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文档简介

1、生物实验：THP-1细胞培养THP-1是人外周血的单核细胞系,最初来源于急性单核细胞性白血病患者.属于悬浮细胞,适合用于转染或感染实验.具外表抗原HLA型为：A2, A9 , B5 , DRw1 ,DRw2.工具/原料 培养基：RPMI-1640 (Invitrogen #11875-093) 胎牛血清：Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO #10099-141) 二甲亚碉：DMSO (SIGMA D2650) 双抗 P/S (Penicillin/Streptomycin) (GIBCO #15140-122 )方法/步骤1. 1细胞培养：THP-1细胞培养于含有10

2、%FBS+1%P/S 的RPMI-1640 培养基中,培养环境为37 C, 5%CO2 0可以每隔3-4天加一些新鲜的培养基,或直接传代.2. 2细胞传代：当细胞密度到达约 8x10A5cells/ml左右时,即可进行传代.由于是悬:浮细胞,可直接将细胞吸出,离心之后传代.传代最少浓度不应少于1x10A5 cells/ml3. 3:细胞冻存：取差不多1x10A7个细胞,用1ml含有10%DMSO的FBS重悬,转入:冻存管,于-80 C冰箱过夜.第二天移入液氮中长期保存.END考前须知 细胞养不好,可能的原因有,THP-1细胞特别依赖细胞浓度,ATCC上10 5到106 每ML,是一个很高的密度

3、,细胞少了就不太容易养好. 细胞株的来源很重要,如直接来源于 ATCC American Type Culture Collection 美 国模式菌种保藏中央生命力要强于国内细胞库的. 注意细胞的密度一定要高,介于 5X105 106/ML之间,增值的快.细胞数量太 少,不适合THP-1生长,一般状态不好的THP-1在培养了 3天后数量仍然不多,继 续培养一天或者两天,培养基 严重泛黄,细胞数会增加.这一点不同于同是单核细胞 系的U937细胞. THP-1细胞适合在细胞Ph环境偏酸性环境生长,对培养基变化非常敏感,所以 尽量 使用相同Ph的1640. 传代后切忌常移出培养箱观察,否那么会影响细胞生长,状态变差,一般首先表现为细 胞内颗粒变多.一般THP-1生长相当快,对于状态已经不好的情况,建议传代后34天再观察,一般4天时间培养基已明显泛黄,细胞数量巨增；1THP-1细胞喜欢酸性 条件,你不要老是换培养基.越酸的条件,细胞密度越大,细胞就长得越好；2不要频繁换液,一般2-3次换液离心一次只是补充培养基3使用1640 ATCC推荐, 注意加碳酸氢钠2

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