王雅琳 薄层色谱

1、色谱分离技术色谱分离技术王雅琳王雅琳2014.11.06薄层色谱（薄层色谱（TLC） 柱色谱（柱色谱（CC）2 气相色谱（气相色谱（GC）3薄层色谱（薄层色谱（TLC） 高效液相色谱（高效液相色谱（HPLC）4薄层色谱薄层色谱 薄层色谱，又称薄层色谱，又称薄层层析薄层层析，常用，常用TLCTLC表示。表示。 将固定相在玻璃、金属或塑料等光洁的表面上均匀的铺成薄层，试样点在薄层的一端，流动相借毛细作用流经固定相，使被分离的物质展开。固定相：固定相：固体吸附剂。流动相：流动相：液体展开剂。特点：特点：方法简便易行,价格低廉；分析快速（展开时间短）；分离效果高；需要样品量少；应用广泛；范围：范围：适

2、用于挥发性较小或在较高温度下易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。一、基本原理一、基本原理（一）吸附色谱分离原理（一）吸附色谱分离原理利用固定相对各组分吸附力的大小及展开剂解吸附作用的差异进行分离。使吸附能力较强或溶解度较大的组分随展开剂移动速度慢，吸附力弱的组分随展开剂移动快。溶剂溶剂前沿前沿起始线起始线ABabc（二）比移值（二）比移值R Rf f：原原点点到到溶溶剂剂前前沿沿的的距距离离原原点点到到斑斑点点中中心心的的距距离离 fRcbRcaR)b(f)a(f Rf是薄层色谱法基本定性参数，一定条件时Rf为定值，可用范围Rf值在0.150.75之间。被分离的物质极性越大，越易被吸附，Rf

3、越小,反之越大。二、吸附剂与展开剂二、吸附剂与展开剂（一）吸附剂（固定相）的选择（一）吸附剂（固定相）的选择常用吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺。吸附剂的选择要合适，与流动相、被分离化合物不反应。(1）硅胶：硅胶：a.a.极性吸附剂，应用范围广；b.b.物理吸附为主，氢键吸附为辅;c.c.略带酸性，不直接用于碱性成分的分离;d.d.吸附容量大，与羟基数目有关.硅胶商品名称硅胶商品名称黏合剂黏合剂荧光添加剂荧光添加剂应用应用硅胶硅胶H H无无无无薄层色谱，柱色谱薄层色谱，柱色谱硅胶硅胶G G有有无无薄层色谱，柱色谱薄层色谱，柱色谱硅胶硅胶GFGF254254有有有有在在254nm254nm紫外灯下看

4、荧光紫外灯下看荧光(2)氧化铝：氧化铝：a.a.极性吸附剂，较硅胶强；b.b.物理吸附为主，氢键吸附为辅；c.c.略带碱性，不直接用于酸类成分的分离。氧化铝极性比硅胶大，适用于分离极性较小的化合物（烃、醚、酮、醛、卤代烃等），因为极性化合物被氧化铝较强烈吸收，分离较差，Rf值较小；相反，硅胶适用于分离极性较大的化合物（羧酸、醇、胺等），而非极性化合物在硅胶板上吸附较弱，分离较差，Rf值较大。（二）展开剂（流动相）的选择（二）展开剂（流动相）的选择选择原则：选择原则：展开剂应该对被分离的物质有一定的溶解度（相似相溶）。展开剂对被分离组分有一定的解吸能力，但又不能太大。 待测组分Rf值在0.15-

5、0.75之间。常见溶剂极性大小：常见溶剂极性大小： 石油醚环已烷四氯化碳苯甲苯 乙醚三氯甲烷（氯 仿）乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水冰醋酸三、薄层色谱分类三、薄层色谱分类使用目的：定性薄层色谱：分析和鉴别。制备薄层色谱：分离和提纯。二者原理相似，主要区别在于样品和吸附剂的用量。 吸附剂厚度鉴别的TLC制备TLC0.25mm至少3mm（一）薄层色谱分离操作（一）薄层色谱分离操作1 1、薄层色谱板的制备、薄层色谱板的制备3 3、点样、点样4 4、展开、展开5 5、显色、显色2 2、活化、活化1 1、薄层色谱板的制备、薄层色谱板的制备要求：要求：玻璃板需光洁，否则吸附剂易脱落；大小由需求决定。薄层板分

