲线自身置换曲线 l反应系统：限量Ab和递增剂量(cpm)的标记抗原l标记抗原的结合率(B/T%)随标记抗原总量的增加而减少 l两条曲线平行,若标记抗原与标准品抗原具有相同的免疫活性标准曲线 l反应系统:抗体（限量）、标记抗原（定量）和剂量递增的标准抗原组成 l标记抗原与抗体的结合率(B/T%)随标准抗原的增加而竞争抑制性减少 比放射性=自身置换法比放射性自身置换法标准曲线与自身置换曲线平行 表明在相同的放射性结合水平上，二实验中抗体上结合的抗原物质总量相同 计算置换曲线平行段某结合率的放射性强度(cpm/ml换算为nCi/ml) 计算标准曲线平行段相应结

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