副溶血性弧菌

1、第 七节、副溶血性弧菌检验一、生物学特性二、致病性三、检验方法第 七节、副溶血性弧菌检验一、生物学特性1、形态与染色 革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌或稍弯曲弧菌 ，有时呈棒状、甚至球状、丝状等。一般两极浓染。单端鞭毛，长度约为菌体的2倍，运动活泼。无芽胞、无荚膜。 2、培养特性本菌对营养要求不高，在普通的琼脂或蛋白胨水中均可生长需氧特别强，在厌氧条件下生长非常缓慢嗜盐，在2%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐10%不能生长。最适温度36，pH7.57.8在肉汤、蛋白胨水等培养基中呈现浑浊，表面形成菌膜在固体培养基上菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐。在血平板上可见溶血环。

2、3、生化特性 分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。 H H2 2S S（）、V-PV-P（）、靛基质（吲哚试验）（+ +）、精氨酸（） 甲基红（+ +）、赖氨酸（）、溶血/-/-V.P反应 检测某种细菌分解碳水化合物产生乙酰甲基甲醇CH3CH（OH）COCH3的反应。通常把细菌培养在葡萄糖蛋白胨液体培养基中，加入强碱可见显有红色。此反应用于细菌的鉴别 细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 色氨酸 吲哚（无色）对二甲基氨基苯甲醛 玫瑰吲哚（红色，+ 大肠杆菌） 不产吲哚（无色，- 产气杆菌） 试验方法：取培养24h

3、培养液，先加入少量乙醚，摇动试管以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。 应用：用于肠道杆菌的鉴定6 有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。 酚红： 黄色 红色（+ 普通变形杆菌） 黄色（- 大肠杆菌） 试验方法：挑取1824h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇匀，于361培养，观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。培养24h左右，观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最

4、终判定，变为粉红色为阳性。7 有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类和二氧化碳。此反应在偏酸的条件下进行，当培养基含胺类时呈碱性反应，使指示剂变色。接种与观察结果：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。接种后封油，对照管与测定管同时接种封油。肠肝菌科的细菌于37培养4天观察。 当指示剂（溴甲酚紫）呈紫色或带红色调的紫色者为阳性，呈黄色者为阴性。对照管应呈黄色反应。 8 试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置361培养1824h，观察结果。 培养基：乳糖：蔗糖：葡萄糖=10：10：1；加有酚红 本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。

5、 只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。9O抗原（菌体抗原）：O1O13 13种。H抗原（鞭毛抗原）：K抗原（荚膜抗原）：K1K71 65种。（ 缺编：K2 、 K14 、K17、 K35、 K62）血清分型：所有副溶血性弧菌的H 抗原均相同，但是O 抗原和K 抗原存在差异，以13种O抗原及65种K抗原将其分为13个群和845个型。4、抗原结构结构二、致病性1、致病因素侵袭力：活菌(105107/g)，可使人致病 .产生

6、溶血毒素：内毒素，成分是脂多糖，10030min不被破坏。2、媒介食品 主要是海产品（鱼、虾、蟹、蛤等），含盐量较高的食物亦可带菌。3、所致疾病 食物中毒、急性胃肠炎、败血症等。 二、致病性4、预防措施 （1）海产品加工前用消毒水冲洗干净，接触过海产品的厨具、容器和手及水池等均要洗刷干净，以免污染食品 （2）若要吃凉拌菜应充分洗净，现在沸水中烫后，加醋，放置10min后，再放其他调味剂 （3）严格执行生熟食品分开制度 （4）剩饭菜，在食用前要回锅热透 1、检验标准：GB/T 4789.7-2008 副溶血性弧菌检验2、培养基和试剂培养基： 3氯化钠碱性蛋白陈水APW) 、 硫代硫酸盐-柠檬酸盐

7、-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂 3氯化钠胰蛋白胨大豆TSA）琼脂 3氯化钠三糖铁（TSI ）琼脂 嗜盐性试验培养基 3氯化钠甘露醇试验培养基 3氯化钠赖氨酸脱狡酶试验培养基 3氯化钠MR-VP 培养基 氯化钠结晶紫增菌液 试剂：氧化酶试剂、革兰氏染色液、革兰氏染色液、3%氯化钠溶液、 V-P试剂、甲基红试剂、靛基质试剂等。三、检验方法3、检验程序（1）样品处理及培养 定量测定：样品用3%氯化钠蛋白胨水 10倍连续稀释后取三个稀释度各接3支含有该培养基的平皿，培养计数。 定性试验（2）分离培养：首先将样品接种到氯化钠琼脂平板和ss琼脂平板各一个，培养18-24h观察。也可增菌液直接分离。（3）可以

8、菌落培养：挑取上述可疑菌落，转种3.5%氯化钠三糖铁斜面，观察结果（下部变黄，有动力，不产H2S）（4）涂片镜检：挑取可疑培养物镜检。（5）嗜盐性试验：将上述培养物接种无盐胨水、7%、11%氯化钠胨水。（6）生化试验：V-P、靛基质、甲基红试验等（7）动物实验：（选做）初步鉴定：挑取纯培养的单个可疑菌落，进行副溶血性弧菌的初步鉴定：副溶血性弧菌：氧化酶试验：阳性。涂片镜检：G-，棒状、弧状、卵圆状等多形态，无芽胞，有鞭毛。3氯化钠三糖铁斜面 ：底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变或红色加深，有动力。嗜盐性试验：分别接种于不同氯化钠浓度的胰胨水中培养，在无氯化钠和10氯化钠的胰胨水中不生长或微弱

9、生长，在7氯化钠的胰胨水中生长旺盛。生化试验：分别接种各类生化培养基，培养后观察结果。或API 20E 生化鉴定试剂盒或VITEK全自动微生物检测系统鉴定。生化性状符合下表要求时，为副溶血性弧菌 。确定鉴定:项目项目 结果结果项目项目 结果结果革兰氏染色镜检革兰氏染色镜检阴性，无芽孢阴性，无芽孢乳糖乳糖 氧化酶氧化酶 硫化氢硫化氢动力动力 赖氨酸脱梭酶赖氨酸脱梭酶 蔗糖蔗糖V-P 葡萄糖葡萄糖 ONPG 甘露醇甘露醇分解葡萄糖产气分解葡萄糖产气 表 副溶血性弧菌的生化性状定性检测：报告25g（ml）样品中是否检出副溶血性弧菌。定量检测：根据证实为副溶血性弧菌阳性的试管管数，查MPN检索表，报告每克（毫升）副溶血性弧菌的MPN值。报告：思考题1. 副溶血性弧菌检验程序注意事项3、生化特性 分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。 H H2 2S S（）、V-PV-P（）、靛基质（吲哚试验）（+ +）、精氨酸（） 甲基红（+ +）、赖氨酸（）、溶血/-/- 细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生