6、类和制法：薄层板分类和制法：软板的制备硬板的制备 软板软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂。 多用于氧化铝薄层板的制备。（实验室：硅胶GF254）优点：优点：方法简便、随用随铺、展开速度快。缺点：缺点：吸附剂易脱落、只能用与平面约15的近水平展开，效果差。（1 1）软板制备（干法铺板）软板制备（干法铺板）浸渍法浸渍法：将两块大小一致的干净玻璃板背靠背紧贴，缓慢、均匀地浸入调制好的吸附剂中，取出后分开晾干。软板制备不宜过快及停顿，否则厚薄不均匀影响层析效果。用硫酸钙为粘合剂铺成的板称为硅胶G板；用羧甲基纤维素钠作黏合剂铺成的板为硅胶-CMC板。(2)(2) 硬板制备（湿法铺板）硬板制备

7、（湿法铺板）硬板硬板：吸附剂加粘合剂制成的板。可用于硅胶、氧化铝、聚酰胺等薄层板的制备，但常用的还是硅胶硬板。常用的粘合剂：煅石膏（ 2CaSO4H2O ） 羧甲基纤维素钠（CMC-Na） 机械强度差，易脱落，但不易腐蚀 机械强度好，不易脱落，但易腐蚀制备：制备：硅胶中逐渐加羧甲基纤维素钠水溶液（7-8g/1000mL），调成均匀的糊状，超声，用药勺涂于洁净玻璃片上，均匀铺开，注意不要引入小气泡，将带浆玻璃片在水平桌面上下轻微震动数次，并不时旋转方向，颠制成薄厚均匀、表面光滑平整、没有气孔的薄层板，室温条件下晾干。2 2、活化、活化硅胶和氧化铝含水量越多，吸附活性越弱。硅胶和氧化铝含水量越多，

8、吸附活性越弱。 只要在110左右加热，这些“自由水” 就能被可逆性地除去。利用这一原理可以对吸附剂进行活化（去水）和脱活化（加水）处理，以控制吸附剂的活性。 将晾干后的薄层板放入烘箱中，缓慢升温至110，恒温30min后取出，冷却，置于干燥器中备用。注：注：不可将刚铺好的薄层板立即烘烤活化，否则板子会裂口。点样工具：点样工具：玻璃毛细管或微量点样器 点样位置：点样位置：距底边约1cm的起始线上，点与点的距离为1-1.5cm,斑点直径一般不超过2mm。点样方式：点样方式：圆点状点样。样品溶解：样品溶解：用甲醇、氯仿、乙酸乙酯、石油醚、丙酮等挥发性有机溶剂，最好选用与展开剂极性相似的溶剂。注意事项

9、注意事项 ：动作要轻，毛细管不能混用；点样量勿超载，防止拖尾；样品浓度较稀时，可多次点样，每次点样后要晾干后方可再点 ； 3 3、点样、点样 4 4、展开、展开展开方式：展开方式：上行展开展开过程：展开过程：按一定比例配好展开剂，将展开剂（一般210mL）倒入层析缸，待层析缸被展开剂饱和后（平衡系统），再迅速将点样薄层板放入，在密闭环境下展开。当溶剂移动到接近薄层上端1cm处，取出薄板，划出溶剂前沿，将溶剂吹干。注意事项：注意事项：a、展开剂不浸没样品点。b、薄层板呈倾斜状。c、展开过程应在密闭容器中进行。5 5、显色、显色显色也称定位，即用某种方法使经色谱展开后的混合物斑点呈现颜色，以便观察

10、其位置。常见的定位方法：常见的定位方法： 光学检出法：紫外照射法 试剂检出法：浸渍显色法（ KMnO4 ），喷雾显色法（浓H2SO4，FeCl3）(1)蒸气检出法：碘蒸气显色法1、碘：主要针对不饱和或者芳香族化合物配制方法 ：在100mL广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。或者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅胶 ；2、高锰酸钾：主要针对含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛配制方法 ：1.5g KMnO4+10g K2CO3 +1.25mL10%NaOH +200mL水，使用期3个月；3、紫外灯：主要针对含共轭基团的化合物，芳香化合物。常用常用显色剂的显色目标物及其配制方法：显色剂的显色目标物及其配制方法：（二）制备薄层色谱（二）制备薄层色谱（PTLCPTLC）用作制备的薄层色谱。分离多达500mg的样